中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (3): 337-338   PDF    
引用本文
李小花, 陈高斯, 庞辉, 陈晓白, 秦小茹, 罗冬, 覃颖脱, 李运福. 螺旋藻蛋白激酶提取物对血栓形成抑制作用[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(3): 337-338.
LI Xiao-hua, CHEN Gao-si, PANG Hui, et al. Inhibitive effect of spirulinahinase extraction on thrombus formation in rats[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(3): 337-338.
螺旋藻蛋白激酶提取物对血栓形成抑制作用
李小花, 陈高斯, 庞辉, 陈晓白, 秦小茹, 罗冬, 覃颖脱, 李运福     
广西医科大学生理教研室, 南宁 530021
收稿日期: 2008-07-25
基金项目: 广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻0719006-2-27)
作者简介: 李小花(1982-), 女, 山东聊城人, 硕士在读, 研究方向:海洋药物应用。
通讯作者: 庞辉
摘要: 目的 研究螺旋藻激酶(SPK)对血栓形成的影响及其作用机制。 方法 小鼠静脉注射螺旋藻激酶提取物, 用毛细管法和玻片法比较生理盐水组与螺旋藻激酶组凝血时间; 大鼠取血浆体外实验加入螺旋藻激酶提取物, 体内股静脉注射螺旋藻激酶提取物, 然后分别测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血浆凝血酶时间(TT), 观察螺旋藻激酶提取物对血栓形成的作用。 结果 体外实验结果显示, PT分别为(23.84±3.26), (23.28±4.4), (57.64±6.69) min; APTT分别为(23.94±3.27), (24.95±2.82), (37.15±5.96) m in; TT分别为(39.08±2.46), (69.18±5.05), (88.64±11.19) min。体内实验PT分别为(15.66±0.56), (18.33±1.81), (57.64±6.69) min; APTT分别为(23.94±3.27), (24.95±2.82), (37.15±5.96) min, TT分别为(39.08±2.46), (69.18±5.05), (88.64±11.19) min。表明螺旋藻激酶使小鼠血液凝固时间延长, 并具有明显的剂量-效应依赖关系。 结论 螺旋藻蛋白激酶提取物具有明显抑制血栓形成的作用。
关键词： 螺旋藻蛋白激酶     血栓形成     凝血时间    
Inhibitive effect of spirulinahinase extraction on thrombus formation in rats
LI Xiao-hua, CHEN Gao-si, PANG Hui, et al     
Department of Physiology, Guangxi Medical University Nanning 530021, China
Abstract: Objective To study the efect of spirulinakinase (SPK) extraction on thrombus formation and to explore its anti-thrombus formation mechanisms. Methods The coagulation time (CT) were compared between SPK group and control group with capillary vessel and sheet glass after SPK was injected in travenously into the rats.After add ingcerta inconcentration of SPK extraction solution to the plasma in vitro and injecting SPK extraction solution in to femoral vein, the activated partial thrombop lastin time (APTT), prothromb in time (PT) and thromb in time (TT) were tested. Results Due to the use of SPK extraction, the CT of the rats was significantly prolonged; the PT, the APTT and the TT were elongated. Conclusion The SPK extraction shows an obvious anti-coagulation effect in rats.
Key words: spirulinakinase (SPK)     throm bopoiesis     coagulation time    

文献研究显示, 经大豆发酵产生的纳豆蛋白激酶类物质具有强烈纤溶作用〔1, 2〕, 对其抗凝及纤溶作用及其机制的研究成为20多年来的热点; 螺旋藻(Spirulina)是一种蓝藻门颤藻科水生植物, 是一种非常丰富的海藻资源, 具有极高营养价值和药用价值〔3〕。螺旋藻经液体发酵后可产生一种类似纳豆蛋白激酶类的物质, 命名为螺旋藻蛋白激酶(Spirulinakinase, SPK)。为探讨这种物质对血栓形成的作用, 本研究使用螺旋藻蛋白激酶提取液, 研究其对大鼠和小鼠血栓形成的作用。现将结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 实验动物

Wistar大鼠, 不分雌雄, 体重300~350 g; 昆明种小白鼠, 不分雌雄, 体重(20±2) g (广西医科大学实验动物中心, 动物合格证号:桂动许字(2000)第001号。

1.2 试剂与仪器

(1)主要试剂:螺旋藻激酶粉(北海市康福保健食品有限公司); 肝素钠注射液(天津市生物化学制药厂, 061226);血浆凝血酶原时间(PT)检测试剂盒, 批号STG20101-26;活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒, 批号ST20201-24;血浆凝血酶时间(TT)检测试剂盒, 批号STG40302-21(均为北京世帝科学仪器公司); 其他均为国产分析纯。(2)仪器:电热恒温水浴箱(姜堰市天力医疗器械有限公司)标准号YZB/苏(泰)0028-2005;血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司, 编号为P3072A1;)电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器械厂, 型号:G2X-DH-40*4.5-BS); 电子分析天平, (德国Sartorious公司, 型号:BP190S 81136606;) TDL 25台式离心机(上海安亭科学仪器厂); 载玻片(姜堰市永康医疗器械厂); 毛细玻璃管(1 mm×100 mm)。

