中国公共卫生  2008, Vol. 24 Issue (6): 695-696   PDF    
HIV-1感染者免疫学及血清学指标检测
杨彩霞1, 傅继华2, 毕振强2, 张静2, 尤向东2, 苏生利2, 林琳2     
1. 山东大学公共卫生学院, 济南 250012;
2. 山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
摘要目的 了解人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染者体内免疫学、血清学指标变化在疾病发展中的作用。 方法 应用免疫印迹实验(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞仪检测61例HIV感染者和56例艾滋病(AIDS)患者外周静脉血中的抗体、吸光度A值、T淋巴细胞亚群。 结果 HIV感染者和AIDS患者的CD4+(P < 0.0001)、CD4+/CD8+(P < 0.0001), 差异均有统计学意义。AIDS患者组中CD4+与CD8+(P=0.0051, r=0.369)呈正相关关系。HIV感染者CD4+与CD8+(P=0.239, r=0.153)无相关关系。 结论 不同病期的HIV感染者抗体、T淋巴细胞亚群指标明显不同, 该项指标检测可为HIV感染者的临床分期、判断预后和治疗提供依据。
关键词人类免疫缺陷病毒I型     T淋巴细胞亚群     免疫印迹试验     酶联免疫吸附试验    
Detection of immunological and serological indicator of HIV-1 infected individuals
YANG Cai-xia, FU Ji-hua, BI Zhen-qiang, et al     
School of Public Health, Shandong University Ji'nan 250012, China
Abstract: Objective To analyze HIV immunological and serological changes in HIV21 infected individuals and investigate their role. Methods Antibodies, absorptency A value and T cell subsets from 61 HIV infected individuals and 56 AIDS patients were detected by western blot test, FCM and ELISA respectively. Results HIV infected individuals and AIDS patients in different stages of infection had different CD4+ cell (P < 0.0001)、CD4+/CD8+ (P < 0.0001).Correlation analysis revealed a linear positive correlation between CD4+ and CD8+ (P=0.0051, r=0.369) in 56 AIDS patients.CD4+ and CD8+(P=0.239, r=0.153) had a negtive correlation in HIV infected individuals. Conclusion These results suggest that immunological and serological conditions of HIV21 infected individuals in different stages of infection were significantly different, so they can provided data for clinical stages and disease prognoses and treatment.
Key words: human immunodeficiency virus type I     T cell subsets     Western Blot Test     ELISA    

一般认为,人体感染免疫缺陷病毒(HIV)后,体液免疫与细胞免疫均发挥作用。细胞免疫在清除病毒中发挥重要作用,而体液免疫作用有限,并且二者的具体关系仍不明确[1]。由于CD4+细胞是HIV感染的主要攻击细胞,随着疾病进展,机体免疫系统遭到损坏,因此,CD4+细胞的进行性减少与病期密切相关。而血清中各种特异性抗体在不同阶段的分布特征也可能发生改变。为了解这两方面因素在不同病期HIV-1感染者中的变化和作用,我们对HIV-1感染者和艾滋病人(AIDS)免疫学和血清学指标进行了研究。现报告如下。

1 对象与方法 1.1 对象

根据我国2001年修订的国家《HIV/艾滋病的诊断标准及处理原则》[2],选取山东省内已确认的本底信息资料齐全,病程监测数据完整的HIV感染者和AIDS病人作为研究对象。其中AIDS病人56例,HIV感染者(无症状或有相关症状但不足以认定为发病的感染人群)61例。所有样本均未接受抗病毒药物治疗。用带有K3-EDTA的真空采血管采血5 ml,48 h内进行T淋巴细胞亚群检测。采样分离血清,用于酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验。

1.2 方法 1.2.1 仪器及试剂

Auto Blot System 36仪器(新加坡健利检验诊断私人有限公司);HIV Blot试剂盒(美国MP生物医学亚太私人有限公司);安图酶标仪(郑州安图生物技术有限公司);人类免疫缺陷病毒抗体(HIV-1+2)及抗原(HIV-1P24)联合检测试剂盒(法国梅里埃生物公司);FACS Calibur流式细胞仪及MultiTEST CD4/45/8/3试剂(美国BD公司)。

1.2.2 检测指标

抗体检测采用免疫印迹实验;T淋巴细胞亚群检测采用流式细胞仪单平台法;血清抗体吸光度(A)值检测采用酶联免疫吸附实验(ELISA)。

1.3 统计分析

采用Excel进行数据录入,应用SAS 8.2软件进行统计学分析。

2 结果 2.1 AIDS病人基本情况

男性32例,占57%;女性24例,占43%。年龄(37.98±11.64)岁。文化程度:文盲或小学27例,占48%;初中20例,占36%;高中以上9例,占16%。职业:农民39例,占69.64%;工人6例,占10.72%;商业人员4例,占7.14%;不详7例,占12.5%。传播途径:血液20例,占36%;性接触23例,占41%;吸毒3例,占5%;不详10例,占18%。

2.2 HIV感染者基本情况(表 1)

男性29例,占47.54%;女性32例,占52.46%。传播途径:血液15例,占24.59%;性接触33例,占54.1%;吸毒4例,占6.56%;不详9例,占14.75%。

