过敏反应被世界卫生组织(WTO)认为是当前世界性的重大卫生学问题^{〔1, 2〕}。常见的过敏原可分为2大类，一类为吸入性过敏原，如尘螨、花粉、真菌等；另一类为食入性过敏原，也称食物过敏原。世界粮农组织(FAO)1995年报告，90%以上的食物过敏是由牛奶、鸡蛋、鱼、贝壳海产品、花生、大豆、坚果类和小麦等8大类引起^{〔3, 4〕}。而在众多的食物过敏原中，引起儿童及婴幼儿过敏的主要食物是鸡蛋与牛奶^〔5〕。目前，国内对鸡蛋过敏原进行相关研究的报道较少。为探讨鸡蛋过敏原的分离、纯化和免疫学特性进行本研究，从而为过敏性疾病的特异性诊断和分子生物学研究提供基础依据。现将结果报告如下。

快速液相色谱仪系统(FPLC System)(美国Pharacia公司)；常压层析控制系统、垂直板型电泳仪、转膜电泳仪(美国BIO RAD公司)；低温冷冻高速离心机(美国Sigma公司)。鸡蛋(深圳人人乐超市)；对鸡蛋过敏患者的阳性血清(深圳市人民医院、深圳市儿童医院和海口市人民医院)。生物素标记羊抗人IgE抗体(美国KPL公司)；链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)(美国Vector公司)。

取鸡蛋一个，两端各打开一个小洞，小蛋清流出并收集；然后用量筒量取约30 ml蛋清，按照蛋清：磷酸盐缓冲液(PBS)=1：10的体积比在蛋清中加入PBS后，参照文献〔6〕的方法操作。

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后，参照文献〔6〕方法，通过免疫印迹(Western-blotting，WB)鉴定对鸡蛋过敏患者阳性血清的蛋黄与蛋清中特异性抗原成分。

参照文献〔7〕。

图 1

注：M：分子量标准；1：蛋黄粗提液；2：蛋清粗提液。 图 1 鸡蛋粗提液蛋白经SDS-PAGE结果

蛋清与蛋黄蛋白粗提液按照每孔10 μl上样，蛋黄粗提液经SDS-PAGE后显示的主要蛋白条带有6条，分子量分别为116，70，52，40，27，15 kD；蛋清粗提液的主要蛋白条带有5条，分子量分别为110，43，38，32，13 kD。

图 2

注：M：分子量标准；1：蛋黄粗提液免疫印迹条带；2：蛋清粗提液免疫印迹条带。 图 2 鸡蛋过敏原免疫印迹鉴定

在SDS-PAGE后用对鸡蛋过敏患者血清通过WB鉴定鸡蛋的特异性抗原成分，蛋黄粗提液未出现条带，蛋清粗提液中出现4个条带，分子量分别为83，71，38，13 kD，以分子量为13 kD的阳性条带最为明显。

图 3

注：M：分子量标准；1~3：1~3峰的蛋白条带。 图 3 鸡蛋DE-52离子交换层析各峰液的SDS-PAGE结果

选用DE52离子交换层析柱对对鸡蛋蛋清的粗提液进行了初步纯化，一共收集到3个峰，第3个峰远远低于前面2个峰，收集各峰后做SDS-PAGE。

图 4

注：M：分子量标准；1：第1峰的免疫印迹条带。 图 4 鸡蛋蛋白纯化后的蛋白免疫印迹检测结果

取第1峰进行WB后显示出1个明显的阳性条带，分子量为13 kD，通过免疫印迹证明纯化后蛋白具有免疫活性，且能初步分离出13 kD的过敏原蛋白。

本研究初步证明, 与对鸡蛋过敏患者阳性血清起反应的过敏原主要存在于蛋清中。蛋清中含有多种能与这些患者阳性血清起反应的过敏原。本研究通过离子交换层析对鸡蛋的主要过敏原成分进行纯化，得到较纯分子量为13 kD的蛋白质，是一种强致敏蛋白，但具体是何种蛋白还有待进一步研究。