中国公共卫生  2008, Vol. 24 Issue (9): 1105-1106   PDF    
引用本文
黄丽亚, 张宏, 余洁. 板党对冈田酸致大鼠阿尔茨海默病抗氧化作用[J]. 中国公共卫生, 2008, 24(9): 1105-1106.
HUANG Li-ya, ZHANG Hong, YU Jie Anti-oxigenated effect of codonopsis pilosula(Enshi) on Alzheimer disease of rat induced by okadaic acid[J]. Chinese Journal of Public Health, 2008, 24(9): 1105-1106.
板党对冈田酸致大鼠阿尔茨海默病抗氧化作用
黄丽亚, 张宏, 余洁     
湖北民族学院医学院, 恩施 445000
收稿日期: 2007-12-24
基金项目: 湖北民族学院生物资源利用与保护(湖北省)重点实验室资助项目(2006-A03)
摘要： 目的 观察板党对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马、皮质氧自由基和神经元微管相关蛋白(tau蛋白)表达的影响。 方法 于大鼠侧脑室注射冈田酸(Okadaic acid,OA)造模,用抗氧化剂维生素C(V,C)腹腔注射作阳性对照,测定正常对照组、阳性对照组、模型组、板党高、中、低剂量组海马、皮质超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化脂质(MDA)和tau蛋白的含量。 结果 模型组皮质SOD(114.98±22.90)、GSH-PX(13.11±1.78)和海马SOD(159.94±14.67)、GPK-PK(12.25±1.47)低于正常对照组(P<0.05,P<0.001),皮质MDA(5.38±2.76)t、au蛋白(174.97±12.89)和海马MDA(4.81±1.54)t、au蛋白(148.61±10.77)高于正常对照组(P<0.001)。板党各组与阳性对照组比较,SOD、GSH-PX、MDA和tau蛋白表达,在高(750 mg)、中(500 mg)剂量组差异有统计学意义(P<0.05),低(250 mg)剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 板党能增强脑组织SOD、GSH-PX活性、减少脑组织MDA蓄积、降低脑脊液tau蛋白水平。
关键词： 板党     冈田酸     SOD     GSH-PX     MDA     tau蛋白    
Anti-oxigenated effect of codonopsis pilosula(Enshi) on Alzheimer disease of rat induced by okadaic acid
HUANG Li-ya, ZHANG Hong, YU Jie     
Medical School of Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000, China
Abstract: Objective To observe the effect of codonopsis pilosula(Enshi)on expression of oxygenfree-radical and tauprotein in gyrus hippocampi and cerebral cortex of rats with Alzheimer disease induced by okadaic acid. Methods The rat model of Alzheimer disease induced by okadaic acid was employed.Positive control and test group were injected with Vit.C.Codonopsis pilosula(Enshi)groups and control group's supreoxide dismutase(SOD),glutathione per oxidase(GSH-PX),malondialdehy de(MDA)and tauprotein in gyrus hippocampi and cerebral cortex were measured. Results In contrast with control groups,concentrations of SOD(114.98±22.90),GSH-PX(13.11±1.78)and SOD(159.94±14.67),GSH-PX (12.25±1.47)in cerebral cortex and gyrus hippocampi of rats with Alzheimer disease were lower(P<0.05,0.001).Concentrations of MDA(5.38±2.76),Tau(174.97±12.89)and MDA(4.81±1.54),Tau(148.61±10.77)in cerebral cortex and gyrus hippocampi of model rats were higher than that of control group(P<0.001).Concentrations of SOD,GSH-PX,M DA and tau protein showed statistically significant difference between high(750 mg)and moderate dose(500 mg)model group(P<0.05),and the difference between lower dose group(250 mg)and model group was not signifieant(P>0.05). Conclusion Codonopsis pilosula(Enshi)can up-regulate expression of SOD,GSH-PX and down-regulate expression of MDA and tauprotein in brain tissues of experimental rats.
Key words: codonopsis pilosula     okadaic acid     SOD     GSH-PX     tauprotein    

湖北恩施自治州素有“中国硒都"之称,产于州内板桥镇的党参,习以板党冠名｡其化学成分含有多种微量元素(特别是硒)和氨基酸,民间常药食兼用,为抗疲劳､抗衰老滋补品[1]｡本文采用大鼠侧脑室注射冈田酸(OA)腹腔注射板党水提液的方法,并用维生素C(VC)腹腔注射作阳性对照[2],观察OA致阿尔茨海默病(AD)大鼠脑组织抗氧化酶､过氧化物和tau蛋白表达变化,探讨板党抗疲劳､抗衰老作用机制,为进一步开发利用提供科学依据｡

1 材料与方法 1.1 材料

板党(恩施峰岚桥党参有限公司),经双道束原子荧光光谱测定硒含量为0.79μg/ml,水提醇沉法制成含生药30%的注射液;OA(美国Sigma公司pH 7.4);tan蛋白试剂盒(Innogenetics NV,Belgium,批号:2007/07)SOD试剂盒,批号:2007423-4､GSH-PX试剂盒,批号,2007413-2;丙二醛(MDA)试剂盒,批号:2007413-2(南京建成生物工程研究所);(昆明金殿制药有限公司,批号:070608)｡WDF-U型脑立体定位仪(西安西北光电仪器厂);TL-16型高速低温冷冻离心机(上海实验仪器厂);全自动生化分析仪(酶免之星ELISA-STAR,瑞士哈美顿公司)｡

