龟叶草[Isodon excisus(Maxim)Kudo]系唇形科香茶菜属植物,又名尾叶香茶菜｡该植物在我国东北地区资源丰富^[1]｡近年来,国内外对其进行了研究,发现其所含的二萜类成分具有多种细胞毒作用^[2]､免疫调节作用^[3]及抗氧化作用^[4]｡本实验研究发现,龟叶草挥发油具有较强的抗炎作用^[5]｡为进一步发掘龟叶草不同化学组分的抗炎活性,对龟叶草不同化学组分的抗炎及镇痛作用进行了研究｡现将结果报告如下｡

小白鼠240只,体重18~22g,均为雄性(沈阳市双义实验动物研究所)｡

龟叶草(采自本溪市汤沟地区);氢化可的松(赤峰蒙欣药业有限公司,060701);生理盐水(沈阳志鹰制药厂,06090403);二甲苯(沈阳试剂一厂,881202);醋酸(国药集团化学试剂有限公司,20050720);伊文思蓝(国药集团化学试剂有限公司,71016588)｡

UV-2201紫外分光光度计(日本岛津公司);SB-2000型水浴锅､CA-1111型冷却水循环装置(日本东京理化株氏会社);电子分析天平(上海天平仪器厂);LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)｡

(1)龟叶草水煎液:称取龟叶草干叶200g,加水煮沸2h,浓缩成每毫升相当于生药1g的药液｡(2)龟叶草醇提液:称取龟叶草干叶800g,加95%的乙醇8L浸泡24h,浸提液浓缩至无醇味,配成每毫升相当于生药1g的药液｡(3)龟叶草总二萜溶液:称取龟叶草干叶200g,加95%的乙醇回流20h,浓缩得稠浸膏;将上述稠浸膏用甲醇溶解,1%活性碳脱色,浓缩后用丙酮溶解,取滤液浓缩至干粉,配成每毫升相于生药1g的药液｡(4)龟液草多糖溶液:将1500g龟叶草粉碎,80℃水溶恒温加热8h,过滤并浓缩｡将浓缩液加入1倍体积95%的乙醇,静置,抽滤,上层清液再加入3倍体积的95%乙醇,静置,抽滤｡将得到的固形物依次用95%的乙醇､无水乙醇､丙酮洗涤,干燥,得粗多糖,配成每毫升相当于生药1g的药液｡以上样品均120℃灭菌20min后冷藏备用｡

选用18~22g雄性小鼠,随机分组,每组12只,共10组｡生理盐水空白组0.1 ml/(10g·bw)､氢化可的松阳性对照组(20mg/kg)､龟叶草水煎液组､龟叶草醇提液组､总二萜组､多糖组(各组均分高低2个剂量5和2g/kg)｡各组动物经腹腔注射给药,1h后用致炎剂二甲苯(100%)涂右耳,左耳不做处理,0.5h后动物颈椎脱臼处死,沿耳廓基线剪下双耳,用7mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,电子天平称重｡右耳片减去左耳片的重量即为肿胀度,并计算抑制率(%)｡

选用18~22g雄性小鼠,分组同1.2.2｡各组动物腹腔注射给药,1h后尾静脉注射0.5%伊文思蓝(EB)溶液0.1ml/(10g·bw),立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1ml/(10g·bw),0.5h后动物颈椎脱臼处死,剖开腹腔,用5ml生理盐水冲洗,定容至10ml,离心,取上清液,在紫外分光光度计于590nm处测吸光度,并计算抑制率｡

与空白组比较,龟叶草水煎液的高低2个剂量,龟叶草醇提液的高剂量､龟叶草总二萜溶液的高剂量､龟叶草多糖溶液的高剂量都对二甲苯诱发的小鼠耳肿胀有显著的抑制作用(P＜0.05)｡组内高低剂量比较差异有统计学意义(P＜0.05),说明抗炎作用与剂量有关｡

表 1

表 1 叶草对小鼠耳廓肿胀抑制作用(x±s)

表 1 叶草对小鼠耳廓肿胀抑制作用(x±s)

与空白组比较,龟叶草水煎液的高低2个剂量,龟叶草醇提液的高剂量,龟叶草总二萜溶液的高剂量,龟叶草多糖溶液的高剂量都对醋酸致小鼠腹膜炎有显著的抑制作用(P＜0.05)｡组内高低剂量比较差异有统计学意义(P＜0.05),说明抗炎作用与剂量有关｡

表 2

表 2 叶草对醋酸致小鼠腹膜炎抑制作用(x±s)

表 2 叶草对醋酸致小鼠腹膜炎抑制作用(x±s)

本实验结果显示,龟叶草水煎液､醇提液､总二萜成分､多糖成分均有较明显的抗炎作用,尤其龟叶草水煎液效果更好,能非常好地抑制炎症早期的表现｡同时龟叶草醇提液､总二萜成分､多糖成分的抗炎作用差异无统计学意义｡龟叶草醇提液成分和总二萜成分水溶性较差,在配注射液时加入5%(w/v)Tween 80后,溶解性较好｡

植物的多糖是具有一定生物活性的化学成分^{[7, 8]}｡本实验中多糖提取液有较好的抗炎作用,但与龟叶草水煎液相比,其抗炎作用弱于龟叶草水煎液,说明多糖在龟叶草水煎液中具抗炎作用,但可能并不是抗炎的主要成分｡本实验提取的仅为粗多糖,含有一定量的杂质,并且实验所用的剂量较低,导致多糖的抗炎作用不十分明显,尚需进一步研究其抗炎作用及与剂量的相关性｡