中国公共卫生  2008, Vol. 24 Issue (5): 513-515   PDF    
引用本文
李雪莲, 关鹏, 尹智华, 白维君, 崔泽实, 周宝森. 人乳头瘤病毒感染与非吸烟女性肺癌关系[J]. 中国公共卫生, 2008, 24(5): 513-515.
LI Xue-lian, GUAN Peng, YIN Zhi-hua, et al. Relationship between HPV infection and lung cancer in nonsmoking female[J]. Chinese Journal of Public Health, 2008, 24(5): 513-515.
人乳头瘤病毒感染与非吸烟女性肺癌关系
李雪莲1, 关鹏1, 尹智华1, 白维君2, 崔泽实3, 周宝森1     
1. 中国医科大学流行病学教研室, 沈阳110001;
2. 辽宁省肿瘤医院;;
3. 中国医科大学实验技术中心
收稿日期: 2007-10-08
基金项目: 国家自然科学基金(30471493);美国中华医学基金(00-726)
作者简介: 李雪莲(1981- )女,河北沧州人,硕士在读,主要从事肿瘤分子流行病学研究。
通讯作者: 周宝森
摘要： 目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与非吸烟女性肺癌的相关性,以及HPV感染对脆性组氨酸三联体(FHIT)基因杂合性丢失的影响. 方法 采用1:1匹配的病例对照研究方法,应用PCR技术检测肺癌组织与对照组织中HPV-DNA相关序列,同时检测FHIT基因杂合性丢失状况. 结果 肺癌组织HPV-E6检出率高于对照组,OR=3.500,高危型HPV感染肺组织中FHIT基因杂合子丢失率较高.同时HPV感染与口服避孕药的使用、烹调油烟暴露及既往肺部疾病史间存在交互作用. 结论 高危型HPV感染与女性肺癌的发生有关,HPV感染引发的肺癌可能与基因整合使FHIT基因杂合性丢失有关,同时与口服避孕药的使用、烹调油烟暴露及既往肺部疾病史等存在协同效应.
关键词： 人乳头瘤病毒     FHIT基因     女性肺癌    
Relationship between HPV infection and lung cancer in nonsmoking female
LI Xue-lian, GUAN Peng, YIN Zhi-hua, et al     
Department of Epidemiology, College of Public Health, China Medical University Shenyang 110001, China
Abstract: Objective To explore the relation between HPV infection and lung cancer in female nonsmoker,and to investigate its relationship with LOH of FHIT gene. Methods Lung cancer specimens and control specimens were examined for the sequences of nucleotide markers for FHIT gene and fragment of HPV DNA by PCR. Results HPVE6 had a higher prevalence in cancertissue than that in normal tissues,OR=3.500.In all 19 cases of HPV infection,there were 15 cases in which the FHIT gene LOH was found,more than that of non infection.HPV infection interacted with some lung cancer risk factors. Conclusion HPV infection contribues to lung cancer in nonsmo king female.LOH of FHIT gene might be involved in carcinogenesis of HPV related lung cancer,and has cooperative effect with other risk factors.
Key words: HPV     fragile histidine triad(FHIT)gene     lung neoplasms in female    

人乳头瘤病毒(HPV)是一种DNA病毒，感染人和动物的皮肤或粘膜可引起增殖性损伤。人类感染HPV十分普遍，在自然人群中感染率差异较大，从低于1%到高达50%，在性活跃人群中达20%～80%以上，女性高于男性[1, 2]。已有研究表明，HPV感染与泌尿生殖道、食管、头颈部、呼吸道等多个部位的肿瘤发生有关。

脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是一个重要的抑癌基因[3]。在宫颈癌的相关研究中已经有研究证实，HPV整合位点DNA的插入可能导致FHIT基因的断裂或失活，发现该基因的杂合性丢失与高危型HPV的感染有关[4]。本研应用聚合酶链反应(PCR)方法分析60例女性肺癌患者3号染色体长臂12～14区(3q12～14)3个位点微卫星多态标记物的杂合性丢失(LOH)，以期寻找肿瘤抑制基因FHIT的缺失区域。同时应用高灵敏度的PCR技术检测女性肺癌组织中的HPV DNA序列，探讨HPV感染、FHIT基因LOH与非吸烟女性肺癌发生的相关性，及HPV感染对FHIT基因缺失的影响。

1 对象与方法 1.1 对象

病例组织标本取自辽宁省级医院住院手术治疗非吸烟女性原发肺癌患者，年龄35～75岁，所有病例术前均未接受化学治疗及放射治疗，术后经病理证实为肺癌，实际收集有效病例60例，其中腺癌37例，鳞癌23例。对照为非吸烟女性，按年龄(±5岁)与病例1∶1匹配，标本为肺部良性病变(气胸22例，支气管扩张15例，肺结核球21例)病理标本58例及尸检正常肺组织标本2例。分类标记后，-70℃深冻保存。

1.2 方法 1.2.1 调查内容

采用统一的调查表进行调查。内容包括个人基本情况、生活方式、月经生育、既往疾病史等。

1.2.2 基因组DNA提取

TRIzol(invitrogen)试剂提取组织基因组DNA，紫外分光光度计测量A260，A280定量。DNA样品经0.1mol/L缓冲液调节pH值，加乙二胺四乙酸至终浓度1mmol/L，20℃保存。

