鸭乙型肝炎病毒（DHBV）与人类乙型肝炎病毒（HBV）同属嗜肝DNA病毒科，并在形态结构、基因序列、病毒复制及致病机制等方面均较为相似^[1]。DHBV感染率有明显的种属及地区差异。为了解广西南宁地区成年麻鸭DHBV自然携带情况，探讨广西麻鸭作为HBV动物模型的可能性，采用PCR法对广西南宁地区成年麻鸭自然感染DHBV情况进行检测。

材料与方法

(1) 材料：①实验动物及处理：均为广西南宁地区成年麻鸭。120份鸭血取自南宁市某农贸市场，商贩宰杀鸭时用清洁容器接血。采集的鸭血放置于4 ℃冰箱中，4 000 r/min离心5 min，取血清，-20 ℃保存备用；②主要试剂及仪器：Taq酶（5 U/μl）、dNTP（2 mmol/L）、10×PCR Buffer、DNA marker（美国MBI公司）。③引物：上游引物序列为：5'-AACCATTGAAGCAATCACTAGAC-3'；下游引物序列为：5'-ATCTATGGTGGCTGCTCGAACTA-3'。目的片段大小为218bp（上海基康生物技术有限公司）。④PTC-220多通道PCR仪（美国MJ公司）；Gel Doc2000凝胶电泳成像分析系统、Power pac 300低压电泳仪（美国Bio-Rad公司）；(2)方法：①DHBV的DNA提取：采用直接加热法。每次取血清100 μl，沸水浴10 min，10 000 r/min离心5 min，取上清液2 μl；②加样：10×PCR Buffer 2.5 μl；MgCl2（2mmol/L）1.0 μl；dNTP（2 mmol/L）0.5 μl；上游引物（10 μmol/L）0.5 μl；下游引物（10 μmol/L）0.5 μl；Taq酶（5 U/μl）0.2 μl；加无菌双蒸水至23 μl；血清提取物2.0 μl；③PCR扩增：PCR 94 ℃预变性，10 min；94 ℃变性，30 s；55 ℃退火，30 s；72 ℃延伸，20 s。共反应40个循环。最后一个循环后72 ℃延伸5 min；④扩增产物电泳检测：2.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察扩增效果。用DNA marker鉴定片段大小，同时各设1组阳性和阴性血清对照。所有标本均采用复管检测。如果2管结果相同，则检测结果有效；如果2管结果不一致，则重复检测一次。

结果

麻鸭DHBV阳性血清的PCR扩增产物凝胶电泳后，用凝胶电泳成像分析系统观察，可见片段大小为218 bp的条带，与预期相符。120份血清标本中有31份为DHBV阳性，麻鸭DHBV自然携带率为25.8%（图 1）。

讨论

抗HBV药物的开发和评价中的重要环节之一就是建立一种方便有效的体内病毒感染模型。HBV是比较严格的嗜肝DNA病毒，其感染的宿主范围狭窄，具有明显的种属特异性，很难在普通实验动物中建立疾病模型。DHBV直径约为40nm，其形态与HBV相似；病毒DNA呈环状或部分单链结构，内源性DNA聚合酶可将其转变为双链环状，其DNA长度约为3000bp，和HBV的DNA长度一样。由于麻鸭易于孵育、饲养，使其在实验中感染DHBV并维持感染状态，从而较易建立一个与HBV感染相近似的体内实验系统。因此，DHBV实验动物模型已被作为HBV感染的模型用于实验研究^[2]。为了解广西南宁地区成年麻鸭DHBV自然携带情况，本调查共检测120份成年麻鸭血清，其中DHBV阳性31份，病毒携带率为25.8%。说明广西南宁地区成年麻鸭对DHBV易感，是研究抗乙肝药物较理想的动物模型。