2. 石河子大学医学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室
食管癌是一种十分常见的恶性肿瘤,我国的食管癌发病率居世界首位[1],而新疆哈萨克族又是食管癌高发民族,食管癌发病率远远高于我国的平均水平[2],但高发的原因仍不清楚。近年研究发现,肿瘤患者存在免疫功能紊乱,导致自身免疫现象发生[3, 4]。食管癌的发生发展与免疫功能异常存在密切关系,自身抗体参与食管癌的产生和发展[5, 6]。本课题前期研究表明,哈萨克族、汉族、维吾尔族人群在免疫水平及免疫状态上存在着民族差异性[7]。因此,为探讨与免疫功能密切相关的自身抗体表达的民族差异,是否与哈萨克族食管癌的高发有关,本课题应用间接免疫荧光法(IIF)对新疆境内汉族、哈萨克族正常人群血清中的抗核抗体进行检测分析,从细胞水平了解其体内抗核抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点,探讨自身抗体在民族间的差异性。
1 对象与方法 1.1 对象选择2006年1月~2006年9月在石河子大学医学院第一附属医院进行健康体检的本地汉族居民152人,其中男性96人,女性56人,年龄33~82岁,平均(59.71±9.83) 岁;选择2005年3月~2006年12月新疆北部哈萨克聚集地区哈萨克族健康居民184人,其中男性120人,女性64人,年龄35~80岁,平均(58.90±10.66) 岁。2组均无自身免疫疾病史,近1个月内无感染性疾病,年龄、性别均衡分布。
1.2 方法抽取静脉血2 ml,自然凝固后2 500 r/min离心10 min,吸取血清于-70保存。采用间接免疫荧光法(IIF)进行抗核抗体的测定,选择已固定在生物载玻片上的Hep-2细胞(来源于人喉上皮细胞癌,易感病毒多)和灵长类肝冰冻组织切片作为抗原组合成一个反应区,4℃保存备用。用磷酸盐缓冲液(PBS)-Tween按1∶100稀释待检血清,与组织细胞共同孵育30 min;加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG结合30 min;洗片、封片后荧光显微镜(日本Olympus公司)观察结果。组织或细胞内出现特征性的绿色荧光、血清稀释度1∶100为阳性[8],试剂盒(德国Euroimmun公司)。结果判定在石河子大学医学院一附院医学实验室进行;由石河子大学医学院病理教研室及新疆医科大学专家对结果进行确认,一致率达到90%以上。
1.3 统计分析采用SPSS软件进行统计分析,阳性率间比较采用χ2检验。
2 结果 2.1 不同性别ANA阳性率比较(表 1)表 1结果表明,2个民族ANA阳性率差异有统计学意义(χ2=5.71,P<0.05);2个民族不同性别ANA阳性率差异有统计学意义,女性均高于男性(汉族χ2=5.47,P<0.05;哈萨克族χ2=4.60,P<0.05)。
| 表 1 不同性别汉族、哈萨克族人群ANA阳性率比较 |
2.2 不同年龄ANA阳性率比较
汉族30~49岁,49~65岁,65岁~年龄组ANA阳性率分别为3.6%(1/28),12.7%(10/79),24.4%(11/45),差异均有统计学意义(χ2=7.73,P<0.05);哈萨克族分别为8.8%(3/34),25.0%(24/96),35.2%(19/54),差异均有统计学意义(χ2=6.51,P<0.05)。2个民族ANA阳性率均随年龄增长而升高。
2.3 ANA的荧光图型和细胞内定位(表 2)荧光显微镜下观察显示,哈萨克族与汉族在ANA荧光图形、靶抗原细胞内定位上皆有显著不同。2组虽然都是以颗粒型常见,但是汉族ANA荧光类型不如哈萨克族类型多样,未发现抗着丝点、抗溶酶体等抗胞质抗体。汉族抗核仁抗体阳性率为1.3%(2/152),哈萨克族抗核仁抗体阳性率为6.5%(12/184),哈萨克族抗核仁抗体阳性率高于汉族,差异有统计学意义(χ2=5.65,P<0.05)。
| 表 2 汉族与哈萨克族人群血清中抗核抗体的荧光图型变化 |
3 讨论
本文结果表明,汉族、哈萨克族ANA的表达不同,哈萨克族ANA阳性率高于汉族(χ2=5.71,P<0.05);哈萨克族ANA的荧光图形比汉族类型丰富,抗核仁抗体阳性率高于汉族。研究发现,汉族、维吾尔族、哈萨克族由于种族、环境的不同,造成免疫水平及免疫状态上的不同[7],而ANA是由机体免疫细胞所产生的针对自身细胞核成分的抗体[9]。哈萨克族在遗传背景、生活习俗及环境等与汉族不同,属于不同民族,这可能是ANA有所差别的原因。研究还显示,2个民族ANA阳性率均有随年龄增长而升高的趋势,且女性ANA阳性率均高于男性。提示血清ANA出现可能与衰老、女性内分泌失调有关。
哈萨克族和汉族人群的生理性自身免疫现象不同,在健康人群即具有较高的ANA阳性率和抗核仁抗体阳性率。提示自身抗体可能与哈萨克族食管癌的高发有关,而具体作用及其因素,有待进一步研究。
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2008, Vol. 24