1.2.3 HPV DNA检测(表 1)

引物：选用可扩增HPV各型的通用型引物L1及分别扩增HPV16、18型的E6、E7特异性引物3对。PCR扩增：PCR反应试剂(大连TaKaRa宝生物工程公司)。扩增条件为94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min共30个循环，72℃延伸5min。每次实验均设阳性对照，对照标本为已证实有HPV感染的尖锐湿疣标本，HPV16、18型对照分别用已知阳性感染的宫颈癌细胞系Siha、Hela基因组DNA。配制1.5%的琼脂糖凝胶，核酸染料染色，上样，100V电压下电泳约30min，于紫外透视仪上观察结果并照相。

表 1 HPV引物序列及长度（略）

1.2.4 FHIT基因杂合子丢失检测

FHIT基因引物：选择物理定位于3号染色体长臂12～14区域的3个位点的微卫星标志物：D3S1234，D3S1300，D3S1313。PCR扩增：扩增条件为94℃预变性2min，94℃ 30s，45℃ 30s，72℃ 1min共30个循环，72℃延伸5min。实验结果的观察：4l PCR扩增产物与等体积变性上样缓冲液(含98%去离子甲酰胺配制)混合，95℃变性10min，冰浴后骤冷，加样于含8mol/L尿素的8%变性聚丙烯酰胺凝胶，60V电压下电泳约4h，银染后观察。杂合性缺失的判定标准：将肿瘤组织与正常组织DNA PCR产物同时上样比较，若肿瘤的某一等位基因条带消失或相对密度减少50%以上，则记为LOH。

1.3 统计分析

将拟分析的因素分别予以量化和分级，建立SPSS 13.0数据库。分类资料采用x2检验分析相对危险度，进行多因素Logistic回归分析，叉生法分析HPV感染及FHIT基因与其他环境因素的交互作用，计算交互作用超额相对危险度(relative excess risk of interaction,RERI),交互作用指数(the synergy index S,S),归因交互效应百分比(attributable proportion of interaction,AP%),检验标准均为=0.05。

2 结果 2.1 HPV DNA PCR检测结果(表 2)

HPV通用序列L1在肺癌组织中的检出率为31.67%(19/60)，与对照组20.00%(12/60)比较差异无统计学意义，HPV特异序列E6、E7的检出率分别为20.00%(12/60)和15.00(9/60)。HPV E6序列检出即HPV16感染的非吸烟女性患肺癌的危险度是未感染者的3.50倍，P＜0.05。

表 2 HPV感染与非吸烟女性肺癌发生关系

2.2 FHIT基因LOH分析(表 3)

对3个位点进行LOH分析，60例肺癌组织中有35例(58.33%)存在一个或多个位点的LOH。D3S1234，D3S1300，D3S1313 3个位点的LOH发生率分别为26.67%，21.67%，23.33%。在HPV DNA检出的组织中该基因的杂合子丢失率更高(78.94%)，与HPV感染阴性的组织(48.78%)相比差异有统计学意义，OR=3.938，95%CI=1.115～13.903，提示HPV DNA的插入使FHIT基因多个位点杂合子丢失频率增加(P＜0.05)。

表 3 HPV感染对女性肺癌FHIT基因LOH危险度估计

2.3 非吸烟女性肺癌因素分析(表 4)

单因素条件Logistic回归分析表明，被动吸烟、饮酒、烹调油烟暴露、肺癌家族史、既往肺部疾病史、月经经期不规则、使用口服避孕药及多次流产均对非吸烟女性肺癌的发生产生影响(P＜0.05)。进一步多因素Logistic回归分析发现，既往肺部疾病史、烹调油烟暴露及口服避孕药是非吸烟女性肺癌的主要危险因素，其OR值分别为4.607，3.695，4.009。

表 4 女性肺癌危险因素Logistic回归分析

2.4 非吸烟女性各危险因素间交互作用

用叉生法分析表明，HPV感染与口服避孕药、既往肺部疾病史之间存在交互作用，其中与口服避孕药使用的交互作用较强，归因交互效应百分比可达56.2%(P＜0.05)，但FHIT基因杂合性丢失与以上危险因素之间未见有意义的交互作用。

3 讨论

HPV感染与非吸烟女性肺癌发生关系是目前研究的热点问题。Cheng[5]等研究肺癌与HPV感染关系时发现，女性肺癌患者HPV感染率明显高于男性。本研究采用通用引物L1及高危型HPV16/18特异引物E6、E7 3对引物检测的型特异性试验，检测发现肺癌组织HPV E6检出率高于正常对照，与上述研究结果相近。目前多认为HPV早期蛋白编码区的E6、E7与其致癌性有关，本研究E6 DNA序列的高检出率提示，HPV16感染与女性肺癌发生有关，推测HPV DNA可能以插入的方式整合入宿主染色体导致抑癌基因失活。抑癌基因FHIT易于断裂且覆盖HPV16整合位点，野生型FHIT基因可能由于病毒DNA整合发生LOH。李立等[6]研究显示，该基因的3个位点的LOH频率均>60%，本研究结果与其相似，且HPV感染者发生LOH频率较高。台湾一项研究证明，HPV 16DNA插入FRA3B位点是HPV相关肺癌发生的可能机制之一[7]，本研究也验证了该结果。

进一步分析危险因素发现，烹调油烟暴露、既往肺部疾病史及使用口服避孕药均对非吸烟女性肺癌发生有一定的作用，与以往研究结果一致[8]。叉生法分析各危险因素的交互作用，发现HPV感染与口服避孕药、既往肺部疾病史之间有交互作用，提示HPV感染扩大了外源性雌激素对女性肺癌发生的影响，有既往肺部疾病史的女性，HPV感染对其肺癌发生的影响更加明显。

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