中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (7): 798-800   PDF    
引用本文
廖佩花, 马彦清, 曾同霞, 陈波, 杨磊, 李锋, 何玲, 秦江梅. 哈萨克族食管癌与HLA-DR9等位基因关系[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(7): 798-800.
LIAO Pei-hua, MA Yan-qing, ZENG Tong-xi, et al. Case-control study of HLA-DR9 gene polymorphism and genetic factors of esophageal cancer in Kazakh[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(7): 798-800.
哈萨克族食管癌与HLA-DR9等位基因关系
廖佩花1, 马彦清2, 曾同霞1, 陈波3, 杨磊1, 李锋1, 何玲1, 秦江梅1     
1. 石河子大学医学院预防医学系 新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室, 新疆 石河子 832002;
2. 新疆伊犁哈萨克自治州友谊医院肿瘤外科;
3. 石河子大学医学院第一附属医院儿科
收稿日期: 2008-11-27
基金项目: 国家自然科学基金(30660161);国家重点基础研究发展规划资助项目(973计划)(2005CCA03700);2006年教育部科学技术研究重点项目(206167);国家“973”计划前期研究专项(2007CB516804)
作者简介: 廖佩花(1982-), 女, 湖南人, 硕士在读, 研究方向; 肿瘤分子流行病学。
通讯作者: 秦江梅
摘要: 目的 探讨人类白细胞抗原DR9(HLA-DR9)等位基因与新疆哈萨克族食管癌的相关性. 方法 采用1:2成组匹配病例对照研究, 共收集哈萨克族食癌新发病例170例, 对照340人, 进行问卷调查, 并采静脉血3 mL检测HLA-DR9等位基因频率; 采用Logistic回归模型及交互作用进行统计分析. 结果 病例组和对照组HLA-DR9等位基因频率分别为22.9%, 9.1%, 差异有统计学意义(χ2=18.29, P=0.000, OR=2.97);病例组和对照组有食管或胃病变史分别占26.5%, 12.9%, 差异有统计学意义(χ2=14.40, P=0.000, OR=2.42);病例组和对照组有食管癌家族史者分别占18.20%, 8.80%, 差异有统计学意义(χ2=9.53, P=0.002, OR=2.31).Logistic回归分析及交互作用显示, HLA-DR9等位基因、食管或胃病变史以及食管癌家族史是哈萨克族食管癌的危险因素, 且后2者均与HLA-DR9等位基因存在交互作用. 结论 HLA-DR9等位基因为哈萨克族食管癌的易感基因, 与食管或胃病变、食管癌家族史之间存在交互作用.
关键词： 哈萨克族     食管癌     人类白细胞抗原DR9(HLA-DR9)等位基因     病例对照研究    
Case-control study of HLA-DR9 gene polymorphism and genetic factors of esophageal cancer in Kazakh
LIAO Pei-hua, MA Yan-qing, ZENG Tong-xi, et al     
Laboratory of Xinjiang Endemic and Ethnic Diseases, Shihezi University, Shihezi 832002, China
Abstract: Objective To evaluate the association between HLA-DR9 genetic polymorphisms and esophageal cancer (EC) in a Kazakh population of high incidence area at Xinjiang, China. Methods A case-control study was conducted with 170 EC cases and 340 controls.HLA-DR9 was identied by PCR-SSP.Logistic regression model was performed to identify fisk factors.The strata method was adopted in interaction analysis. Results The frequency of HLA-DR9 gene in the cases and controls were 22.9% and 9.1%, respectively, with significant difference (χ2=18.29, P=0.000, OR=2.97).The genotype frequncy of esophageal cancer was different from that of the controls (χ2=18.29, P=0.000;OR=2.97, 95% Cl:1.78-4.96).The proportion of history of esophageal or stomach disease in esophageal cancer group was 26.5%, while the proportion was 12.9% in the controls (OR:2.42, 95% Cl:1.52-3.86).Family history of esophageal cancer was 18.20% in cases, while the proportion was 8.80% in the controls (OR:2.31, 95% Cl:1.34-3.96).Multivariate Logistic regression analysis showed that HLA-DR9 genotype, history of esophageal or stomach disease and family history of esophageal cancer were risk factors of esophageal cancer.Gene-environment interaction analysis showed there was an interaction of HLA-DR9 genotype with history of esophageal or stomach disease and family history of esophageal cancer. Conclusion The HLA-DR9 genotype, history of esophageal or stomach disease and family history of esophageal cancer are important risk for EC, and there is a synergistic interation between HLA-DR9 gene and the history of esophageal or stomach disease and family history of esophageal cancer.HLA-DR9 gene can be used as biomarker for prevention of EC in Kazakh population.
Key words: Kazakh     esophageal cancer     HLA-DR9     case-control study    

