当前, 酒精性肝病患病率居高不下, 加强对酒精性肝损伤的防治研究已成为当前面临的重要课题。乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)被2005年版中国药典二部收载为原料药^〔1〕, 现临床主要用于治疗呼吸系统疾病, 同时其静脉和口服制剂用于醋氨酚中毒所致的肝损害解毒^〔2-4〕。本研究通过酒精灌胃法建立慢性酒精性肝损伤大鼠模型, 采用ELISA分析酒精性肝损伤大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平, 观察NAC不同剂量组对酒精性肝损伤大鼠血清TNF-α和IL-6变化的影响, 探讨NAC保护酒精性肝损伤的机制, 为NAC用于防治酒精性肝损伤提供理论依据。

材料与方法

(1)实验动物:健康雄性SD大鼠70只(浙江省医学科学院), 实验动物生产许可证:SCXK (浙)2004-001;体重(180±20) g。(2)主要仪器与试剂:日立7020全自动生化测定仪(日本日立株式会社); MAXl90型紫外-可见连续光谱酶标仪(美国MD公司); Beckman Allegra X-22R型离心机(美国贝克曼公司)。NAC (武汉武大弘元药业有限公司); 注射用硫普罗宁(河南新谊药业股份有限公司); 丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(上海德赛诊断系统有限公司); 大鼠TNF-α和IL-6试剂盒(武汉中美科技有限公司)。(3)动物分组及处理:根据体重将大鼠随机分成6组, 其中正常组10只, 模型组、低、中、高剂量组及阳性对照组均为12只。模型组大鼠以55%(V/V)无水乙醇2 ml/100 g灌胃, 治疗组在造模同时腹腔注射NAC, 剂量分别为0.156, 0.312, 0.625 g/kg, 每天1次; 阳性对照组在模型组造模同时腹腔注射硫普罗宁(注射用)16.5mg/kg, 每天1次。其他处理步骤参照文献〔5〕。(4)统计分析:应用SPSS13.0统计软件进行t检验。

结果

(1)一般情况:在实验期间正常组大鼠全部存活, 模型组、低、中、高治疗组和阳性对照组分别有2, 2, 4, 2, 3只大鼠死亡, 其中多系灌胃时酒精误入气管所致。模型组、治疗组和阳性对照组大鼠在实验期间毛发光泽度差、体重增长缓慢、行动迟缓、嗜睡、精神萎靡、食欲减退。(2)乙酰半胱氨酸对大鼠血清ALT、AST、TNF-α和IL-6影响(表 1):除低、中剂量治疗组的ALT和低剂量组的IL-6和模型组比较, 差异无统计学意义外, 模型组大鼠的ALT、AST、TNF-α和IL-6均较正常组高, 治疗组和阳性对照组均较模型组低, 差异均有统计学意义(P < 0.05);高剂量组、阳性对照组的ALT和IL-6均较低剂量组低, 中、高剂量组、阳性对照组的TNF-α均较低剂量组低, 差异均有统计学意义(P < 0.05)。(3)肝脏肉眼观察:正常组大鼠肝脏被膜光滑, 呈红褐色, 质地柔软。模型组大鼠肝脏体积增大, 质地较正常组硬, 色泽较正常组黯淡; 各治疗组、阳性对照组肝脏和正常组比较无明显差别。(4)肝组织病理改变:正常组大鼠肝小叶结构清晰; 肝细胞索排列整齐, 呈放射状; 肝窦正常, 胞核结构清晰。模型组大鼠肝小叶界限不清, 肝索紊乱, 肝细胞浆出现不同程度的空泡变性, 重者胞体肿大呈气球样, 可见点状坏死和炎症细胞浸润。各治疗组和阳性对照组肝脂肪变性和炎症程度均比模型组轻。

讨论

本研究结果显示, NAC治疗组大鼠血清ALT、AST均明显低于模型组, 同时其肝组织脂肪变性和炎症程度明显轻于模型组, 表明NAC能明显抑制乙醇引起氧化应激反应^〔6〕。模型组大鼠血清TNF-α和IL-6比正常组明显升高, 与文献〔7, 8〕报道一致。而NAC治疗组血清TNF-α和IL-6明显低于模型组, 提示NAC对大鼠酒精性肝损伤引起细胞因子的表达有明显抑制。这种作用与NAC为抗氧化剂, 是谷胱甘肽的前体物质有关。NAC作为小分子物质, 易进入细胞, 脱酰基后成为谷胱甘肽合成前体, 促进肝细胞内谷胱甘肽的合成, 减少了持续摄入酒精状态下乙醇在肝细胞中产生大量自由基, 纠正机体抗氧化系统平衡, 从而增强机体抗氧化能力, 有效抑制内毒素、干扰素Y (IFN-γ)和白介素1β(IL-1β)所致细胞核因子κB (NF-κB)的活性, 从而抑制了TNF-α基因与NF-κB的结合, 降低了TNF-α基因的转录^〔9〕。NAC在体内能与一氧化氮(NO)结合生成亚硝基硫醇(SNT), SNT比NO更接近内皮血管舒张因子(EDRF); 另一方面NAC能作为NO的供体而发挥作用, 降低了巨噬细胞的活性, 从而抑制了IL-6的表达, 减轻肝脏损害。本研究表明, NAC是一种具有研究价值的新型抗酒精性肝损伤的药物。