脂类物质对生物体众多生理过程的重要作用日益引起人们的关注, 目前国内外这方面工作多侧重于生理机能的研究^〔1-7〕.为探讨神经醇磷脂(Sphingolipid)对细胞膜磷脂和所带电荷的影响, 于2007年10月利用从哺乳动物脑组织中提取精制的神经醇磷脂, 通过对家兔的动物实验, 研究神经醇磷脂对红细胞膜磷脂成分及电泳率(EPM)的影响, 以揭示神经醇磷脂在维持质膜稳定性方面的作用, 不仅为膜生理学研究提供了资料, 同时也为开发研制以神经醇磷脂为主的营养保健食品和药物提供了实验依据.现将结果报道如下.

1 材料与方法 1.1 材料

神经醇磷脂(Sphingolipid)由本实验室利用猪脑组织, 采用有机溶剂综合萃取法提取精制, 符合试验试剂标准。健康白色雄性家兔(日本大耳白), 120~150 d, 体重2.3~2.8 kg (济南北园实验动物养殖场)。

1.2 方法 1.2.1 动物分组

设立对照组和实验组, 每组6只。对照组采用标准基础饲料(符合美国分析化学协会动物营养标准)饲喂; 实验组采用标准基础饲料添加神经醇磷脂饲喂, 神经醇磷脂终含量为200 mg/kg。对照及实验饲养环境条件一致, 温度(27±1)℃, 相对湿度60%, 自然光照, 饲养28 d。

1.2.2 检测指标

(1)红细胞膜磷脂成分:受试动物于第29 d清晨空腹耳缘静脉取血。采用薄层色谱扫描法测定以下磷脂成分:磷脂酰胆碱(PC); 磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)和鞘磷脂类(SM)。(2)血小板与红细胞EPM:血小板EPM的测定按文献〔8〕方法进行; 红细胞EPM的测定:用取血量管从兔的耳缘静脉取全血10 mm³, 注入3 ml肝素抗凝的pH 7.4的磷酸盐缓冲液中, 在血球记数板上计数并调节至红细胞数为1.5万/mm³样品。(3)电泳:WD-9408A型显微(细胞)电泳系统(北京六一厂); 测量条件:电压40 V, 电流1 mA, 温度(25±0.5)℃。每个样品分别测定20个血小板和红细胞往返电泳时间, 测量及计算方法按文献〔9〕进行。

1.3 统计分析

采用SPSS 10.0软件进行统计分析, 差异显著性采用t检验。

2 结果 2.1 神经醇磷脂对红细胞膜磷脂成分的影响(表 1)

实验组家兔红细胞膜磷脂成分与对照组比较, 变化较复杂。其中SM、PE含量有不同程度的降低(P < 0.05), PC含量显著增高(P < 0.01), 平均增高率为19.81%。特别是PS含量、SM/PC比值和PS/PC比值均显著降低(P < 0.01)。

2.2 神经醇磷脂对血小板、红细胞电泳率的影响

实验组家兔血小板及红细胞的电泳率分别为(0.848±0.067), (1.375±0.061), 均高于对照组, 分别为(0.683±0.064), (1.142±0.026);血小板EPM平均提高24.16%, 红细胞EPM平均提高20.40%, 差异均有统计学意义(P < 0.01)。

3 讨论

磷脂(PL)作为红细胞膜结构和功能的基本成分, 与红细胞形态、血液凝固及血液粘滞性密切相关。其中PS、PE和PS/PC有明显的促凝作用, 它们的增高标志着红细胞粘滞性增强, 导致血栓性疾病的发生。被认为代表衰老标志的老年指数SM/PC的增高, 则表明红细胞膜脆性增加, 变形能力下降, 从而降低红细胞的功能。由于神经醇磷脂的作用, 实验组红细胞膜的SM、PE和PS水平的降低和PC水平显著升高, 使SM/PC比值减小, 其结果增强了红细胞的韧性和变形能力; PS/PC比值的减小, 说明红细胞的粘滞性下降, 抗凝作用增强。由此可见, 神经醇磷脂对维持红细胞的正常功能, 避免或减少血栓性疾病的发生均有重要作用。

本实验组由于神经醇磷脂的作用, 无论是血小板, 还是红细胞, 其EPM均有明显提高, 提示神经醇磷脂可能通过增加细胞表面的负电荷, 降低血小板或红细胞之间凝聚的作用, 同时也减弱了二者与血管内皮的吸附, 从而增强血小板和红细胞的功能, 促进血液流动, 有效避免微血栓的形成。