姜黄素(Curcum in)是从中药姜黄中提取的一种酚类色素，具有抗炎、抗氧化、降血脂、降压、保护肝功能等作用^{〔1, 2〕}。刘永刚等^〔3〕研究发现，姜黄素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化具有一定的治疗作用。肝星状细胞(Hepatic stellate cell，HSC)是位于肝窦Disse间隙的一种间质细胞，肝损伤后可发生表型转变，同时大量增殖并产生各种细胞外基质，因此，目前普遍认为HSC在肝纤维化的发生发展中起重要作用^〔4〕。本研究以体外培养大鼠HSC细胞株(CSFSC-2G)为对象，探讨姜黄素对HSC的增殖能力及其对I型胶原(Collagen I，Col I)和III型胶原(Collagen III，Col III)合成和分泌能力的影响，同时探讨姜黄素对HSC细胞的促凋亡作用，为姜黄素抗纤维化治疗提供理论依据。

大鼠HSC细胞株(CSFSC-2G)(美国乔治华盛顿大学); 胎牛血清培养液、小牛血清(美国Gibco公司); 兔抗大鼠I型胶原多克隆抗体(Col I)、III型胶原多克隆抗体(Col III)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔、抗小鼠多克隆抗体(北京中衫金桥生物公司); 姜黄素(扬州中宝制药有限公司); 秋水仙碱(昆明制药集团股份有限公司); 其他试剂均为进口或国产分析纯。

将处于对数生长期的CSFSC-2G细胞接种于96孔板，1×10⁴个细胞/孔，分为7组，8孔/组，分别用不同浓度的含姜黄素培养基培养(5，10，15，20，40 μmol/L)，以秋水仙碱作为阳性对照药组，空白组为阴性对照组。用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法于培养6，12，24，48，72 h后用酶标仪于490 nm处检测每孔吸光度(A)值。

将处于对数生长期的CSFSC-2G细胞接种于6孔板，1×10⁵个细胞/孔，分为3组，4孔/组，用20 μmol/L含姜黄素的培养基培养，以秋水仙碱作为阳性对照药组，空白组为阴性对照组。于6，12，24，48，72 h后收集培养上清液，用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各时间点Col I及Col III含量，后用酶标仪于490 nm处检测每孔吸光度(A)值。

将处于对数生长期的CSFSC-2G细胞分为3组，每组细胞数达2×10⁶个，用20 μmol/L含姜黄素的培养基培养，以秋水仙碱作为阳性对照药组，空白组为阴性对照组。于48 h后收集培养上清，用75%冷乙醇固定，核糖核酸酶消化，碘化丙啶(PI)室温染色30 min，经Beckman Coulter流式细胞仪检测细胞周期相分布和细胞凋亡情况。

采用SPSS 11.0软件进行统计分析。

图 1

图 1 姜黄素对HSC增殖能力的影响

MTT检测结果表明，用不同浓度的姜黄素培养基处理HSC 12 h后，HSC增殖速度开始减慢。当姜黄素浓度为20，40 μmol/L时，HSC在培养24 h后增殖能力明显降低，在培养48 h后，姜黄素对HSC增殖抑制能力大于秋水仙碱。随着培养液中姜黄素浓度的增加，其对HSC增殖的抑制能力也随之增强。

20 μmol/L姜黄素组培养24 h后，Col I、Col III吸光度值分别为(0.418±0.019)，(0.554±0.043)，均明显低于阴性对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)。

20 μmol/L姜黄素组培养48 h后，处于G0/G1期的HSC细胞占(39.98±8.07)%，S期细胞占(55.79±9.13)%，G2/M期细胞占(4.23±0.12)%; 凋亡率为(20.31±2.55)%，高于阴性对照组凋亡率(0.22±0.11)%，低于秋水仙素阳性对照组凋亡率(29.75±2.64)%，差异均有统计学意义(P < 0.05)。

研究结果表明，HSC在肝纤维化发生与发展中具有重要作用^〔5〕。HSC在肝损伤后被激活而大量增殖并产生细胞外基质，还可通过其收缩功能，参与门静脉高压的形成，最终导致肝纤维化的发生。因姜黄素具有广泛的药理作用，近年来，其防治肝抗纤维化的作用逐渐引起关注。本文以HSC为靶细胞，探讨姜黄素对HSC增殖、凋亡及分泌细胞外基质的影响。结果表明，姜黄素对HSC的增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖关系。姜黄素可抑制HSC Col I及Col III的合成和分泌，从而减少肝纤维化程度。流式细胞术分析结果表明，姜黄素对HSC G2期细胞有明显的阻滞作用，以诱导细胞调亡。因此，姜黄素可能成为防治肝纤维化的有效药物，其机制可能与其可抑制HSC细胞外基质合成和分泌能力有关，也可能与其抑制HSC的生长分化及增殖并诱导HSC凋亡有关，但具体机制尚需进一步研究。