1.2 方法

雄性Wistar大鼠60只,鼠龄40~50周,体重300~500g(华中科技大学同济医学院动物中心)｡随机分为正常对照组､模型组､VC阳性对照组､板党高､中､低剂量组,每组10只｡实验大鼠腹腔注射20%戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后,固定脑立体定位仪上,颅顶正中矢状切开,行立体定位(前囟后3.8mm,中线旁开2.5mm,颅骨表面下3mm)｡正常对照组:用5μl注射器吸取生理盐水1μl,于10min内缓慢注入侧脑室｡模型组;用5μl注射器吸取OA(100mg/μl)1μl,于10min内缓慢注入侧脑室｡阳性对照组:在侧脑室注射OA后,一天2次,腹腔注射VC(3mg/kg)15d｡板党高中低组:在侧脑室注射OA后,一天2次,腹腔注射板党水提液(分别为750mg,500,250mg/kg)15d｡术后各组肌注青霉素(8万U)2d抗感染,正常喂养｡

1.3 标本测定

待板党､VC注射结束后,各组大鼠在清醒状态下断颈处死,迅速取脑组织分离出海马和皮质,制成匀浆并置-80℃冰箱待测｡测定超氧化物歧化酶(SOD)､谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)､MDA的含量,用Innogenetics NV的Inntest抗人tau试剂盒､双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA) 法,测定tau蛋白的浓度,全自动酶标仪ELISA-STAR读取吸光度(A)值,求r=a+bx的回归方程,依方程求tau蛋白值｡

1.4 统计分析

采用SPSS软件进行方差分析｡

2 结果 2.1 大鼠皮质抗氧化物及tan蛋白检测结果(表 1)

模型组与正常对照组比较,SOD(P＜0.05)､GSH-PX(P＜0.01)均降低,MDA(P＜0.001)､tan蛋白(P＜0.001)均升高｡板党各组分别与VC阻性对照组比较:SOD､GSH-PX,MDA和tau蛋白表达,高剂量组差异有统计学意义(P＜0.05),中剂量组SOD差异无统计学意义(P＞0.05),其余差异有统计学意义(P＜0.05),而低剂量组差异无统计学意义(P＞0.05)｡

表 1 同组别大鼠皮质MDA、SOD、GSH-PX和tan蛋白检测结果比较(X±s，n=10)

2.2 大鼠海马抗氧化物及tan蛋白检测结果

模型组与正常对照组比较,SOD(P＜0.05)､GSH-PX(P＜0.001)均降低,MDA(P＜0.001)均升高｡板党各组分析与VC阳性对照组比较(表 2),SOD､GSH-PX､MDA和tau蛋白表达,高剂量组差异有统计学意义(P＜0.05),中剂量组tau蛋白差异无统计学意义(P＞0.05),其余差异有统计学意义(P＜0.05),而低剂量组差异无统计学意义(P＞0.05)｡

表 2 不同组别大鼠海马MDA、SOD、GsH—PX和tan蛋白检测结果比较(X±s，n=10)

3 讨论

SOD､GSH-PX是机体重要的抗氧化酶｡SOD､GSH-PX､MDA为检测衰老最可靠的指标[3]｡Andreasen等研究显示,脑脊液(CSF)tau蛋白在老年痴呆症状出现前就开始增高[4]｡tau蛋白增高是AD病理改变的基础,为AD的重要生物标记[5]｡测定CSFtau蛋白水平,对AD临床诊断有帮助[6]｡

本实验在无商品化AD转基因动物模型的情况下,参照AD研究的报道[7],采用大鼠侧脑室注射OA的方法建立AD动物模型｡在此基础上,用保健治疗中药板党制成注射液对模型大鼠进行腹腔注射,观察板党对OA致AD大鼠海马和皮质SOD､GSH-Px､MDA､tau蛋白含量变化｡

结果显示,板党对OA诱导的实验性AD大鼠脑组织,有明显降低tau蛋白表达､增强SOD､GSH-PX活性､减少MDA生成的作用｡与VC比较,板党在高､中剂量效果更强,低剂量则效果相当｡证实了板党有滋补强身､延缓衰老的药理作用｡

参考文献
[1] 陈健, 胡常林. 党参对心脑缺血的保护作用[J]. 中国医院用药评价与分析, 2001, 1(1) : 54–55.
[2] Hampel H, Goernitz A, Buerger K. Advances in the development of biomarkers for Alzheimer disease:from CSF total tau and A β-42 ptroteins to phosphorylated tau protein[J]. Brain Res Bull, 2003, 61(3) : 243–253. DOI:10.1016/S0361-9230(03)00087-X
[3] 黄丽亚, 刘杰书. 盐酸丁咔地尔?维生素C对氟哌啶醇致阿尔茨海然病大鼠抗氧化酶表达作用的影响[J]. 中国微循环, 2006, 10(6) : 413–415.
[4] Balaban RS, Nemoto S, Finkel T. Mitochondria,oxidants and aging[J]. Cell, 2005, 120(4) : 483–484. DOI:10.1016/j.cell.2005.02.001
[5] 荒井启行, 佐藤和彦, 寺屿正教, 等. ??????病におけゐ,にぉけゐ生物学的诊断?としてのTau蛋白[J]. 日本老年医学会杂志, 1996, 33(9) : 669–671.
[6] Hampel H, Buerger K, Zinkowski R, et al. Measurement of phosphorylated tau epitopes differential diagnosis of Alzheimer disease comparative cerebrospinal fluid study[J]. Arch Gen Psychiatr, 2004, 61(1) : 95–102. DOI:10.1001/archpsyc.61.1.95
[7] 高峰, 周苏娅. 侧脑室注射白细胞介素22的心血管效应[J]. 中国应用生理学杂志, 2005, 21(2) : 156–159.