伏马菌素(fumonisin，FB)是近年来发现的一组镰刀菌产生的真菌毒素，其中FB₁是污染玉米的主要成分，也是导致伏马菌素毒性作用的主要原因，广泛存在于世界范围的玉米及其制品中，对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁，成为真菌毒素中继黄曲霉毒素后的又一个研究热点^[1]。国际癌症研究中心(IARC)把FB划分到2B组，即人类可能的致癌物^{[2, 3]}。用于分析玉米和玉米制品中的FB的方法有数种，包括薄层色谱法(TLC)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)等。HPLC方法具有灵敏度高、稳定性好的特点，一般定量检测玉米及玉米相关食品中的FB多采用此种方法^[4]。为提高其检测的准确性，本研究利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱法检测玉米产品中FB₁。现报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 仪器和试剂

液相色谱系统(包括Waters510泵、Waters420荧光检测器，美国Waters公司)；液相色谱柱(150×4.6mm，用5μm的ODS填装不锈钢C18反相柱)；固相提取柱、真空多歧管固相萃取装置(美国Varian公司)；普通离心机(上海医用分析仪器厂)；超声波清洗器(上海超声波仪器厂)；粉碎机(河北仪器厂)；滤膜(孔径0.45μm)；伏马菌素B1、2-巯基乙醇、邻苯二甲醛(美国Sigma公司)；甲醇、乙腈(均为色谱纯，山东禹王实业有限公司)；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 样品

样品采自沈阳市售玉米及玉米面。

1.2 方法 1.2.1 仪器条件

流动相：甲醇-0.1mol/L NaH2PO4(77:23，V：V，PH3.3) ；流速：1ml/min；荧光检测器波长：激发波长333nm，发射波长425nm；进样量：10μl。

1.2.2 样品处理

研磨玉米使其90%可以通过250～500μm网筛。称取25g样品加到塑料离心管中，加入50ml甲醇水溶液(3:1) ，振荡混合3min。混合液离心10min，用1mol/L的NaOH调pH值5.8～6.5之间，中性滤纸过滤。

装SPE柱，用5ml甲醇洗柱，再用5ml甲醇水(3:1) 过柱。精密量取10ml提取液，过SPE柱(速度≤2ml/min)，然后依次用5ml甲醇水(3:1) 、3ml甲醇洗柱(避免SPE柱变干)，再用1%冰醋酸甲醇溶液10ml洗脱毒素(速度≤1ml/min)，用20ml大试管收集洗脱液。取4ml洗提液，在60℃用氮气吹干。用1ml甲醇溶解残留物并定容到4ml，再次在相同条件下吹干。干燥样品残留物可在4℃保存1周。

1.2.3 衍生化及HPLC分析

用200μl甲醇溶解上述残留物。取20μl加到小试管中，加入180μl邻苯二甲醛(OPA)试剂，混合。在加入OPA试剂1min内吸取10μl注射到LC系统。所有的FB₁峰应该是单个的。以样品提取液的峰与FB₁标准品的峰保持时间进行比较、鉴定(出峰时间相同)。如果样品提取液的FB₁峰超过FB₁标准品的峰，需用甲醇再次稀释提取液并再次衍生。

1.2.4 标准曲线的制作

准确吸取浓度为1mg/ml的FB₁储备液，配制成0.1，0.2，0.5，1，2，5，10，20μg/ml浓度标准液，取20μl FB₁标准品工作液到小试管中，加入180μl OPA试剂，漩涡震荡混合。10μl进样(在加入OPA试剂1min内)，以FB₁浓度对峰面积制作标准曲线。

2 结果 2.1 标准曲线

以FB₁标准液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，制得标准曲线。回归方程为：Y=1.08e⁺⁶X(r=0.998，P＜0.05) ，FB₁的最低检出浓度为0.1μg/ml。

2.2 回收率(表 1)

做1，5，10μg/ml 3个加标浓度的回收率测定实验。回收率在71.77%～102.68%之间，平均回收率为84.72%，总变异系数为12.17%。

2.3 准确度和精密度

准确度试验以回收率表示；精密度试验用1，5，10μg/ml 3个加标浓度的样品，每份样品3个平行样，在相同条件下连续6d重复测定，计算各浓度测定结果的变异系数，分别为6.02%，3.81%和4.32%。

2.4 样品测定

用本方法检测24份沈阳市售玉米及玉米制品，阳性率为42.83%，阳性样品中FB₁平均含量为(0.67±0.03) μg/g。

3 讨论

FB是一组结构相似的双酯类化合物，属于极性分子，为白色粉末状，易溶于水、甲醇及乙腈一水中，适合采用反相HPLC法检测。由于它们缺少一个重要的紫外发光团，没有固有的荧光，因此，分析天然污染样品中FB的HPLC方法需要在样品提纯后进行衍生化。在近期的一个世界范围的玉米及玉米制品中FB的污染水平调查中，90%以上的实验室是使用柱前衍生的HPLC方法进行定量检测^[4]。本文建立的采用OPA柱前衍生的HPLC方法检测沈阳市售玉米中FB₁结果，与作者其他方法检测的结果一致^[1]，且快速、经济、灵敏度高、准确可靠。