热休克蛋白60(Heat shock protein 60, Hsp 60)在冠心病发病中起非常重要的作用，进化上的保守使人和微生物的Hsp 60基因在序列上有很高的同源性，应激状态下的血管内皮细胞、平滑肌细胞会表达Hsp 60，微生物Hsp 60的免疫反应可能和自身的Hsp 60抗原发生交叉反应，导致血管损伤^〔1〕。Hsp 60基因改变可能引起Hsp 60质和量的变化，从而参与冠心病的发生发展。本研究旨在探讨Hsp 60基因多态性与冠心病危险度的关系。

病例来源于2002年7月~2006年3月在湖北省武汉市城区各大医院心内科住院确诊或经冠状动脉造影检查确诊，并符合WHO冠心病诊断标准^〔2〕的冠心病患者。对照组来源于武汉城区体检的非冠心病人群，经病史询问、体检及心电图等检查排除有冠心病、严重的肝、肾疾病者。有周围血管疾病或周围血管栓塞疾病者均未入选病例组和对照组。共收集病例674例，其中男性449例，女性225例，平均年龄(63.79±10.38)岁; 收集对照744人，其中男性438人，女性306人，平均年龄(59.51±7.77)岁。

采用Inter-heart调查表^〔3〕收集研究对象的一般情况。家庭史、职业史、既往史、生活环境、营养情况、生活史等并取得研究对象的知情同意。由调查员进行问卷调查。冠心病病人的调查及样本收集工作在确诊后的3 d内进行。

采用DNA抽提试剂盒(美国Gentra公司)提取外周血DNA。采用Taqman基因分型试剂盒(美国ABI公司)分析rs788016和rs2340690位点的多态性。应用SDS 2.2.1软件分析Taqman基因分型结果。

应用SPSS 12.0软件进行统计分析。计量资料2组间比较经正态性检验为正态性分布采用t检验，分类资料分析和Hardy-Weinberg平衡检验采用χ²检验。分类资料的2组间比较采用χ²检验，显著性水准以双侧α=0.05判断。对阳性结果，计算OR显示各基因型或等位基因与疾病的关联强度。采用Woolf法检验各层间OR的同质性，以P=0.05判断交互作用是否存在。采用多元Logistic回归模型判断冠心病危险因素作用大小, 分析混杂因素的控制及交互作用，计算主要危险因素的调整OR及其95%CI。

性别、年龄在病例组和对照组之间差异有统计学意义(P < 0.05)，其中病例组入选的男性较多，对照组女性较多; 除总胆固醇外、病例组血糖、吸烟史、高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史均高于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05);体质指数、甘油三酯、饮酒在2组间无明显差异。

rs788016和rs2340690在对照人群的基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡规律(χ²=2.40，0.65, P=0.12，0.42)说明本实验对照人群具有群体代表性，该人群的rs788016，rs2340690基因型分布可反映整体人群基因的分布情况。在病例组中rs788016基因未达到Hardy-Weinberg平衡(χ²=7.08, P=0.0078)，rs2340690基因符合Hardy-Weinberg平衡规律(χ²=1.29, P=0.255 7)。

表 1

表 1 不同特征及组别男性rs788016基因分布比较

表 1 不同特征及组别男性rs788016基因分布比较

表 2

表 2 不同特征及组别男性rs2340690基因分布比较

表 2 不同特征及组别男性rs2340690基因分布比较

rs788016基因AA、AG、GG和基因型频率在对照组和病例组分别为7.9%，36.4%，55.6%和8.8%，34.6%，56.7%。A、G等位基因频率在对照组和病例组分别为73.9%，26.1%和74.0%，26.0%。经χ²检验，rs788016和基因型和等位基因在对照组和病例组中分布差异无统计学意义。rs2340690基因CC，TC和TT基因型频率在对照组和病例组分别为7.7%，37.9%，54.4%和9.0%，39.0%，51.9%。C、T等位基因频率在对照组和病例组分别为26.6%，73.4%和28.6%，71.4%。经χ²检验，rs2340690各基因型和等位基因在对照组和病例组中分布差异无统计学意义。按性别、吸烟状态和年龄(以60岁划分)进行分层比较rs788016和rs2340690基因型在病例组和对照组的分布。经Woolf法检验，rs788016基因型的分布在各层间不同质(P=0.04)，在年龄 < 60岁男性现在吸烟层中，对照组与病例组和rs788016分布差异有统计学意义(P < 0.05)。该基因型分布在其他层内未见差异。rs2340690基因型分布在各层间同质，进行分层χ²检验(χ_MH²=0.37，P=0.54)，说明混杂效应后rs2340690基因型与冠心病危险度关系差异无统计学意义。

采用多元逐步Logistic回归分析性别、年龄、体质指数、吸烟史、饮酒史、高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史与冠心病的关系。进入回归模型的因素有年龄(β=0.58，OR=1.79，OR95%CI=1.39~3.20)、高血压病史(β=1.01，OR=1.79，OR95%CI=1.39~2.30)、吸烟状态(β=0.82，OR=2.29，OR95%CI=1.60~3.27)、糖尿病病史(β=1.41，OR=4.11，OR95%CI=3.05~5.44)、心血管疾病家族史(β=0.84，OR=2.31，OR95%CI=1.57~3.39)。

表 3

表 3 男性现在吸烟组多因素非条件Logistic回归分析结果

表 3 男性现在吸烟组多因素非条件Logistic回归分析结果

将人数以性别、吸烟状况进行分组，进行多元逐步Logistic回归分析。在男性吸烟组中调整高血压史、糖尿病史、心血管疾病家族史后，rs788016基因仍和冠心病显著相关。其余分组中，rs788016基因均未进入模型。

在病例和对照组中进行单核苷酸多态性(SNP) rs788016和rs2340690基因的连锁不平衡计算，r²和D′在病例组中为0.11和0.88，在对照组中分别为0.12和0.98，均为中度连锁不平衡。利用PHAES 2.0软件，在病例和对照组中推算出4种单倍型：GC (病例为0.211%，对照为0.187%)，GT (病例为0.528%，对照为0.552%)，AC (病例为0.075%，对照为0.079%)，AT (病例为0.185%，对照为0.183%)，病例组和对照组各单倍型差异无统计学意义。

本研究发现，rs788016 AA+AG基因型为 < 60岁男性现在吸烟人群中冠心病发病的危险因素，并且可能和吸烟因素对冠心病的发生有交互作用。Hsp 60通过炎症、免疫等多个环节与冠心病发生关联，其自身并不是冠心病发病的直接致病因素^〔5〕。吸烟可通过氧化应激导致血管内皮细胞Hsp 60表达升高^〔6〕。rs788016 AA+AG基因型对刺激的反应可能不同于其他基因型，可能通过影响Hsp 60蛋白表达的质和量参与冠心病发展进程。血浆热休克蛋白量随着年龄增长而减少^〔7〕，这可能是在老年男性吸烟者中观察不到上述关系的原因。由于本次研究中女性研究对象年龄偏大，大多处于绝经期，因此不能观察到性别在冠心病发病中的作用。对照组总胆固醇水平高于病例组可能是由于所有病例均来源于医院住院病人，已经过降脂治疗。年龄、吸烟、血压、血糖、糖尿病史、心血管疾病家族史等因素仍然是冠心病的危险因素^〔8〕。Hsp 60蛋白rs788016基因与冠心病发生关联机制，有待进一步研究。