决明消障丸是由石决明、牡丹皮、密蒙花、羚羊粉、黄精等16味药组成，具有有滋阴填精，养肝明目，退翳消障之功效。临床上能消除眼球沉淀物，改善视力，主治早期老年性白内障等。原质量标准中未制定含量测定项目，为控制产品质量，本研究选用高效液相色谱(HPLC)法测定主药牡丹皮中丹皮酚的含量^〔1〕，方法简便、准确、重现性好。现报告如下。

材料与方法

(1)仪器与试药：岛津LG-10AT_VP高效液相色谱仪，SPD-10A_VP紫外检测器，SIL10A自动进样器; CR5A数据处理机; 丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号110736-200322)。决明消障丸(本院生产制剂，批号20051021)，所用试剂均为色谱纯或分析纯。(2)方法：①色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18　(4.6 nm×250 nm，5 μm); 流动相：甲醇：水(65: 35);检测波长：274 nm; 流速：1.0 ml/min，进样量：20 μl，理论板数按丹皮酚峰计算>5 000。②溶液的制备：精密称取干燥至恒重的丹皮酚对照品适量，于50 ml量瓶中加60%甲醇制成0.02 mg/ml的溶液，即得对照品溶液。取决明消障丸，剪碎，精密称取约0.5 g至具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇50 ml，密塞，称重，超声处理45 min，放冷，再精密称重，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。③干扰试验：分别精密吸取丹皮酚对照品溶液和供试品溶液及缺牡丹皮的阴性对照样品溶液各20 μl，注入液相色谱仪中。④线性考查：精密吸取丹皮酚对照品溶液2，5，10，15，20 μl注入液相色谱仪，以进样量(μl)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。⑤精密度重复性试验：精密吸取同一对照品溶液20 μl，重复样5次，测定样品含量，考查重现性。⑥加样回收率试验：取已知含量样品6份，分别精密加入丹皮酚对照样品10 μl计算回收率。

结果

(1)干扰实验(图 1)：测定结果为阴性对照液与丹皮酚对照液相同保留时间处未显色谱峰，故认为阴性干扰。(2)线性关系：丹皮酚的回归方程Y=54 479.60X+ 20 887.92，r=0.999 6。由此确定丹皮酚线性范围为0.040 5~0.405 2 μg。(3)精密度试验：相对标准偏差(RSD)=0.54%，表明精密度较好。(4)重复性试验：RSD=2.62%，表明该方法重现性良好。(5)稳定性试验：在0~24 h内丹皮酚对照品和供试品的RSD分别为2.42%和2.49%，表明在此时间范围内对照品溶液和供试品溶液具有良好的稳定性。(6)加样回收率试验：丹皮酚平均回收率为99.25%，RSD=0.62%。(7)样品测定：取3批样品以外标法计算样品中丹皮酚含量，批号为051207.060314.060401的样品中丹皮酚含量分别为0.623 5，0.598 2，0.654 7 mg/g。

小结

结果表明，在含量测定供试品溶液制备中，根据丹皮酚的溶解性，考察了用40%，60%，80%甲醇分别超声提取15，30，45 min的提取效率，并与60%甲醇回流提取法相比较。结果超声提取法与回流提取法的提取效率相近，故选择超声提取，操作简便易行^{〔2, 3〕}。

通过试验发现，以选择甲醇-水(65:35)作为流动相，分离效果较好，丹皮酚峰与其他峰达到了良好的分离度(R>1.5)，故采用此色谱条件进行含量测定。研究表明，采用HPLC法作为决明消障丸质量标准检测方法，测定决明消障丸中丹皮酚的含量，能够更有效控制该制剂的质量。