单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM,简称单增李斯特菌)是一种重要人畜共患病致病菌^[1]。为了解浙江省各类食品中单增李斯特菌的污染情况、分布特点、血清型及耐药性，预防和控制食源性疾病，本文对2006年生禽肉、散装熟肉制品、水产品、生食蔬菜等1 651份样品中分离的单增李斯特菌进行血清型、耐药性监测分析。现报道如下。

1 材料与方法 1.1 材料

单增李斯特菌CMCC54002，CMCC54006、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)(中国生物制品检定所)。大肠埃希菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923(中国微生物菌种保藏中心)。M-H培养基(美国OXOID公司)；单增李斯特菌分型血清(日本デンカ生研株式会社)。

1.2 分离菌株样品来源

分离菌株的样品分别采自浙江省杭州、温州、舟山、绍兴、衢州、丽水、宁波、嘉兴、台州和东阳等10个市县的大型超市、农贸市场。包括生肉类、散装熟肉制品、生奶、水产品、生食蔬菜等各类食品1651份样品，其中肉类包括鸡、鸭、猪、牛、羊等5种禽肉。从上述样品中共分离单增李斯特菌86株。

1.3 抗生素

根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)标准、单增李斯特菌感染临床治疗常用抗生素，选择胺苄青霉素(AMP,10 g/片)，丁胺卡那霉素(AMI 30 g/片)，庆大霉素(GEN 10 g/片)，头孢噻肟钠(CTX,30 g/片)，环丙沙星(CIP,5 g/片)，氯洁霉素(CDA,2 g/片)，头孢西丁(FOX,30 g/片)，头孢噻吩(CEP,30 g/片)，利福平(RIF,5 g/片)，亚胺培能(IPM,10 g/片)，呋喃妥因(NIT,300 g/片)，甲氧苄胺嘧啶(TMP,5 g/片)，四环素(TCY,30 g/片)等共13种抗生素药敏纸片(美国OXOID公司)。

1.4 药敏试验方法

药敏试验采用世界卫生组织(WHO)推荐的(K-B)纸片扩散法测定。用接种环挑取经纯化、传代的单增李斯特菌接种于3～5 ml(M-H)肉汤中，35℃培养24 h，用生理盐水校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准，用无菌棉拭醮取已准备好的菌液，均匀涂步接种于M-H琼脂平板表面，置室温干燥3～5 min后用纸片分配器将含药纸片贴于含菌琼脂平板表面。平板经室温放置15 min再倒放于35℃培养箱中培养48 h后，测量抑菌环直径并记录结果。每次实验均用大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923作质控，判定按美国NCCLS操作标准(2003版)。

1.5 血清凝集试验方法

参照单增李斯特菌诊断血清使用说明书，O抗原采用玻片凝集法，H抗原采用试管凝集法。

2 结果 2.1 食品中单增李斯特菌耐药性监测结果(表 1，2)

由表 1可见，86株单增李斯特菌对氨苄青霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素、头孢噻肟钠、环丙沙星、头孢噻吩、利福平、亚胺培能、甲氧苄氨嘧啶、四环素耐药性>5％，其中对氨苄青霉素、庆大霉素和甲氧苄氨嘧啶全部敏感。对呋喃妥因的耐药性占5.81％；对头孢西丁和氯洁霉素的耐药性分别为37.34％和55.26％。

由表 2可见，近3年单增李斯特菌对庆大霉素、环丙沙星、头孢噻吩、利福平、甲氧苄氨嘧啶的耐药性都>5％，基本没有变化，其中对甲氧苄氨嘧啶均为100％敏感。对丁胺卡那霉素和四环素的耐药性2006年与2005年比较有所降低。对氨苄青霉素、头孢噻肟钠、呋喃妥因的耐药性2006年与前2年比较有较大的降低。对氯洁霉素和头孢西丁的耐药性虽稍有变化，但近3年的结果显示，单增李斯特菌对这2种抗生素的耐药率最高。

2.2 单增李斯特菌血清分型结果

对分离的86株单增李斯特菌进行血清学分型。结果显示，分属6个血清型，其中48株为1/2b(55.81％)，23株为1/2a(26.74％)，12株为1/2c(13.95％)，3c，4a，4b血清型各为1株(1.63％)。近3年的血清型基本相同，以1/2b，1/2a和1/2c为主，其他血清型略有差别。

3 讨论

监测结果表明，我省相关食品中李斯特菌的分布较为广泛，在肉类及肉制品、禽类、水产品和水果沙拉等食品中有检出，其中冻肉类食品的阳性检出率最高。近年来，由于抗生素的滥用，各类食源性病原菌的耐药菌株日益增多，导致多种抗菌药物治疗效果不显著，给临床用药带来困难。本次监测结果表明，食品中分离的单增李斯特菌对多数抗生素耐药性不高，对氨苄青霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素等10种抗生素的耐药性>5％，尤其是对甲氧苄氨嘧啶完全敏感。与其他省份单增李斯特菌耐药性监测结果基本一致^[2]。本次我省食品中单增李斯特菌主要为1/2b(55.81％)，23株为1/2a(26.74％)，12株为1/2c(13.95％)，这几种血清型均有较强致病性，能引起严重的李斯特食源性疾病，危害身体健康。因此，应加强相关食品中单增李斯特菌的监测力度，重点防治由上述几种血清型菌株引起的食物中毒。