引用本文
黄德蕙, 梁江明, 秦石英, 曾峻, 鲁翠芳, 廖驰真, 廖升华, 王利荣, 罗寿军, 宁代杰, 李红军, 农雪飞, 徐建国, 海荣, 张志凯, 徐冬蕾. 胶体金免疫层法在鼠疫监测中应用效果评价[J]. 中国公共卫生, 2008, 24(2): 209-210.
HUANG De-hui, LIANG Jiang-ming, QIN Shi-ying, et al. Evaluation on application of immunochromatographic assay in plague surveillance[J]. Chinese Journal of Public Health, 2008, 24(2): 209-210.
胶体金免疫层法在鼠疫监测中应用效果评价
黄德蕙
1, 梁江明
1, 秦石英
1, 曾峻
1, 鲁翠芳
1, 廖驰真
1, 廖升华
2, 王利荣
2, 罗寿军
2, 宁代杰
3, 李红军
3, 农雪飞
3, 徐建国
4, 海荣
4, 张志凯
4, 徐冬蕾
4
1. 广西壮族自治区疾病预防控制中心鼠防科 南宁 530028;
2. 广西隆林县疾病预防控制中心;
3. 广西西林县疾病预防控制中心;
4. 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
收稿日期: 2007-05-24
基金项目: 国家“十五”攻关项目(2004BA718B07-01)
作者简介: 黄德蕙(1965- ),女,壮族,广西人,主管技师,大专,主要从事自然疫源性疾病研究。
摘要：
目的
了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其优劣。同时观察56℃30 min灭活与升汞盐水作用1 min对鼠疫菌F1抗体检测的影响。
方法
对2006年从广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫抗体阳性患者血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测。
结果
鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌Fl抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例,胶体金检测鼠疫菌Fl抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性。
结论
升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要意义。
关键词：
鼠疫菌
胶体金免疫层析法(ICA)
鼠疫监测
Evaluation on application of immunochromatographic assay in plague surveillance
HUANG De-hui, LIANG Jiang-ming, QIN Shi-ying, et al
Guangxi Center for Disease Prevention and Control, Nanning 530021, China
Abstract:
Objective
To evaluate the effectiveness,pros and cons of immunochromatogragphic assay(ICA)in plague surveillance,and to study the effects of mercuric chloride treatment for 1 minute and heat inactivation at 56℃ for 30 minutes on detect ion of antibody against Yersinia pestis F1 antigen in serum.
Methods
In 2006,organs and serum samples from rats and cases were obtained during the plague surveillance in Longlin and Xilin counties.ICA was used to detect F1 antigen of Yersinia pestis in rat or gans and F1 antibody in sera.
Results
A total of 120 rat liver and 99 spleen samples were tested negative for Yersinia pestis F1 antigen;all 235 rat serum samples were negative for F1 antibody.Two(7.41%)of the 27 plague cases were positive for F1 antibody after heat inactivation of sera,but none was positive after mercuric chloride treatment.
Conclusion
Mercuric chlor ide inhibits the detection of Yersinia pestis F1 antibody.ICA is highly specific and sensitive,rapid and easy to perform therefore it is of epidemiologic importance in plague surveillance.
Key words:
Yersinia pestis
immunochromatogragphic assay
plague surveillance
鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌感染引起的传播快、病死率高的烈性传性染病。鼠疫的传统检测采用常规的四步法即分离培养、鼠疫噬菌体裂解试验、动物实验、血清学试验。由于目前的四步法不能满足现场监测及突发事件的需要。胶体金免疫层析技术(Immuno Chromatogphic Assay，ICA)以其快速、准确、简便的特点，在各个领域广泛应用。为了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的效果，应用胶体金免疫层析法对2006年从广西隆林县、西林县收集的鼠脏器、鼠血清、患者血清进行检测。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 鼠标本系2006年采自广西隆林县、西林县的鼠脏器、鼠血清。既往阳性患者系2005年采集的2000～2001年广西隆林县及西林县的鼠疫F1抗体阳性患者。胶体金免疫层析试纸条(北京庄浩笛生物有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗原 无菌采集鼠脏器(肝脏、脾脏)置无菌试管，加3倍无菌生理盐水用无菌剪刀剪碎，3000r/min离心,10min，取脏器悬液上清200μl加样，37℃10min后观察结果。
1.2.2 胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体 无菌采血，离心取血清血，清置56℃30min灭活，取血清20μl加180μl 0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)，pH 7.4,1∶10稀释混匀后加样200μl，37℃10min后观察结果。
1.2.3 结果判断 以观察窗出现2条沉淀带，既C线(质控带)和T线(反应带)显色判为阳性；以观察窗出现1条沉淀带，只有C线(质控带)显色判为阴性；以观察窗不出现沉淀带或仅有T线(反应带)显色判为无效结果。
2 结果
2.1 标本分布 收集标本481份，其中鼠肝脏占24．9%(120/481) 、鼠脾脏占20.6%(99／481) 、鼠血清占48．9%(235/481) 、患者血清占5.6%(27/481) 。
2.2 鼠疫F1抗体胶体金法检测 鼠血清235份，经胶体金法检测鼠疫菌F1抗体均为阴性；患者27份血清中灭活组有2份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体阳性，阳性率为7.41%，而经升汞处理的升汞组27份病人血清则均为阴性。
表 1
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表 1 胶体金法检测鼠疫菌F1抗体结果
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2.3 鼠疫F1抗原胶体金法检测 120份鼠肝脏F1抗原均为阴性，99份F1抗原均为阴性。
2.4 升汞与灭活对胶体金检测影响 对标本灭活对照组进行56℃30min灭活后检测，升汞组加1%升汞盐水5μl作用1min后进行检测。结果升汞组27份患者血清胶体金法检测鼠疫F1抗体全为阴性，而灭活组有2份F1抗体为阳性，其阳性率为7.41%(2/27) 。表明升汞盐水可抑制鼠疫菌F1抗体的检出。
3 小结 本方法检测来源于鼠疫宿主动物(鼠类)及人群的血清。戴瑞英[1]认为胶体金法具有较好的特异性，且不与鼠疫菌以外的其它菌发生交叉反应；朱虹[2]报道应用军科院五所研制的鼠疫胶体金法快速诊断盒检测300份不同动物的鼠疫阳性血清全部为阳性，而100份鼠疫阴性血清为阴性，与鼠疫间接血凝法比较其符合率达100%，并且与假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌等血清不发生交叉反应，显示出较好的特异性和敏感性。
本法所研制的胶体金试纸条具有操作简便、通用性强等特点。胶体金技术以其快速、准确、简便、特异性强等特点而具有广泛的应用推广价值。
参考文献
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戴瑞霞, 李敏, 刘兰, 等.
胶体金免疫层析法诊断鼠疫的特异性试验[J]. 中国人兽共患病杂志, 2006, 22(2) : 142–143.
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| [2] |
朱虹, 张春华, 檀华, 等.
鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制[J]. 中国地方病防治杂志, 2005, 20(4) : 206–207.
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2008, Vol. 24
