中国公共卫生  2008, Vol. 24 Issue (4): 450-451   PDF    
引用本文
周远忠, 申旭波, 袁国平, 许洁, 范奇元. 大豆异黄酮对雄性子代大鼠生殖系统影响[J]. 中国公共卫生, 2008, 24(4): 450-451.
ZHOU Yuan-zhong, SHEN Xu-bo, YUAN Guo-ping, et al. Effects of soy isoflavone on reproductive system of male rats[J]. Chinese Journal of Public Health, 2008, 24(4): 450-451.
大豆异黄酮对雄性子代大鼠生殖系统影响
周远忠1, 申旭波1, 袁国平2, 许洁1, 范奇元1     
1. 遵义医学院预防医学教研室 遵义 563003;
2. 贵州省习水县土城镇卫生院
收稿日期: 2007-07-18
基金项目: 贵州省教育厅基金资助(2902224)
作者简介: 周远忠(1974- ),男,士家族,重庆人,讲师,主要从事生殖毒性学研究。
通讯作者: 范奇元
摘要： 目的 探讨雌性孕期大鼠大豆异黄酮暴露对雄性子代生殖系统的影响。 方法 SD雌性大鼠按2:1比例与雄性大鼠同笼交配获取40只孕鼠。将孕鼠随机分为4组,在孕期13~19 d将大豆异黄酮以花生油为溶剂灌胃染毒,子一代雄鼠继续饲喂至90 d剖杀。 结果 150及450 mg/kg大豆异黄酮组子代大鼠睾丸重量分别为2.68和216g,碱性磷酸酶活性分别为1 078.88和1058.88U乳酸脱氢酶水平分别为2 678.88和1 529.38U,精子活动度分别为20.12%和2 413%,附睾尾精子计数分别为50×106g和40.5×106%,睾丸每日精子生成量分别为19.46106/(g·d)和6.21106/(g·d),与对照组比较均显著下降(P＜0.05)且表现出剂量-效应关系。 结论 大鼠孕期较大剂量大豆异黄酮暴露对雄性子代生殖系统具有损伤作用。
关键词： 异黄酮     生殖     睾丸    
Effects of soy isoflavone on reproductive system of male rats
ZHOU Yuan-zhong, SHEN Xu-bo, YUAN Guo-ping, et al     
Departraent of Preventive Medicine, Zunyi Medical College, Zunyi 563000, China
Abstract: Objective To explore the effects of prenatal soyisoflavone exposure on reproductive system of offspring male rats. Methods 40 preg nant rats which mated with male rats according to 2:1 ratio,were divided into four groups randomly.Soy isoflavone was conducted to the pregnant rats by garage(peanut oil.worked as solution,was delivered to control group) during the period of E13~E19.F1 male rats were sacrificed on 90th day. Results The measured indices of F1 male rats in the 150 and 450mg/kg soy isoflavone exposure groups were:aver age testis weights 2.68 and 2.16g,alkaline phosphatase activities 1078.88 and 1058.88 U,levels of lactate dehydro genase 2 678.88 N and 529.38 U,sperm motility 20.12% and 24.13%,sperm counts in the tail of epididymis 50×106/g and 40.5×106/g,sperm productions per day 19.46106(g·d)and 16.21106/(g·d)respectively.All indices mentioned decreased significantly compared with those in the control group and showed does-effect relationship with soy isoflavone. Conclusion High dose of soyisoflavone exposure might bring hazards to the F1 male reproductive system in differentiation period of reproductive system.
Key words: isoflavane     reproduction     testis    

大豆异黄酮(soy isoflavone)是人豆中的一种生物活性物质。大豆异黄酮具有抗肿瘤，预防心血管疾病，降血糖等[1-3]作用。但是，由于其具有雌激素样活性，也存在对雄性生殖系统造成危害的可能性。本实验观察大鼠孕期大豆异黄酮暴露对其子一代(F1) 雄性大鼠生殖系统的影响，研究在生殖系统发育最敏感期大豆异黄酮对雄性生殖系统的作用。

1 材料与方法 1.1 动物

清洁级SD大鼠雄性30只，体重(250±20) g;雌性60只，体重(200±20) g(第三军医大学野战外科研究所动物室)，动物合格证号：SCXK(渝)20020003。

1.2 主要试剂和仪器

大豆异黄酮(华北制药股份有限公司，纯度>99%)；OLYMPUS270全自动生化分析析仪配套试剂(日本OLYMPUS公司)；睾酮-19位测试盒(北京北方生物技术研究所)。OLYMPUS270全自动生化分析仪(日本OLYMPUS公司)；GC-2010型10探头γ放射免疫计数器(中科大中佳公司)。

