迷果芹(Sphallerocarpus gracilis)为伞形科(Umbelliferae)迷果芹属迷果芹的肉质根茎，又名黄参、黄葑、小叶山红罗卜。在我国黑龙江、吉林、甘肃、新疆、青海等地和蒙古及前苏联西伯利亚东部及远东地区均有分布^{[1, 2]}。黄参肉质根茎是一种纯天然保健食品，其中多糖是主要营养成分。目前，植物中多糖含量测定方法主要是硫酸-苯酚法^[3-6]。由于受到水解温度、时间、硫酸加入量等因素的影响，采用该方法测定多糖含量时，结果不稳定，误差较大^[7-9]。本文应用硫酸-苯酚法建立黄参多糖含量的测定方法，并分别观察温度、时间、浓硫酸加入量对黄参多糖水解的影响，优选其最佳测定条件。现报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料

T6-紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限分司)；BT-224s型电子天平(德国赛多利斯公司)；HH-s水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)。葡萄糖、浓硫酸、苯酚均为AR；黄参(甘肃省山丹县)经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为伞形科(Umbelliferae)迷果芹属迷果芹(Sphallerocarpus gracilis)的干燥根。黄参多糖样品由黄参经水提、醇沉、喷雾干燥所得(中国科学院兰州化学物理研究所甘肃省天然药物重点实验室)。

1.2 方法 1.2.1 标准溶液和样品溶液制备

(1)标准溶液制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约100 mg，置于100 ml容量瓶内，加水溶解并定容至刻度，即得标准品储备液。精密吸取标准储备液25.0 ml，置于250 ml容量瓶内，加水定容至刻度，即得标准品溶液，备用。(2)样品溶液制备；精密称取黄参多糖样品约50 mg，置于50 ml容量瓶中，超声溶解后，加水定容至刻度。吸取上述溶液5.0 ml，置于50 ml容量瓶中，加水定容至刻度，即得样品溶液。

1.2.2 样品测定

分别吸取标准品溶液、样品溶液0.6，2.0 ml，各置于10 ml具塞刻度试管中。标准品溶液试管中加水补充至2.0 ml后，各管中加入5%的苯酚溶液1.0 ml，浓硫酸7.0 ml，充分振摇，静置5 min，置于85℃水浴中加热15 min。取出，冷却至室温。以蒸馏水同法操作制备空白溶液。采用分光光度法，测定样品溶液的吸光度，根据下式计算样品中多糖含量^[5]：

式中：C为测得样品溶液中葡萄糖的含量(μg/ml)，D为样品溶液的最终稀释体积(ml),m为样品质量(μg)。计算得样品溶液中多糖相当于葡萄糖含量为71.3%，相对标准偏差(RSD)=0.73%(n=3)。

2 结 果 2.1 测定条件的优选 2.1.1 最大吸收波长确定

精密吸取标准溶液0.6 ml，按照1.2.2项制备供试液，以蒸馏水同法操作制备空白溶液。在200～600 nm范围内，用紫外分光光度计行全波长扫描，样品溶液在490 nm波长处有最大吸收峰，见图 1。

2.1.2 温度对黄参多糖水解的影响

分别吸取样品溶液各2.0 ml，共7份。各置于10 ml具塞刻度试管中，依次精密加入5%的苯酚溶液1.0 ml，浓硫酸7.0 ml，充分振摇，静置5 min。分别在室温、65℃，70℃，75℃，80℃，85℃，90℃水浴加热30 min后，取出。放至室温，测定吸光度，计算其相应含量。同法测定3次，结果不同温度下其相应平均含量分别为37.3%，38.6%，44.4%，65.3%，66.2%，71.3%，60.9%，表明黄参多糖在85℃时水解最完全。

2.1.3 时间对黄参多糖水解的影响

分别吸取样品溶液各2.0 ml，共6份。各置于10 ml具塞刻度试管中，依次精密加放5%的苯酚溶液1.0 ml，浓硫酸7.0 ml，充分振摇，静置5 min，于85℃水浴加热，时间分别设定为15，20，25，30，35，40 min。取出，放至室温，测定吸光度，计算其相应含量。同法测定3次，结果不同时间下其相应平均含量分别为71.25%、71.40%，68.54%，71.40%，70.21%，69.61%，表明黄参多糖在15～40 min范围内水解程度变化不大，相对标准偏差(RSD)为1.66%，故选择水解时间为15 min。

2.1.4 浓硫酸加入量对黄参多糖水解的影响

分别吸取样品溶液各2.0 ml，共7份。各置于10 ml具塞刻度试管中，精密加入5%的苯酚溶液1.0 ml，各加入浓硫酸6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0 ml，充分振摇，静置5 min，于85℃水浴加热15 min。取出，放至室温，测定吸光度，计算其相应含量。同法测定3次，结果不同浓硫酸加入量其相应平均含量分别为65.7%，68.9%，71.3%，68.0%，66.2%，63.7%，62.3%，表明浓硫酸加入量在7.0 ml时水解最完全。

2.2 方法学评价 2.2.1 线性方程、相关系数和线性范围

分别吸取标准品溶液0.0，0.2，0.6，1.0，1.4，1.8 ml，置于具塞刻度试管中，依次加水补充至最终体积为2.0 ml。各加入5%的苯酚溶液1.0 ml、浓硫酸7.0 ml，充分振摇，静置5 min，85℃水浴加热15 min。取出，冷却至室温。以蒸馏水同法操作制备空白溶液。以多糖浓度C(μg/ml)为横坐标，吸光度A为纵坐标进行线性回归。结果表明，在10.0～90.0 μg/ml浓度范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系。回归方程为：A=0.0103C+0.0198，r=0.9991。

2.2.2 稳定性试验

将样品溶液每隔30 min测定一次吸光度，连续30 d观察其稳定性。结果在24 h内溶液中多糖含量的RSD为0.5%，表明该法在24 h内基本稳定。

2.2.3 重现性试验

制备样品溶液4份。其多糖含量的RSD为0.74%。

2.2.4 加样回收率试验

称取黄参多糖样品约50 mg，制备样品溶液。分别精密吸取上述样品溶液0.5 ml共3份，置于10 ml具塞刻度试管中，依次加标淮溶液0.2，0.4，0.6 ml，各加水补至最终体积为2.0 ml。结果平均回收率为98.4%，RSD为1.21%(n=3)。

3 讨 论

本文优选最佳条件为：水解温度85℃，水解时间15 min，硫酸加入量7.0 ml。通过方法学评价，表明该法准确、稳定、可靠，可为黄参及其相关产品质量评价和工业化生产提供参考方法。