目前食品中蛋白质的测定方法有蛋白质自动分析仪^[1]，近红外自动测定仪^[2]，紫外分光光度法^[3]以及凯氏定氮法^[4]等。本文采用纳氏试剂^[5]作为显色剂测定食品中蛋白质含量，适用范围广，可用于各类食品及保健食品的检测。用本法对标准品、质控样品进行测定获得满意结果，对批量样品的快速测定更具有实用性。现将结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 仪器与试剂

WFZ800-D3型紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)。分析纯硫酸、硫酸铜、硫酸钾。(1) 纳氏试剂：称取碘化汞100g及碘化钾70g，溶于少量无氨蒸馏水中，将此溶液缓缓倾入己冷却的32%氢氧化钠溶液500ml中，并不停搅拌，再用蒸馏水稀释至1L，贮于棕色瓶中，用橡皮塞塞紧，避光保存。(2) 硫酸铵标准储备溶液(1.0g/L)：精确称取经硫酸干燥的硫酸铵0.4720g，加水溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混均此液每毫升相当于1.0mgNH3-N(10℃下冰箱内储存稳定1年以上)。(3) 硫酸铵标准使用溶液(0.01g/L)：用移液管精密吸取1.0ml标准储备液(1.0g/L)于100ml容量瓶内，加水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于10.0μg NH3-N。

1.2 方法 1.2.1 标准曲线绘制

取25ml比色管7支，分别准确吸取0.01g/L硫酸铵标准使用液0.00，0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，10.0ml(相当于标准0.0，5.0，10.0，30.0，50.0，70.0，100.0μg)，加水至10ml刻度，于标准系列管中各加2ml纳氏试剂，混匀后放置10min，移入1cm比色皿内，以零管为参比，于波长420mm处测量吸光度，以标准管含量为横坐标(μg),对应的吸光度(A)值为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.2 样品测定

选择牛奶和奶粉为检测样品。精密称取样品0.1～2.0g置于250ml三角瓶中，加入0.2gCuSO₄、1.0gK₂SO₄、硫酸10ml，先小火加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，加大火力至液体呈蓝色，使H₂SO₄剩余量约为3ml左右为止，室温放冷后，沿瓶壁慢慢加入10ml水，移入100ml容量瓶中，用少量蒸镏水洗三角瓶3次，洗液全部并入容量瓶中，冷却，加蒸馏水至刻度，混匀。测定时取0.5ml，加水至10ml刻度，以后操作同标准曲线。同时做空白试验。

1.2.3 计算公式^[4]

式中：X-试样中蛋白质含量(g/100g或g/100ml)

C-试样测定液中扣除空白后氮的含量(μg)

V₁-试样消化液定容体积(ml)

V₂-测定用消化液体积(ml)

m-样品质量(g)或体积(ml)

F-氮换算为蛋白质的系数。

蛋白质的氮含量一般为15%～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.7，肉及肉制品为6.25，大豆为5.71。

2 结果 2.1 测定波长选择

含氮量为30μg的标准管在显色后，在波长400～440mm范围内每间隔5nm进行测定，最大吸收波长为420mm。

2.2 显色剂用量选择

含氮量为30μg的标准管分别加入不同量的纳氏试剂，在420mm的波长下分别测定其吸光度结果。纳氏试剂显色剂加入量为1.5～3.0ml时吸光度基本无变化，本法选择加入纳氏试剂2.0ml。

2.3 显色时间及稳定性

含氮量为30μg的标准管经显色后，分别在10，30min，1，2，4，8h进行测定。显色后10min～8h内吸光度稳定无变化。本法选显色10min后测定。

2.4 标准曲线

回归方程：y=0.016X-1.5×10^-3，r=0.9998，最佳线性范围0.0～100μg。

2.5 精密度

牛乳和奶粉2种样品分别取6份按本法重复测定6次，牛乳和奶粉精密度测定结果：平均数分别为3.06，23.50；标准差分别为±0.029，±0.073；相对标准偏差分别为0.31%，0.94%。

2.6 对2种样品利用标准加入法作回收试验(表 1)

结果可见，回收率为95.50%～99.44%。

2.7 2种方法测定结果比较

分别用GB/T5009.5-2003凯氏定氮法与本法测定。结果显示，2种分析方法的测定结果差异无统计学意义(t=0.026，P＞0.05) 。

2.8 测定标准物质

用本法测定4种不同的蛋白质标准物质，测定结果与标准物质含量一致。

3 小结

本文建立了以纳氏试剂作为显色剂快速测定食品中蛋白质的方法。本法的特点简单、快速，适用于批量样品测定。在碱性条件下NH_3-N与纳氏试剂反应生成的黄色化合物稳定。本法与国标凯氏定氮法进行比较t=0.026,P＜0.05，n=32，2种方法测定结果无明显差异。测定范围广，线性范围宽0.0～100.0μg；精密度高；相对标准偏差为0.31%～0.94%；回收率好，加标回标率为95.50%～99.44%。用本法测定标准物质结果一致，用于质量控制样本测定结果满意。本法仪器试剂简单，易于基层普及，有利于推广应用。