中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (1): 104-105   PDF    
引用本文
刘敏, 姚文清, 孙佰红, 陈丹, 韩仰欢, 于伟, 张眉眉, 宋亦春, 赵卓. 沈阳市类流感样病例病原检测分析[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(1): 104-105.
LIU Min, YAO Wen-qing, SUN Bai-hong, et al. Etioligy analysis of influenza like illness in Shenyang[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(1): 104-105.
沈阳市类流感样病例病原检测分析
刘敏, 姚文清, 孙佰红, 陈丹, 韩仰欢, 于伟, 张眉眉, 宋亦春, 赵卓     
辽宁省疾病预防控制中心传染与感染性疾病控制所, 沈阳 110005
收稿日期: 2008-05-27
基金项目: 辽宁省卫生厅重点实验室资金支持项目(2007403016)
作者简介: 刘敏(1971-), 女, 辽宁辽阳人, 副主任检验师, 博士, 主要从事传染病的预防控制及病原微生物的检测工作。
通讯作者: 赵卓
摘要: 目的 运用多重巢式反转录聚合酶链反应(multiplex nested reverse transcription polumerase chain reaction，多重巢式RT-PCR)快速检测类流感样病例(influenza like illness，ILI)相关病原，掌握流感症状人群的病原谱，并探讨类流感样病例百分比(Consultation rates of influenza-like illness，ILI%)作为流感流行监测指标的适用程度。 方法 于2007年1~4月采集辽宁省沈阳市纳入国家流感监测网络的医院门诊ILI病例咽拭子118份，同时采用传代狗肾(MD-CK)细胞分离流感病毒，采用多重巢式RT-PCR检测13种类流感样病例相关病原，计算各病原的阳性率与构成比，并与同时期监测所得的ILI%比较。 结果 2007年1~4月，ILI%在5.0%左右波动，而流感病毒分离阳性率从峰值42.1%下降至0；多重巢式RT-PCR共检测出11种病原体，其中流感病毒阳性率亦从52.6%逐步下降至5.7%，鼻病毒、腺病毒和副流感病毒3者之和的阳性率在37.8%左右波动。 结论 结果提示，ILI的病原构成较复杂，难以从临床症状区分由流感病毒或其他病原导致的类流感样症状。因此，ILI%单独不足以表明流感病毒在人群中的流行情况，尚需辅助以敏感的实验室检测方法。
关键词： 类流感样病例     类流感样病例百分比     多重巢式反转录聚合酶链反应     监测指标    
Etioligy analysis of influenza like illness in Shenyang
LIU Min, YAO Wen-qing, SUN Bai-hong, et al     
Liaonig Provincial Center for Disease Control and Prevention, Institute for Infections Disease Control and Prevention (Shenyang 110005, China)
Abstract: Objective Consultation rates of in fluenza-like illness (ILI%) in anoutpatient setting have been regarded as a good indicator of in fluenzavirus activity in community.In this study, we detected the etiology spectrum of the crowd with ILI to evaluate the efficiency of ILI%. Methods 118 ILI patients' nasopharyngeal swabspecimens were collected in Shenyang between Jan.2007 and Apr.2007.All of the specmiens were inoculated into MDCK cells for influenza virusisolation and analyzed for 13 pathogens (influenza A, B and C virus, syncytial virus, para influenza virus, human coronavirus, enteroviru, srhinovirus, human metapneum ovirus, reovirus, adenovirus, Mycoplasma pneumoniae, and Chlamydia pneumoniae) that could cause ILI symptom by multiplex nested RT-PCR assays.Each virus' positive and composing ratio was also calculated.The surve illance data of ILI% were also obtained at the same time. Results The ILI% among the outpatients from Jan.2007 to Apr.2007 was 5.0% on average.PCR positive rate of influenza virus was varied consistently from the peak in January 2007(52.6%, 10/19) to 40.0%(8/20) in February, 22.8%(10/44) in March and 5.7%(2/35) in April; While rhinovirus, adeno virus, para influenza virus and Chlamydia pneumoniae to gether accounted for more than 30% of positive on average in the period. Conclusion Our data sugge sted that it was very difficult to ascertain whether the patient was really infected by in fluenza virus or other respiratory pathogens that could induce smiilar clinical symptoms, so the influenza surveillance should be carried out effectively by a systemic pathogenic test as well as sensitive clinical definition.
Key words: illness like influenza     consultation rates of illness like in fluenza     multiplex nested-RT-PCR assay     surveillance indicator    