1.3 动物处理

雌性SD大鼠按2:1比例比雄性大鼠同笼交配，次日晨将雌鼠逐一阴道涂片镜检，发现精子当日记为孕期0d(以后依次为孕期0d、1～2d)，获取40只孕鼠，将其随机分为4组，每组10只：A：正常正对组B：大豆异黄酮低剂量组(50mg/kg),C:大豆异黄酮中剂量组(150mg/kg)，D：大豆异黄酮高剂量组(450mg/kg)。在孕鼠孕期的13～19d，对照组每天灌饲生油2ml，其余各组每天将溶于2ml花生油大豆异黄酮按剂量灌胃染毒。孕鼠生产后将F1雄鼠每窝减至3只，饲养至90d时，各剂量组F1雄鼠均随机抽取10只称重，断头取颈动脉血，剖杀取睾丸、附睾，检测各指标。

1.4 检测方法及指标

取一侧睾丸、附睾，称重并计算睾丸、附睾脏器系系。取另一侧附睾，准确称重，精子活动度分析、附睾尾精子计数、每克睾丸每日精子生成量检测方法按文献[4]。睾丸组织加2倍量双蒸水在12000r/min的转速下匀浆，然后4℃、14000r/min离心30min，取上清，采用全自动生化分析仪测定碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)。大鼠断头取颈动脉血，4℃、2000r/min离心15min，取血清，按测试药盒的说明书提供的方法测定睾酮。

1.5 统计分析

采用SPSS11.5软件进行统计分析，进行方差齐性检验和正态性检验呈正态性分布且方差齐资料，采用方差分析。差异有统计学意义的资料，进一步做q检验和spearman相关分析。

2 结果 2.1 大豆异黄酮对子代大鼠睾丸重量和脏器系数的影响(表 1)

与对照组比较，大豆异黄酮各剂量组子鼠睾丸重量降低，差异有统计学意义(P＜0.05) ，且呈现剂量效应关系(r=-0.906,P＜0.01) ；与对照组比较，高剂量组子鼠睾丸系数、附睾重量降低，差异有统计学意义(P＜0.05) 。

表 1 不同组别雄性子鼠脏器重量和脏器系数比较(x ± s)

2.2 大豆异黄酮对精子数量、质量的影响(表 2)

与对照组比较，各剂量组子鼠精子活动度、附睾尾精子计数、每克睾丸每日精子生成量均较低，差异有统计学意义(P＜0.05) ，且呈现剂量-效应关系(r分别为-0.559，-0.564，-0.759，P＜0.01) 。

表 2 不同组别雄性子鼠精子质量比较(x ± s)

2.3 大豆异黄酮对精子LDH和ALP的酶活性强度及血清睾酮的影响(表 3)

与对照组比较，中、高剂量组子鼠睾丸组织中的ALP、LDH均降低，差异有统计学意义(P＜0.05) ，且呈现剂量效应关系(r分别为-0.485，-0.837，P＜0.01) ；而睾酮在各组间差异无统计学意义。

表 3 不同组别雄性子鼠精子酶活性及血清睾酮(x ± s)

3 讨论

本实验结果显示，大鼠孕期50mg/kg及以上剂量的大豆异黄酮暴露，可导致雄性子鼠精子数量和运动能力下降，睾丸组织中ALP和LDH活性的下降，并呈现剂量-效应关系。大豆异黄酮对生殖器官无明显有害作用剂量(NOAEL)可能＜50mg/kg，与崔洪斌等[5]结果类似。本实验得出的NOAEL更低。可能原因：(1) 本研究采用的是孕期暴露，可能对大豆异黄酮更敏感。Lee BJ[6, 7]的实验也有类似的结果，金雀异黄素作用于青年大鼠可导致其精子计数降低，而成年大鼠则未观察到生殖系统的不育影响。(2) 崔洪斌等人的实验是采用饲料中掺入固定浓度大豆异酮的方法给药，推测在掺入大豆异黄酮浓度较高时，大豆异黄酮对大鼠造成一定危害后，可能会引起大鼠的进食量减少，导致大豆异黄酮的实际摄入剂量降低。(3) 本研究采用睾丸每日精子生成量和附睾尾精子计数指株，根据实验结果，可以认为这些指标更为灵敏。

参考文献
[1] Lamartinere A, Cotroneo MS, Fritaz WA, et al. Genistein chemoprevention:timing and mechanisms of action in murine mammary and prostate[J]. J Nutr, 2002, 132(3) : 552–558.
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[6] L ee, B J, Jung EY, Yun Y W, et al. Effects of exposure to genistein during pubertal development on the reproductive system of male mice[J]. J Reprod Dev, 2004, 50(4) : 399–409. DOI:10.1262/jrd.50.399
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