1.3 方法 1.3.1 螺旋藻激酶制剂

原料螺旋藻激酶粉经广西测试中心检测, 蛋白激酶含量为6 000 FU (活力单位)/g, 按照10 g粉剂溶于100 ml生理盐水(NS)的比例混匀, 于-4℃冰箱放置过夜后, 以3 000 r/min离心10 min, 弃去沉淀, 上清液即为粗制的螺旋藻激酶原溶液。

1.3.2 小鼠体内凝血时间(CT)测定

(1)毛细管法:取32只小鼠, 随机分为4组, 即螺旋藻激酶高浓度组, 原液用生理盐水做1:1稀释; 低浓度组, 原液用生理盐水做1:4稀释; 生理盐水阴性对照组及肝素阳性对照组(12.5 U/ml), 尾静脉以0.1 ml/10(g·bw)注射相应液体。20 min后参照文献〔4〕用毛细管法分别测定各组的凝血时间。(2)玻片法:分组与给药方法同上, 用药20 min后, 参照文献〔4〕用玻片法分别测定各组的凝血时间。

1.3.3 血浆凝血酶时间测定

分别检测螺旋藻激酶对PT、APTT及TT影响。(1)体外实验:Wistar大鼠8只, 以20%氨基甲酸乙酯0.5 ml/100 g腹腔麻醉, 腹主动脉取血4 ml, 置于预先加有3.2%枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料试管中, 轻度混匀, 2 500 r/min离心15 min, 收集上层液(血浆)。将待测血浆分成4组, 每组血浆0.2 ml, 分别加入1/20、1/60螺旋藻激酶溶液及生理盐水0.2 ml, 按试剂盒说明书操作, 测定PT、APTT及TT, 并比较组间差异。(2)体内实验:Wistar大鼠24只, 随机分为3组, 每组8只, 分成螺旋藻激酶高剂量组, 螺旋藻激酶原液:生理盐水=1/7;低剂量组, 螺旋藻激酶原液=1/30;生理盐水阴性对照组, 给药剂量为0.5 ml/100 g。按前述方法麻醉后, 股静脉推入药液, 20 min后按前述方法收集血浆, 按试剂盒说明书操作, 测定PT、APTT及TT, 并比较组间差异。

1.4 统计分析

采用SPSS 10.0软件进行统计分析, 组间差异用t检验。

2 结果 2.1 螺旋藻激酶对小鼠体内凝血时间的影响(表 1)
表 1 不同性别小鼠体内凝血时间比较(n=8, …x±s)

表 1结果显示, 螺旋藻激酶可使小鼠血液凝固时间显著延长, 与对照组比较差异有统计学意义, 且呈量效依赖关系。

2.2 螺旋藻激酶对大鼠体内、外血浆PT、APTT及TT影响 2.2.1 体外实验(表 2)
表 2 不同组别大鼠体外血浆PT、APTT及TT检测结果比较(n=8, …x±s)

表 2结果显示, 螺旋藻激酶可使大鼠血的PT、APTT及TT显著延长, 与对照组比较差异有统计学意义, 且呈量效依赖关系。

2.2.2 体内实验(表 3)
表 3 不同组别大鼠体内血浆PT、APTT及TT检测结果比较(n=8, …x±s)

表 3结果显示, 螺旋藻激酶可使大鼠血的PT、APTT及TT显著延长, 与对照组比较差异有统计学意义, 且呈量效依赖关系。

3 讨论

随着人们生活水平的提高, 血栓性疾病越来越威胁到人们特别是老年人的健康, 抗凝及溶栓药物可大大降低病死率。因此, 寻找安全无毒的抗凝溶栓药物越来越受到人们的重视。本文结果表明, 螺旋藻激酶可以延长小鼠血的凝血时间, 使大鼠血的血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血浆凝血酶时间(TT)均较对照组延长, 并呈现剂量-效应依赖关系。其作用机制可能是其影响凝血酶活性, 或对凝血最终底物-纤维蛋白原直接分解使其数量减少或者使其功能降低。文献显示, TT的延长见于血中纤维蛋白原减少或FDP (纤维蛋白降解产物)增多, 表明螺旋藻激酶可能会对纤维蛋白原产生影响, 另外, 螺旋藻激酶也可以在体内形成FDP, 均会促使TT延长〔5, 6〕。螺旋藻激酶的抗凝作用机制还有待进一步研究。

参考文献
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[4] 陈奇. 中药药理研究方法学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1994: 480-490.
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