目前，流行性感冒流行强度加大，禽类流感病毒H5N1、H7N7等又在不断地跨越种属屏障感染人类，故迫切需要提高流行性感冒监测数据的准确性，以便更真实地反映流感流生情况。为此，采集辽宁省沈阳市2007年1~4月流感活跃时期的类流感样病例(ILI)咽拭标本，运用多重巢式RTP-CR技术对甲、乙和丙型流感病毒以及临床症状易与其混淆的副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、肠道病毒、呼肠病毒、偏肺病毒和支原体、衣原体等病原进行检测，同时与传代狗肾(MDCK)细胞分离流感病毒的结果比较，分析沈阳市ILI的病原构成及其对ILI%的影响，以筛选灵敏反映流感疫情的监测指标。

1 材料与方法 1.1 ILI数据的采集

根据国家流感中心流感监测方案的要求，由沈阳市2个国家级监测点即中国医科大学第二附属临床医院和沈阳市儿童医院的内科门诊和急诊科医生负责诊断ILI，每天统计ILI病例数以及该门诊的日门诊量，并将数据及时录入到流感/人禽流感监测信息系统中，以备分析。

1.2 标本收集及处理

于2007年1~4月从上述2个监测点采集发病3 d以内ILI病例的咽拭子标本118例，置于4℃转运箱中，并于采集当天分装为3份，于-70℃冻存。

1.3 MDCK细胞分离流感病毒及型别鉴定

采用国家流感中心配发的25代以内的MDCK细胞，按传染病国家诊断标准方案进行甲型和乙型流感病毒的分离〔1〕，血凝试验阳性的样品用该中心配发的标准血清进行血凝抑制试验加以分型。

1.4 多重巢式RT-PCR检测流感病毒及其他ILI相关性病原

依据文献〔2-5〕方法进行检测。

1.5 相关性分析

根据临床监测数据和实验室检测数据，分析计算出ILI%、MDCK细胞分离和多重巢式RT-PCR检测流感病毒阳性率，并绘折线图分析3者之间的相关性。

2 结果 2.1 ILI数据分析

在4个月的监测过程中，监测点医院的门诊量无明显变化，ILI%数值在5.0%左右波动(表 1)。

表 1 沈阳市2007年1~4月类流感样病例百分比

2.2 MDCK细胞分离流感病毒及型别鉴定(表 2)
表 2 沈阳市2007年1~4月类流感样病例病原构成情况

在118份样品中，共分离到流感病毒21株，其中甲型14株、乙型7株，平均阳性率为17.8%，1~4月阳性率依次为42.1% (8/19)，35.0%(7/20)，13.6%(6/44)和0(0/35)。

2.3 其他ILI相关病原

在13种ILI相关病原中，仅丙型流感和肠道病毒未检出，且除4月份PCR检测阳性率有所降低以外，1~3月检测的阳性率均在80%以上。

2.4 相关分析(图 1)
图 1 ILI%、MDCK细胞分离与PCR检测流感病毒阳性率

多重巢式RT-PCR检测流感病毒阳性率较MDCK细胞分离阳性率为高，但二者升降的趋势一致；而ILI%数据值没有较大的波动，与前两者间无明显相关性。

3 讨论

可导致类流感样症状的病原种类较为繁杂，常规的检测方法不但昂贵、耗时，且操作起来较为困难，不太适用于流感及禽流感的日常监测工作。可同时检测多种病原体的多重巢式RT-PR虽然在引物设计和摸索实验条件阶段较为困难，却是多种病原学诊断与监测的发展方向之一〔6〕。我们利用多年收集到的菌毒株，对文献中报道的多种多重巢式RT-PCR的方案进行了实验比对，筛选出目前采用的4组多重巢式RT-PR检测方案。

2007年1~4月，从沈阳市118例ILI咽拭子中共检测到11种病原体，基本上查明了ILI的病原谱。其中流感病毒分离率和PCR检测流感病毒阳性率均以1，2月份为高，3，4月份逐渐降低，二者的变化趋势一致，仅后者数值略高于前者，二者结果较为吻合，提示沈阳市春季的流感患者发病随时间的推移呈逐渐减少的趋势。而报告的ILI%数值却无明显的波动，与实际疫情可能存在一定程度的误差，很难单独作为指示流感流行情况的敏感指标。

另外，流感病毒占ILI病原的构成比仅在1月和2月超过50%，且不同月份的病原种类及其构成比均不尽相同，如支原体和衣原体集中出现在1月和2月，而冠状病毒和副流感病毒分别集中出现在3月和4月，鼻病毒和腺病毒则在4个月间持续存在。另外，鼻病毒、腺病毒、副流感病毒和衣原体的检测阳性率之和4月均在30%以上，是持续存在于ILI中的混杂因素。因此，流感的实际流行情况可能与仅依赖于病例报告而产生的ILI%间存在持续的不平行性，故ILI%自身难以准确指示流感病毒在人群中的流行情况，需要更加精确的ILI病例定义并辅助以其他敏感的实验室检测方法。如果将PCR检测ILI流感病毒的阳性率与报告的ILI%数值相乘，再辅之以一个修正系数，或许可以更好地反映流行性感冒在人群中的流行情况。

参考文献
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