人谷胱甘肽硫转移酶(glutathione-S-transferases，GSTs)为一组超基因家族蛋白酶，它主要催化外来环境化合物质，最终代谢减毒或代谢活化。谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM1)是GSTs超基因家族中一种重要同工酶，其基因在人群中呈多态性分布，其遗传多态性主要由相关编码基因的缺失所致。研究表明，GSTM1基因缺失型与多种肿瘤及心脑血管疾病的易感性有关^[1-3]。本研究探讨汉族和瑶族人群GSTM1基因多态性分布规律，评估广东地区不同民族健康人群环境化学致癌风险和其他相关疾病的风险，为相关疾病预防措施提供基础资料。

选择广东省连南县大麦山镇和寨岗镇瑶族、汉族健康人群为研究对象。研究对象为15～65岁健康人群，无任何既往肿瘤史及放化疗史、严重的心血管疾病及慢性疾病、精神异常及其他重大健康问题，个体间3代内无血缘关系，其家族定居当地已有3代或3代以上。瑶族健康人群237人，其中男性116人，女性121人。汉族健康人群229人，其中男性105人，女性124人。

采用统一的调查表对研究对象进行面对面的询问。研究对象均采集外周静脉血3～5ml，ACD抗凝，-80℃冰箱长期保存。

引物由上海生物工程有限公司合成。TaqDNA聚合酶及配套缓冲溶液(大连宝生物公司)。梯度PCR仪(美国Biometra公司）；凝胶显像分析仪(法国Vilber Lourmat公司)。

根据文献^[4]合成2对引物。GSTM1基因引物：扩增片段长215bp，其引物序列为上游5′GAA CTC CCT CGAAAAG CTAAAGC3′；下游5′GTT GGG CTC AAA TAT ACG GTG G3′内对照(β-action)引物：扩增片段长268bp，引物序列为上游5′-GAA GAG CCA AGG ACA GGT AC-3′，下游5′-CAA CTT CAT CCA CGTTCACC-3′。

采用经典酚／氯仿法抽提DNA，双重PCR法分析GSTM11基因型。PCR反应体系：总体积20μl，体系终浓度为1×PCR缓冲液，0.2mmoL/L dNTP,引物各0.1μmoL／L，模板DNA(0.1μg)，TaqDNA聚合酶1U；反应条件：预变性95℃10min,95C变性45s，58℃退火45s，72℃伸45s，共35个循环，最后72℃延伸10min；反应产物：在质量浓度2％琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml溴化乙锭)电泳30min(110V)，凝胶显像分析仪观察结果。

采用SPSS 11.5软件进行χ²检验等。

GSTM1基因型分析结果依电泳结果判定：(1)只有1条268bpβ-Globin内对照目的条带为GSTM1基因缺失型；(2)在215和268bp处有2条目的条带，判定为GSTM1基因非缺失型。

图 1

注：M：DNA Marker;3,6,7,8:GSTM1基因缺失型；1,2,4,5,9:GMTM1基因纯合子或杂合子缺失型。 图 1 GSTM1基因分型凝胶电泳图

瑶族与汉族人群的GSTM1缺失基因型频率分别为68.35％(162/237)及64.19％(147/229)，2者差异无统计学意义(χ²=0.90，P=0.34)。汉族或瑶族人群中GSTM1缺失基因型频率的性别分布差异亦无统计学意义(χ_汉²=0.15，P=0.70；χ_瑶²=0.007，P=0.94)。

表 1

表 1 广东省汉族和瑶族人群GSTM1基因型分布频率

表 1 广东省汉族和瑶族人群GSTM1基因型分布频率

广东省瑶族和汉族人群GSTM1基因多态性分布频率高于不同地区的汉族人群、韩国人和新疆维吾尔族人(P>0.05)，但明显高于美国黑人(P<0.05)。

表 2

表 2 不同人群的GSTM1缺失基因型频率（%）

表 2 不同人群的GSTM1缺失基因型频率（%）

目前中国己有部分城市开展了汉族人群GSTM1基因多态性研究^[4-7]，但瑶族人群GSTM1基因多态性研究报道较少。本研究表明，广东省连南地区汉族人群和瑶族人群GSTM1缺失型基因频率分别为64.19%，68.35%，略高于广东省梅州客家方言地区62.11％^[6]，新加坡华裔63.10％^[11](主要来自福建、广东地区客方言和潮汕方言人群)，稍高于广东粤语方言地区汉族人群56.78％^[7]。与中国其他城市汉族人群GSTM1缺失型基因分布频率比较，广东连南地区汉族人群GSTM1缺失型基因频率(64.19％)高于上海^[4]、东北及河南^[8]等地区的汉族人群GSTM1缺失型基因频率范围为48.86％～56.44％。从现有的资料来看，总体趋势表现为广东地区的汉族人群GSTM1缺失型基因频率高于中国其他地区，而且各个地区的分布频率并不尽相同，提示汉族人群表现出基因型上的一定同质性，但也存在异质性遗传因素。