哈萨克族是食管癌高发民族。研究显示, 哈萨食管癌高发与少食蔬菜水果、吸烟饮酒相关, 且这些与相关代谢基因亚甲基四氢叶酸还原酶(C677T)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)多态性存在交互作用〔1-3〕。人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)基因是控制机体免疫应答和免疫调节的重要基因, 决定免疫系统的遗传性, 并以高度的多态性成为人类重要的遗传标记。林军等〔4〕对湖北汉族人群食管癌进行HLA-PRB1的基因分型。结果显示, HLA-DR9是湖北汉族人群食管癌的易感基因。为进一步探讨新疆哈萨克族食管癌高发的病因机制, 本研究从遗传因素和免疫相关基因角度探讨该人群食管癌高发病因。

1 对象与方法 1.1 对象

2004年11月-2008年5月, 在新疆北部伊犁、塔城地区哈萨克族聚集的6所医院收集经组织病理学确诊、并在此地区居住20年~的哈萨克族新发食管癌病例共170例; 对照按照同性别、同民族、年龄相差≤5岁、同一个居住地, 1: 2成组匹配, 其中40人来源于门诊做胃镜者中非食道病变者, 300名来源于同一乡镇或市区的正常人群, 共计340人。

1.2 问卷调查

采用自行设计的调查表进行问卷调查。内容包括: (1)一般情况:年龄、饮茶、饮水、婚姻状况等社会学指标; (2)饮食、生活习惯:包括吸烟史、饮酒史、饮茶、饮水、新鲜蔬菜水果摄入、蛋白摄入、热烫饮食、不规律饮食、特色饮食等; (3)病史:消化道疾病史及食管癌家族史。

1.3 实验方法 1.3.1 主要试剂与仪器

DNA基因组小量抽提试剂盒Ⅱ与IIPUC19DNA/MspI (HpaII) Marker (上海生工公司); 琼脂糖(上海捷瑞公司); PCR扩增试剂:三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTP), Taq酶, 10 × PCR Buffer (大连宝生物公司)。紫外分光光度仪(北京普析通用仪器公司); PCR仪(德国Biometra公司); 离心机(德国Thermo公司)。

1.3.2 DNA抽提

抽取研究对象静脉血3 mL, 乙二胺四乙酸钠盐-K2(EDTA-K2)抗凝, 分装, -80 ℃低温保存。在200 μL血样中加400 μL细胞裂解液混匀, 再加入6 μL蛋白酶K混匀, 55 ℃水浴30 min; 加入600 μL氯仿混匀; 10 000 r/min离心3 min, 取500 μL上层清液, 置于无菌1.5 mL离心管中; 加入500 μL蛋白沉淀液混匀, 室温放置2 min, 10 000 r/min离心3 min; 吸去上清, 加入300 μL冰冷无水乙醇, -20 ℃冰箱放置30 min, 离心10 min, 吸去乙醇, 倒置, 室温干燥10 min; 加入100 μL三羟甲基氨基甲烷-乙胺乙酸二钠溶解; 4 ℃冰箱过夜; 0.7%的琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪检测所提DNA的质量和浓度。

1.3.3 PCR扩增

HLA-DR9等位基因检测的引物设计参照文献〔5〕, 上游引物为3'-CCGCTGCACTGTGAAGCTCT-5', 下游引物为5'-GGACGGAGCGGGTGCGGTATC-3'。PCR反应总体积25 μL, 基因组DNA 2 μL, 上游引物和下游引物各0.8 μL, dNTP 2.0 μL, Taq酶(5 U/μL) 0.2 μL, 10 × PCR Buffer (含Mg2+) 2.5 μL。PCR扩增条件为: 94 ℃预变性5 min, 94 ℃ 30 s, 62 ℃ 45 s, 72 ℃ 45 s, 共35个循环, 最后72 ℃延伸10 min。

1.3.4 PCR扩增产物的检测和鉴定

PCR扩增的目地片断为193 bp, 用2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。用PUC19DNA/MspI (HpaII) Marker (26-501 bp)作为参照, 检测阳性样本目的片段。PCR扩增产物均送上海生工公司测序。将测序结果在美国国立生物技术信息中心(NCBI)上进行同源序列比对软件比对, 确定为HLA-DR9基因, 同源性为98%。

