2. 广州达安临床检验中心
人乳头瘤病毒(HPV)是一组小DNA病毒, 主要侵袭皮肤黏膜组织。目前已发现100多种HPV基因型, 其中大约有40种与肛门生殖器区域感染有关, 引起从良性增生到侵袭性癌肿的各种病变。感染人类免疫缺陷病毒(HIV)人群中生殖器部位HPV的感染率较高, 且使宫颈癌和肛门生殖器肿瘤的发生率增加〔1-2〕。因此, 本研究采用荧光定量PCR方法对HIV感染者和非HIV感染者的HPV病毒感染情况和病毒载量进行检测。现将结果报告如下。
1 材料与方法 1.1 对象于2005年1月-2009年1月对深圳市宝安区慢性病防治院性病门诊就诊性病患者血清和生殖器分泌物标本进行HIV抗体初筛和HPV检测, 其中HIV抗体初筛阳性标本送至深圳市疾病预防控制中心艾滋病确认实验室确认。共收集HIV阳性病例有40例(阳性组), 其中HIV和HPV同为阳性20例, 另随机抽取HIV阴性40例作为阴性对照组。
1.2 仪器和试剂HPV-PCR检测试剂盒以及荧光扩增检测试剂盒(广州达安基因公司); PCR仪(美国Bio-Rad公司); ABI-7000型荧光定量PCR仪(美国ABI公司)。
1.3 方法按参考文献〔3〕方法, 制备PCR所用引物探针和标记物。
1.4 荧光定量PCR检测病毒载量待检标本作为模板, 取2 μL加入HPV扩增反应管中, 各反应管放入Lightcycle PCR扩增仪:93℃预变性2 min后, 进入93℃ 5 s, 57℃ 45 s, 40个循环, 然后, 37℃ 1 s。循环结束后, 自动计算读取定量结果。
2 结果 2.1 HPV感染率HIV阳性组中HPV阳性20例, 感染率为50.0%, 在HIV阴性组中HPV阳性7例, 感染率17.5%, 差异有统计学意义(P < 0.05)。
2.2 HPV病毒载量HIV阳性组的HPV病毒载量分布区间在(1.00×104~0.99×105)拷贝数/mL有4例, (1.00×105~0.99×106)拷贝数/mL有9例, (1.00×106~0.99×107)拷贝数/mL有6例, ≥1.00×107拷贝数/mL有2例; HIV阴性组的HPV病毒载量分布区间在(1.00×103~0.99×104)拷贝数/mL有1例, (1.00×104~0.99×105)拷贝数/mL有4例, (1.00×105~0.99×106)拷贝数/mL有2例。分析发现, HIV阳性组HPV病毒载量比HIV阴性组HPV病毒载量至少高1个数量级(P < 0.05)。
2.3 HPV感染分型HIV和HPV同为阳性20例病例中检出单型HPV感染9例, 混合感染HPV (有2或3种亚型)11例。共检出有16种HPV亚型, 其中11种为高危型(16, 18, 31, 33, 35, 45, 52, 56, 58, 68, 73亚型)和5种低危型(6, 11, 42, 44, 54亚型)。在16种亚型中, 感染率最高的为16型(5例), 其次为52型(4例)、58型(3例)。
3 讨论近年来, 由于荧光定量PCR方法可以实现在封闭环境中完成扩增检测, 有效地降低了PCR污染概率, 且能够精确定量, 已被较多地应用于HPV病毒检测〔3〕。本研究结果显示, HIV阳性组HPV感染率约为HIV阴性组的3倍, 提示HIV感染可以促进HPV的感染。HIV阳性组HPV病毒载量比HIV阴性组HPV病毒载量至少高1个数量级, 提示HIV的感染可以加重HPV感染的载量。HPV分型实验结果表明, 感染人群中型别较多, 而且存在多型同时感染。深圳市是一个移民城市, 流动人口占大多数, 是中国性病/HIV感染者人群较多的城市之一〔4-5〕。因此, 对HIV患者的HPV感染情况进行监测, 可减少该病的蔓延与传播。
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2009, Vol. 25
