人体从内到体表的各个系统、器官均存在各种对人体有益的微生物, 胎儿在母体子宫内基本上是无菌环境中生长, 出生后各种有益微生物才逐步定植在新生儿的各个部位, 有益菌的最初建群、演替直至最终达到生态平衡, 其过程十分复杂。了解维持呼吸系统生态平衡的必备条件, 预防人类因微生物平衡失调引起的咽炎、鼻炎、气管炎、支气管炎甚至龋齿、口腔黏膜病、牙周病等感染性疾病的发生有着积极的意义。本研究旨在了解新生儿呼吸系统正常微生物菌群建群、演替直至最终达到生态平衡的过程, 为呼吸系统疾病的预防和治疗提供指导。

1 对象与方法 1.1 对象

2004年10月~2006月10月, 选择在内蒙古医学院附属医院产科足月生产、无任何家族遗传病及感染性疾病、发育正常的健康新生儿, 共37人, 其中正常顺产组24人, 剖宫产组13人。

1.2 方法

(1) 采样:①阴道拭子; 用无菌采样拭子 (浙江拱东医用塑料厂, 浙食药监械准字2005第2410058号) 在产妇临产后按常规消毒外阴, 窥阴器暴露后穹隆蘸取分泌物并立即放入1 ml脑心浸液中送检。②新生儿咽拭子:用上述标准无菌采样拭子擦拭婴儿咽后壁, 避免触及唇、舌、牙龈等处。取后立即放入1 ml脑心浸液中送检。除出生时采集1份咽部标本外, 对纳入研究的37名新生儿每隔1 d采集1次咽部标本, 为期1周, 并在出生第28 d采集1次月龄标本。采样前30 min不进食, 于晨起婴儿洗澡时采样。(2) 培养:将上述样本原液3μl接种到哥伦比亚羊血琼脂、哥伦比亚巧克力琼脂和斯氏琼脂上, 用接种环铺满90 mm平皿, 分别放在有氧、CO₂及厌氧环境下, 35 ℃培养18~72 h, 每18 h记录1次, 厌氧菌培养采用产气袋法, 72 h后观察记录。

1.3 鉴定

(1) 形态学鉴定:取出培养基观察各培养基上菌落生长情况, 将不同形态特点的单个菌落取出涂片, 革兰染色, 镜检观察菌体形态。(2) 生化鉴定:将典型菌落形态和菌体形态的单个菌落进行细菌鉴定, 采用标准化的细菌生化和免疫凝集方法, 致病菌药敏实验选择K-B纸片法。

2 结果 2.1 不同分娩方式新生儿咽部及顺产母亲阴道微生物检出率 (表 1)

从表 1可见, 出生时无菌状态下剖宫产娩出的新生儿口咽部100 %无任何微生物生长, 而顺产组新生儿有33 %检出微生物。表明母亲阴道对新生儿出生时咽部微生物的存在起决定性作用, 最初出现在咽腔的微生物如粪链球菌、表皮葡萄球菌、粪球菌、大肠埃希菌均为母体阴道的正常菌群, 而母亲阴道的微生物对无菌状态下剖宫产娩出的新生儿口咽部却无任何影响。但是这种顺产娩出时带给新生儿的细菌毕竟不是人类咽腔应该有的微生物, 终究要被咽部正常菌所替代

2.2 新生儿咽部微生物动态变化情况 (表 2)

新生儿咽部微生物检出随着时间的推移最终均被链球菌属和奈瑟菌所替代, 从出生次日起缓症链球菌检出率就从0~45.95 %, 涎链球菌为43.24 %, 口腔链球菌为27.27 %; 而粪链球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌检出率则从24.3 %, 27.27 %, 21.6 %迅速下降到10.8 %, 8.1 %。出生第4 d, 从母亲产道带来的大肠埃希菌等就完全被口腔内链球菌等替代; 周龄儿的缓症链球菌检出率达到67.57 %, 而涎链球菌亦为64186 %, 口腔链球菌则为59.45 %; 说明链球菌己完全代替母亲产道带来的大肠埃希菌等细菌占据主导地位, 同时奈瑟菌检出率也达到27.27 %, 其他菌如表皮葡萄球菌、白色念珠菌、韦荣菌也少量检出。表皮葡萄球菌从出生时的21.6 %降致次日的8.1 %, 第4d全部消失, 到28 d时又恢复到8.1 %。

3 讨论

无菌的胎儿在出生过程中接触到母亲产道的正常菌群, 并且发生第1次呼吸, 其呼吸道就可以种植母亲阴道的正常菌。本研究中, 顺产新生儿有33 %所检出的微生物如粪链球菌、表皮葡萄球菌、粪球菌、大肠埃希菌均为母体阴道的正常菌群, 无菌状态下剖产娩出的新生儿口咽部则无任何微生物生长, 说明刚出生的新生儿口咽部微生物来源于母亲阴道^[1]。在出生24 h内就有缓症链球菌、涎链球菌、口腔链球菌在咽部检出, 到出生第4 d, 这3种球菌从咽部检出率增高, 进一步巩固和确立了其优势种地位, 而厌氧菌如韦荣菌则消失; 至出生第6 d这3种球菌检出率接近正常成人咽部链球菌比率^{[2, 3]}。因此, 可以确定健康新生儿呼吸道微生物菌群的组成是以链球菌属为主的优势菌群, 而在这个菌群中, 缓症链球菌、涎链球菌、口腔链球菌为优势菌种, 奈瑟菌则为亚优势菌群。其他少量的表皮葡萄球菌、白色念珠菌、韦荣菌则为伴生菌, 表明最初母亲产道带给新生儿口咽部的微生物只是过路菌, 而非常驻菌, 与文献报道基本相同^{[1, 4]}。

在整个新生儿咽部微生物群、演替^[5]直至生态平衡的过程, 有益微生物菌种的密度和梯度变化较大, 群落演替过程复杂, 大致是从刚出生以其他菌为主覆盖形式演替成以链球菌属、奈瑟菌为主的覆盖形式, 也说明以链球菌属、奈瑟菌为主的咽部正常微生物菌群可以起到防止致病微生物建群及防止己经存在的机会菌过度生长的作用^[6]。有资料表明, 新生儿上呼吸道感染率为45 %^[7], 而且感染途径多种, 可以通过母婴垂直传播、胎膜早破吸入感染的羊水、通过产道时发生吸入性肺炎、胎儿宫内窘迫、新生儿窒息等^[8]。当涎链球菌、口腔链球菌等呼吸道起始端应有的链球菌从零到有、从亚顶级演替成优势顶级时就占据主宰地位时, 新生儿呼吸道微生态平衡初步建立, 完成了新生儿咽部微生物建群、演替直至生态平衡的过程。而在这一部位生存的正常菌群中占主导地位的链球菌的种群, 比其他菌种有更强的抵抗力^[9]。