1.3 统计分析

使用Epidata建立数据库, 采用SPSS 13.0软件进行χ2检验, 比较HLA-DR9等位基因在病例和对照组中的分布差异; 多因素Logistic回归进行危险度分析。

2 结果 2.1 一般情况

调查对象均为哈萨克族, 病例组170例, 其中男性112例, 女性58例; 对照组340人, 其中男性197人, 女性143人, 2组性别分布差异无统计学意义(χ2=2.99, P=0.084)。病例组平均年龄为(58.78±9.92)岁, 对照组平均年龄为(57.72±9.69)岁, 2组年龄差异无统计学意义(t=1.16, P=0.249)。

2.2 HLA-DR9等位基因与哈萨克族食管癌的关系

在病例组中, 39例携带HLA-DR9等位基因, 基因频率为22.9%;在对照组中, 31例携带HLA-DR9等位基因, 基因频率为9.1%, 2组差异有统计学意义(χ2=18.29, P=0.000), OR为2.97, 95% CI=1.78~4.96。

2.3 消化道疾病史与哈萨克族食管癌的关系

病例组有食管或胃疾病史45例, 占26.5%;对照组有食管或胃疾病史44人, 占12.9%, 2组差异有统计学意义(χ2=18.29, P=0.000), OR为2.42, 95% CI=1.52~3.86;病例组有食管癌家族史31例, 占18.2%, 对照组有食管癌家族史44人, 占8.8%, 2组差异有统计学意义(χ2=9.53, P=0.002), OR为12.31, 95% CI=1.34~3.96。

2.4 哈萨克族食管癌的多因素Logistic回归分析

将食管或胃疾病史、食管癌家族史、HLA-DR9等位基因等变量引入多因素非条件Logistic回归模型, 用逐步法进行分析结果显示, 有食管或胃疾病史的个体患食管癌的风险是无疾病史的2.43倍(95% CI=1.51~3.93);有食管癌家族史个体患管癌的风险是无家族史的2.18倍(95% CI=1.25~3.80); HLA-DR9等位基因阳性表达与哈萨克族食管癌有关, 其OR为3.13, 95% CI=1.85~5.29。食管或胃疾病史、食管癌家族史、HLA-DR9等位基因阳性携带均增加哈萨克族患食管癌的风险。

2.5 消化道疾病史、食管癌家族史与HLA-DR9等位基因交互作用(表 1)
表 1 各因素间交互作用分析

将有无食管或胃疾病史与HLA-DR9等位基因做交互作用分析, 2因素单独作用时发生食管癌的危险性分别为3.16和2.57, 共同作用时为7.60, > 2个因素单独作用时之和, 符合相加模型。将有无食管癌家族史与HLA-DR9等位基因做交互作用分析, 因素单独作用时的危险性分别为2.90和2.25, 共同作用时的危险性为9.19, 说明食管癌家族史与HLA-DR9等位基因阳性表达存在交互作用。

3 讨论

HLA与多种疾病相关性的研究得到日益重视。研究显示〔5-7〕, HLA-DR9与1型糖尿病(T1DM)、急性淋巴细胞白血病(ALL)以及系统性红斑狼疮(SLE)等多种疾病之间存在着密切的关系, 但其确切的致病机制目前仍不明确。有学者认为, HLA基因不直接造成疾病的发生, 可使肿瘤细胞避开机体的免疫杀伤而增殖。有研究显示, 患者体内HLA-Ⅰ类分子表达下调或缺失与食管癌的发生和发展有关〔8〕。

本研究检测结果显示, 病例组中HLA-DR9的携带率(22.9%)高于对照组(9.1%), HLA-DR9等位基因为新疆哈萨克族食管癌的易感基因, HLA-DR9等位基因阳性将增加哈萨克族近3倍患食管癌的风险, 与林军等〔4〕的研究结果一致。研究还发现, 食管或胃疾病史以及食管癌家族史也是哈萨克族食管癌发病的危险因素, 2者都能增加食管癌的患病风险, 并且2者与HLA-DR9等位基因存在交互作用, 既有食管或胃疾病史或食管癌家族史, 同时又有HLA-DR9等基因阳性表达的个体发生食管癌的危险性显著增加。

参考文献
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