表 1 AIDS病人WB反应带型分布

2.3 AIDS病人免疫印迹(WB)检测

56例AIDS病人血清的WB反应条带中,出现7条带以上(含7)的人数占78.57%(44/56)。其中抗外膜蛋白抗体出现率平均为98.81%,Gp120、Gp160为100%、Gp41为96.43%;抗聚合酶抗体出现率平均为73.81%,P66为76.79%,P51为71.43%,P31为73.21%;抗核心蛋白抗体出现率平均为47.32%,P55为14.29%,P24为98.21%,P17为57.14%。反应条带中P55缺失率最高为85.71%(48/56),P17次之。

2.4 HIV感染者WB检测(表 2)

61例HIV感染者血清的WB反应条带中,出现7条带以上(含7条)的人数占90.16%(55/61)。其中抗外膜蛋白抗体出现率平均为97.27%、Gp120、Gp160均为98.36%、Gp41为95.08%;抗聚合酶抗体出现率平均为96.72%,P66为98.36%、P51为96.72%,P31为95.08%;抗核心蛋白抗体出现率平均为86.88%,P55为63.93%、P24为100%,P17为96.72%。反应条带中P55缺失率最高为36.07%,P31和Gp41次之。WB反应带型分布。

表 2 HIV感染者WB反应带型分布

2.5 HIV感染者和AIDS病人WB反应带型的比较

P17+P24+P31+P39+Gp41+P51+P55+P66+Gp120+Gp160的出现率HIV感染者(36/61)和AIDS病人(7/56)差异有统计学意义(P<0.05)。

2.6 HIV感染者和AIDS病人吸光度A值比较

HIV感染者吸光度(A)值为3.1965±0.4353;AIDS病人吸光度(A)值为3.271±0.1532,2者差异无统计学意义(P=0.2132)。

2.7 HIV感染者和AIDS病人T淋巴细胞亚群数量比较

HIV感染者和AIDS病人CD45+、CD3+、CD8+、CD4+、CD4+/CD8+差异均有统计学意义。

2.8 T淋巴细胞亚群各因素相关性分析

AIDS病人组中CD4+与CD8+(P=0.0051,r=0.369),CD4+与CD3+(P=0.0004,r=0.454),CD4+与CD45+(P=0.0067,r=0.358),CD4+与CD4+/CD8+(P<0.0001,r=0.691)呈正相关关系;HIV感染者组CD4+与CD3+(P<0.0001,r=0.498),CD4+与CD45+(P=0.0037,r=0.366),CD4+与CD4+ /CD8+(P=0.0022,r=0.384)呈正相关关系;CD4+与CD8+(P=0.239,r=0.153)无相关关系。

3 讨论

本次研究表明,抗外膜蛋白抗体出现率为97.27%;抗聚合酶抗体出现率为96.72%;抗核心蛋白抗体出现率平均为86.88%,说明在这两阶段病毒复制活跃,与报道[3]基本相同。其中HIV感染者更易见到P17+P24+P31+P39+Gp41+P51+P55+P66+Gp120+Gp160带型,提示HIV抗体组分在不同阶段可能会发生变化。

在56例AIDS病人WB反应带型中,除Gp120、Gp160无缺失外,其余均有不同程度的缺失。其中P55缺失率最高,P17次之。而T Sudha的研究[4]则是P31最易缺失,P55、P66次之,并将P24+Gp41+Gp120+Gp160和(或)P51作为艾滋病期的指示带。病毒载量和CD4+计数通常用于疾病分期,由于二者所需仪器和试剂均较昂贵,所以在一些贫穷和边远地区用WB条带进行疾病分期具有实际意义。

结果显示,不同疾病阶段T淋巴细胞亚群数量差异有统计学意义,AIDS期T淋巴细胞亚群数量显著下降。各因素相关性分析显示,艾滋病(AIDS)病人组中CD4+与CD8+,CD4+与CD3+,CD4+与CD45+,CD4+与CD4+/CD8+呈正相关关系;HIV感染者组CD4+与CD3+,CD4+与CD45+,CD4+与CD4+/CD8+有正相关关系;CD4+计数与CD8+计数无相关关系。提示在不同疾病阶段CD4+与CD8+有着不同的关系,在宿主体内或许存在着CD4+与CD8+淋巴细胞不同的变化规律。进入艾滋病期,CD4+与CD8+淋巴细胞计数呈正相关关系。说明艾滋病期CD8+计数也显著下降,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答降低,机体功能日益受损。提示CD4+、CD8+ T淋巴细胞,并结合有关带型分布可为疾病分期等提供依据。

参考文献
[1] 郑锡文. 我国艾病流行病形势及预防与控制成就[J]. 中国性病艾病防治, 2000, 6(3) : 30–35.
[2] 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心. 艾滋病自愿咨询检测工作手册[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2006: 136.
[3] 尤向东, 傅继华, 王同展, 等. 2004年山东省艾病确认实验室检测结果分析[J]. 中国公共卫生, 2005, 21(11) : 1383–1384.
[4] T Sudha, V Lakshmi, V D Teja. Western Blot profile in HIV infection[J]. Indian Dermatol Venereol Leprol, 2006, 72 : 357–360. DOI:10.4103/0378-6323.27752