输血技术是现代医学不可缺少的重要治疗手段，但存在可感染输血传播病毒性疾病的风险，目前的血液检测由于受检测项目、检测技术等因素的影响，无法完全阻断经血传播疾病的发生；血液成分病毒灭活技术作为阻断经血传播病毒的最有效手段而受到关注，本文探索采用亚甲蓝/光化学方法的病毒灭活技术用于临床单袋血浆的病毒灭活，现将应用情况报告如下。

材科与方法

(1)血浆来源：选用浙江省绍兴市中心血站无偿献血400ml全血，于采后24h内4500×g离心10min)制各血浆100份备用；(2)试剂与仪器：亚甲蓝光照袋(上海血液技术有限公司，批号070726和071019，亚甲蓝含量为76～80μg/袋)；医用病毒灭活箱(上海通用机械集团)；全自动血凝仪(法国Stago公司)；732分光光度计(上海精密科学仪器有限公司，723型)；Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)；双缩脲蛋白测定试剂(宁波慈城生化试剂厂)；溴甲酚绿结合法白蛋白测定试剂(宁波慈城生化试剂厂)；Ⅷ因子测定试剂(法国思达高诊断公司)；纤维蛋白原磁珠法测定试剂(法国思达高诊断公司)：(3)亚甲蓝/光化学法病毒灭活；使用无菌技术连接血浆袋和亚甲监光照袋，将浆溶入亚甲蓝的血浆收集到光照袋后放入(4±2)℃医用病毒灭活箱，100份血浆加入亚甲蓝后含量为0.93～3.13 μmol/L(1.28±0.30 μmol/L)，其中4份容量为260～280 ml血浆加入亚甲蓝后浓度<1 μmol/L，经荧光(30000lx)照射35 min，用过滤器过滤血浆，经滤过后亚甲蓝残留量为0.07～0.62 μmol/L(0.23±0.12 μmol/L)，绝对残留量为0 014～0.146 μmol(0.005±0.026 μmol)。(4)血浆主要成分分析：在制备前随机抽取100份血浆，血浆量为200～280 ml，设亚甲蓝灭括病毒前组及亚甲蓝灭活病毒后组，分别对血浆主要成分进行下列成份测定：总蛋白、白蛋白、血浆Ⅷ因子、纤维蛋白原。(5)血浆中亚甲蓝含量检测方法：采用高效液相色谱法^[1]，用Waters 2695高效液相色谱仪测定，使用亚甲蓝(美国Sigma公司)作为标准品。(6)病毒灭活效果的测定：委托上海血液中心输血传染病研究室进行病毒灭活效果检测，采用口炎疱疹病毒(VSV)和Sindbis病毒作为指示病毒，以细胞病变法检测灭活前后病毒滴度检测，vero细胞作为指示细胞，病毒滴度按Karber法计算。(7)统计分析：应用Excel软件双重录入，采用SPSS12.5统计软件进行分析。

结 果

(1)病毒灭活效果：sindhis病毒和VSV病毒灭活前病毒滴度(lgTCID50)均为6.0，灭适后均为0.5，病毒降低量>4，病毒灭活效果符合国家规定要求^[2]。(2)亚甲蓝灭活病毒前后血浆有效成分测定(表 1)：实验对比测定了100份血浆灭活前后纤维蛋白原含量、总蛋白含量、白蛋白含量、血浆Ⅷ因子等4项生化指标的含量。结果表明，纤维蛋白原含量和白蛋白含量灭活前后差异有统计学意义(P<0.01)，纤维蛋白回收率为(87.4±11.3)％，总蛋白含量和血浆Ⅷ因子含量灭活前后差异无统计学意义(P>0.05)。

讨 论

亚甲蓝光化学法处理灭活病毒能够杀灭脂包膜病毒和一些非脂包膜病毒如甲型肝炎病毒和细小病毒B19等^[3]。从本文上述病毒灭活效果来看，亚甲蓝/光化学法对2种模型病毒杀灭效果均达到了血浆灭活病毒的病毒滴度的衰减要求^[2]。本研究中亚甲蓝最终残留量为0.07～0.62 μmol/L，平均浓度为0.23 μmol/L，以2L/50 (kg·bw)输注计，用最大浓度输注量不超过临床较低剂量0.5％，属于安全的剂量范围内。

本文还对随机抽样的100份亚甲蓝/光化学病毒灭活血浆的有效成分进行了检测，与未经灭活处理同份血浆相比，灭活后血浆除纤维蛋白原含量和白蛋白含量有所下降外，总蛋白含量、血浆Ⅷ因子水平未发生明显下降，这个结果与国内文献报道的血浆Ⅷ因子水平、总蛋白、白蛋白含量均有不同程度的下降^[4]。结果表明，引起下降的原因主要是由于时间造成，亚甲蓝/光化学作用和滤器不会造成血浆Ⅷ因子水平、总蛋白、白蛋白的含量，而纤维蛋白原回收率维持在83％左右的水平，全部成分均达到了国家标准的要求^[5]。通过实际应用认为，亚甲蓝/光化学病毒灭活血浆技术能够起到杀灭血浆中未检测病毒和弥补检测窗口期的作用，而且对血浆主要成分的影响不大，仍能够确保血浆有效成分的应用效果，它的应用可构筑防止输血传染病的最后一道防线，对提高输血安全水平意义重大。