丹酚酸(SA)是在唇形科植物丹参中发现的一大类植物多酚物质，包括丹酚酸A、B、C等。有研究认为^〔1〕，丹酚酸B的抗氧化作用能减轻四氯化碳(CCl₄)对原代培养大鼠肝细胞的体外损伤。本研究前期实验证实^{〔2, 3〕}，SA对不同自由基具有明显的清除作用，且抗脂质过氧化能力与其种类和含量消长有关。因此，探讨具有特定组成的SA活性比单一成分的功效研究对于揭示其作机制更为重要。但目前基于SA的整体性对体内肝损伤保护及机制研究尚报道较少。本文在预先给予具有特定组成的SA基础上，观察CCl₄对肝脏的损伤情况和各种生化指标的变化，以探讨SA对大鼠肝损伤的预防性保护作用及其可能机制，为化学性肝损伤的防护提供依据。

DU600紫外-可见分光光度计(美国Beckman分司)；XHF-1高速分散器(上海金达生化仪器厂)；TGL-16C台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；HHS4电热恒温水浴锅(上海浦东跃欣科学仪器厂)；DHGO-9203型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验有限分司)；7020型全自动生化分析仪(日本Hitachi公司)；Bx-51显微镜(日本Olympus公司)。SA提取物(本实验室制备)；CCl₄(分析纯，广东光华化学厂有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

健康成年Sprague-Dawley (SD)大鼠40只(上海斯莱克实验动物有限公司)；雌雄各半，体重180~200 g。

将40只SD大鼠随机分为5组，每组8只，即对照组(蒸馏水灌胃)、CCl₄模型组(蒸馏水灌胃)、SA高、中、低剂量组分别给予SA灌胃300，200，100 mg/(kg·bw)。每日1次，连续灌胃给药14 d。每周称体重1次，以调整灌胃量。末次灌胃给药2 h后，对照组腹腔注射花生油溶液6 ml/(kg·bw)，其他4组腹腔注射5% CCl₄花生油溶液6 ml/(kg·bw)，造成大鼠急性肝损伤，然后对其禁食不禁水，24 h后用2%戊巴比妥钠2 ml/(kg·bw)腹腔注射麻醉大鼠，心脏取血，并分离肝脏，固定于10%甲醛溶液。另取部分相同部位肝脏用生理盐水漂洗备用。

(1)一般情况：灌胃期间观察大鼠一般症状和体征。包括生长发育状况、精神状况、进食情况、饮水有无异常、体重变化等。(2)血清天门冬氨酸基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平：经心脏采血取得的血样离心分离血清后，于全自动生化分析仪上测定AST、ALT。(3) SOD、GSH-Px活性及MDA、GSH含量：取部分肝脏用生理盐水漂洗数次后，滤纸拭干，称取0.5~0.6 g，加入0~4 ℃的生理盐水5~6 ml，用玻璃匀浆器在冰水中进行匀浆，制成10%匀浆，4 ℃，3 500 r/min离心10 min，取上清液待测。SOD、GSH-Px、MDA、GSH的测定按试剂盒说明书进行。(4)肝脏病理形态学变化：取部分肝右叶，用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红(HE)染色，光镜下观察其形态学变化。

应用SPSS 10.0统计软件进行齐性检验及方差分析。

对照组、模型组和各SA剂量组大鼠均生长发育良好。各SA剂量组进食、饮水无异常，体重增加一致，未观察到明显的异常症状和体征，组间无明显差异。

表 1

表 1 大鼠血清中AST、ALT含量(x±s, n=8)

表 1 大鼠血清中AST、ALT含量(x±s, n=8)

与对照组比较，模型组AST、ALT活性均明显升高，差异有统计学意义(P < 0.01)，表明肝损伤建模成功。与模型组相比，各SA剂量组均能不同程度抑制AST及ALT活性升高，差异有统计学意义(P < 0.05)。表明不同剂量SA均能预防CCl₄所致大鼠肝损伤的血清转氨酶含量升高。

表 2

表 2 大鼠血清中SOD、GSH-Px活性及MDA、GSH含量(x±s, n=8)

表 2 大鼠血清中SOD、GSH-Px活性及MDA、GSH含量(x±s, n=8)

与对照组相比，模型组大鼠血清中的SOD、GSH-Px活性和GSH含量明显降低，MDA含量明显升高，差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组相比，随着SA剂量的增加，各SA剂量组中MDA含量呈下降趋势，且明显低于模型组，差异有统计学意义(P < 0.05)；各SA剂量组中SOD活性呈上升趋势，且均明显高于模型组，差异有统计学意义(P < 0.05)；GSH含量在血清中呈上升趋势，其中SA 300 mg/(kg·bw)组明显高于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)；而血清GSH-Px活性在各剂量组间差异无统计学意义。

表 3

表 3 大鼠肝匀浆中SOD、GSH-Px活性及MDA、GSH含量(x±s, n=8)

表 3 大鼠肝匀浆中SOD、GSH-Px活性及MDA、GSH含量(x±s, n=8)

SA对实验动物肝脏各生化指标的影响变化与血清中类似。与对照组相比，模型组大鼠血清中的SOD活性及GSH含量明显降低，MDA含量明显升高，差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组相比，随着SA灌胃剂量的增加，各SA剂量组中MDA含量呈下降趋势，其中200，300 mg (kg·bw)剂量组其含量明显低于模型组，差异均有统计学意义(P < 0.05)；SOD活性呈上升趋势，其中200，300 mg (kg·bw)剂量组明显高于模型组，差异均有统计学意义(P < 0.05)；GSH含量呈上升趋势，其中300 mg/(kg·bw)组和对照组之间差异有统计学意义(P < 0.05)；而肝匀浆GSH-Px活性在各SA剂量组间差异无统计学意义。

光镜下观察可见，对照组大鼠的肝小叶结构完整，肝细胞形态正常。模型组肝脏小叶中心部明显坏死，其坏死区周围可见脂肪变性的肝细胞，有明显的点状和灶状坏死。而各SA剂量组大鼠肝脏病变程度较模型组均明显减轻。

CCl₄在肝内代谢活化生成三氯甲基自由基(·CCl₃)，诱发脂质过氧化，是其肝脏毒性机制中的重要环节。因此，增强机体抗氧化能力，可能成为预防CCl₄肝损伤的重要途径^{〔4, 5〕}。本研究结果表明，对大鼠预先使用SA提取物，其血清中AST、ALT较模型组含量明显降低的同时，还可提高CCl₄所致急性肝损伤大鼠血清和肝组织匀浆中SOD活性和GSH含量，降低其MDA的水平。提示SA可以通过提高机体抗氧化酶的生物合成而增加酶活力，清除自由基抑制脂质过氧反应，降低脂质过氧化主要产物MDA的产生，从而拮抗CCl₄引起的氧化损伤，发挥其预防性保护肝脏的作用。肝组织的病理检验结果也证实了这一点。

王晓柠等^〔6〕研究了75%丹酚酸B提取物改善CCl₄和二甲基亚硝胺诱导的肝组织纤维化方面的作用，认为其作用机制与抑制转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体蛋白的表达有关。本文在前期研究^{〔2, 3, 7〕}基础上，观察了SA在体内对肝组织氧化损伤的保护作用，证明了其机制可能与SA所具有清除氧自由基和抗脂质过氧化能力有关，为预防肝损伤药物或保健食品功能因子的开发提供了重要依据。