贝类毒素是由海洋中的有毒藻类通过食物链传递给藻食性的贝类等生物，并在其体内蓄积形成的有毒高分子化合物。作用于人体时反应快、无适宜解毒剂，轻则危害人体健康，重则导致人体死亡。广东省近岸海域是有毒赤潮的高发区，已发生多起由贝类毒素引起的中毒事件。在所有的贝类产品食物中毒事件中，麻痹性贝类毒素(PSP)中毒被认为是对健康危害最严重之一。小鼠生物测定法是被美国公职分析化学家协会(AOAC)推广的PSP标准检测方法，但在概括样品毒性方面相当有效^〔2〕。为确保海产贝类的食用安全，建立方便可行的昆明种小鼠生物法检测PSP，于2007年9~12月对广东省深圳市南澳、东山2大海域采集的56份贝类样品进行PSP测定，并同步使用试剂盒进行比对。现将结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料

(1)贝类样品：在深圳市南澳、东山2大海域采集6个品种共56份样品。(2)实验动物：昆明种健康小白鼠(广东省医学实验动物中心)，19~21 g，其中雄性258只，雌性90只。(3)主要仪器与试剂：ELX 808微孔板酶标仪(美国BioTek公司); GS-15R台式冷冻离心机(美国Beckman公司); Biocel超纯水系统装置(美国MILLIPORE公司); R-215旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)。PSP检测试剂盒(美国Abraxis公司); PSP标准品(美国RTC公司); 其他试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

(1)样品采集：于2007年9~12月，每月采样1次，采集品种为：海湾扇贝、波纹巴非蛤、紫贻贝、杂色蛤、青蛤、文蛤，每种各5kg。其中海湾扇贝分离肠腺及贝肉分别检测，共计7种样品，2个海域5个月采样合计56份。(2) PSP标准品动物实验：将PSP标准品内的6种毒素：膝沟藻毒素2-3(GTX2, 3)、膝沟藻毒素1-4(GTX1, 4)、脱氨甲酰基膝沟藻毒素2-3(dcGTX2, 3)、石房蛤毒素(STX)、脱氨甲酰基石房蛤毒素(dcSTX)、新石房蛤毒素b (neo-b)分别对19~21 g小鼠进行腹腔注射(称量小鼠体重精确至0.5 g)，注射浓度为0.01 μg/(g·bw)，注射量为1 ml/只。每种毒素设1组，每组10只小鼠，雌、雄各半共6组，60只小鼠。观察24 h，并精确记录小鼠死亡时间，比较各毒素对雌、雄小鼠作用的差异。(3)贝类样品前处理：分别参照中华人民共和国水产行业标准(SC/T3023-2004)推荐的小鼠生物检测法^〔4〕、麻痹性贝类毒素检测试剂盒说明书，对采集的56份样品进行处理，取上清液进行试验。(4)建立昆明种小鼠生物法：参照中华人民共和国水产行业标准(SC/T3023-2004)推荐的小鼠生物检测法^〔4〕，选用昆明种小鼠，19~21 g，取其中1个月采样2个海域的14份贝类样品上清液1 ml腹腔注射小鼠，每组10只，雌、雄各半，共14组140只。比较小鼠对贝类毒素反应的性别差异，并建立昆明种小鼠生物法。(5)昆明种小鼠生物法检测麻痹性贝类毒素含量：选用雄性昆明种小鼠，参照中华人民共和国水产行业标准(SC/T3023-2004)推荐的小鼠生物检测法^〔4〕，每份样品注射3只小鼠，注射量为1 ml/只，56份样品，共用小鼠168只。查找麻痹性贝类毒素死亡时间-鼠单位的关系表，计算相应的鼠单位(MU)，衡量毒性。麻痹性贝类毒素毒力大小用鼠单位(MU)表示。(6)试剂盒检测麻痹性贝类毒素含量：按试剂盒说明书进行操作。

2 结果 2.1 PSP标准品动物试验结果

各毒素腹腔注射昆明种小鼠后，GTX1, 4组，neo-b组，STX组，dcSTX组雄鼠分别死亡4，3，2，1只; 平均死亡时间分别为8，6.2，15，15 min; 雌鼠分别死亡5，5，1，0只; 平均死亡时间分别为9，7.5，15，0 min。昆明种小鼠对毒素反应的性别差别不是十分明显，但雄鼠的反应较雌鼠快。

2.2 昆明种小鼠生物法的检测

6种不同贝类样品腹腔注射小鼠后，其中海湾扇贝肠腺的毒性最大，出现动物死亡，其他几种均未见动物异常。不同性别动物对其反应较一致，未见明显差异。

2.3 PSP含量的小鼠生物法检测

在所有检测贝类样品中，海湾扇贝肠腺的PSP的含量较高，腹腔注射动物后，动物出现死亡，而其他贝类的毒性较海湾扇贝肠腺小，均未出现动物死亡。

2.4 PSP含量的试剂盒检测(表 1)

对所采集的贝类样品进行试剂盒检测，发现海湾扇贝(肠腺)的PSP的含量较高，而其他贝类的毒性均较海湾扇贝小。

3 讨论

中国双壳贝类已经受到了贝类毒素污染的威胁，深圳市已发生多起赤潮毒素的中毒事件^〔5〕。为确保海产贝类的食用安全，必须通过加强贝类毒素的检测，从源头上控制有毒贝类的危害。贝类标准品的检测结果表明，雄鼠对于毒素的反应较雌鼠快; 但性别影响不是十分明显，说明选用单性别实验动物进行试验确实可行，故仅选用雄鼠建立小鼠生物法。对所采集的56份样品分别进行小鼠生物法和试剂盒检测，发现2种方法检出的肠腺毒素含量均高，这与文献^〔6〕报道的贝类消化腺中贝类毒素含量具有高超标率一致，且2种方法的检测结果具有较好的一致性，进一步说明所建立的昆明种小鼠生物测定法准确。由于目前国内的ICR小鼠来源有限，本研究所建立昆明种小鼠生物测定法，既能解决贝类毒素检测的实验动物来源不足，也将为今后开展贝类毒素的检测和监测提供可靠依据。