龟叶草(Isodon excisa)是唇形科香茶菜属植物，又名野苏子、狗日草，性甘味苦，多年生草本植物^[1]。龟叶草在民间用来治疗咽喉肿痛、风湿感冒、胃炎、关节肿痛、癌症早期、蛇虫咬伤等^[2]。我国从20世纪90年代开始对龟叶草植物进行研究，发现龟叶草植物中二萜类化合物具有抗癌及抗肿瘤作用^[2-4]。由于植物多糖多具有明显的生物活性^[5]。有学者对香茶菜属植物中挥发油化学成分进行研究^[6]，但其药理作用尚未明确，本文使用水蒸汽蒸馏法对龟叶草中挥发油进行提取，采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对其化学成分进行分离及鉴定，并研究其抗炎及镇痛作用。

1 材料与方法 1.1 动物

18～22 g昆明种小白鼠(沈阳双义实验动物研究所)。

1.2 原料与试剂

龟叶草(采自本溪市汤沟地区)；乙醚(天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20050014分析纯)；无水硫酸钠(国药集团化学试剂有限公司，批号：F20050612，分析纯)；二甲苯(沈阳试剂一厂，批号：881202，分析纯)；冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司，批号：T20050720，分析纯)；氢化可的松(安阳九州药业有限责任公司，批号：0602071) ；阿司匹林(沈阳澳华制药有限公司，批号：070302) 。

1.3 仪器

SB-2000型水浴锅(日本东京理化株氏会社)；CA-1111型冷却水循环装置(日本东京理化株氏会社)；电子分析天平(上海天平仪器厂)。

1.4 挥发油的提取与分离

(1) 挥发油的提取：龟叶草经第二军医大学药学院郑汉臣教授鉴定为唇形科香茶菜植物[Rabdosia excisa(Maxin) Kudo]。取该植物(除茎和根)1000 g粉碎，进行水蒸汽蒸馏，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液，用无水硫酸钠干燥24 h后，过滤，常压下蒸馏回收乙醚后得到具有特殊气味的淡黄色挥发油2.63 g，计算得油率为0.26%。(2) 挥发油的分离与测定：利用GC-MC法进行分离、测定。

1.5 药理实验方法^[7] 1.5.1 镇痛实验

扭体法测痛实验：取小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只。模型组(食用大豆油)、阳性对照组(阿司匹林60 mg/kg)、给予龟叶草组(0.014，0.028，0.055，0.100 ml/kg)，分别腹腔注射(0.1 ml/10 g)30 min后，注射0.6%冰醋酸溶液，5 min后，观察并记录注射0.6%冰醋酸溶液后20 min内小鼠因疼痛扭体的次数。计算各组平均值和抑制率。

1.5.2 抗炎实验

对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的影响：雄性小鼠60只，体重18～22 g，随机分成6组，每组10只，模型组(食用大豆油)、阳性对照组(氢考25 mg/kg)、给予龟叶草组(0.014，0.028，0.055，0.110 ml/kg)，分别腹腔注射(0.1 ml/10 g)30 min后，于小鼠右耳涂二甲苯适量，左耳保持原状，30 min后脱颈处死，剪下两耳用8 mm打孔器分别在同一位置打下圆耳片，电子天平精密称重，以左右耳片重量之差为肿胀度，计算抑制率=[(空白组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白组平均肿胀度]×100%。

2 结果 2.1 龟叶草挥发油化学成分

鉴定了其中的27个峰，已鉴定的成分占色谱总馏出峰面积的43.30%，主要成分为4-异丙基安息香酸甲酯(相对百分含量为6.76%)、2，10-二甲基-9-十一醇(相对百分含量为5.59%)、棕榈酸(相对百分含量为4.90%)、对烯丙基茴香醚(相对百分含量为4.35%)、2-乙基环已醇(相对百分含量为2.90%)、三聚乙醛(相对百分含量为2.90%)、2.5-十八碳二烯酸甲酯(相对百分含量为1.82) 、2，2-二甲基-(Z)-5-癸烯-3-炔(相对百分含量为1.55%)、5-甲基-2-异丙基环已酮(相对百分含量为1.50%)、3，7，11，15-四甲基-2-十六碳烯-1-醇(相对百分含量为1.46%)、顺式澳白檀醇(相对百分含量为1.33%)等。所得的化合物大部分为含氧的衍生物，少量为脂肪酸和芳香族化合物。

2.2 镇痛实验(表 1)

与空白组比较，阿司匹林组，龟叶草组剂量为0.028，0.055和0.100 ml/kg，差异均有统计学意义。抑制率分别为35.31%，40.83%和52.66%，龟叶草组随剂量的增大而增强。

2.3 抗炎实验(表 2)

与空白组、氢化可的松组比较，龟叶草组为0.028和0.055 ml/kg的2组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，抑制率分别为44.36%和26.72%。

3 讨论

实验结果表明，鉴定出的27个化合物，主要为含氧衍生物(醇、酯、醚等)，少量为饱和和不饱和直链烃。有文献报道，从吉林地区龟叶草茎叶中提取的挥发油主要成分为直链烷烃化合物^[6]，并含有3.630%亚麻酸和1.334%的亚油酸，不饱和脂肪酸可以降低血液中胆固醇的浓度，从而降低血液粘稠度，但在本实验测定的龟叶草挥发油中未发现不饱和脂肪酸，说明不同生长环境的锡叶草和不同部位所含挥发油的化学成分不同，因此，药理作用也不尽相同。

本实验采用小鼠扭体法对龟叶草挥发油镇痛作用进行研究，发现除最小剂量外，其他3个剂量与空白组差异均有统计学意义(P＜0.01) ，并且随着剂量的增大而增强，初步证明龟叶草具有很好的镇痛作用，其镇痛作用机制，尚需进一步的深入研究。

二甲苯引起小鼠耳肿胀实验结果表明，龟叶草挥发油抗炎作用并不是随其剂量的增大抗炎作用增强。

植物的挥发油是具有较好治疗作用的活性成分^[8]。本关验这对其化学成分及药理学研究，证明了辽宁地区龟叶草挥发油具有抗炎、镇痛作用，为这一药用植物的进一步开发提供基础依据。