在研究肿瘤细胞凋亡的作用中，可采用不同的检测方法。我们根据抗原与抗体特异性结合的原理，以热休克蛋白70(HSP70) 单抗处理癌细胞，通过透射电镜观察方法进行检测，探讨HSP70单抗诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

材料与方法

(1) 材料:胃腺癌MGC-803细胞株(本实验室保存)。(2) 试剂:RPMI-1640培养基(华美生物公司)；小鼠抗人HSP70单克隆抗体(美国Sigma公司)。（3）细胞的培养:含10％小牛血清的RPMI-1640培养液于37℃、5％CO₂培养箱培养。待细胞进入指数牛长期后再讲行处理。（4）处理细胞:将进入指数生长期的细胞分别接种于数个培养瓶中，细胞密度为(0.5～1) 10⁶个/ml，培养体积为5 ml。在每一培养物中加入效价为1:100的小鼠抗人HSP70单抗，终浓度为20，40 l/ml，磷酸盐缓冲液(PBS)(40 l)作空白对照。处理时间分别为24，48 h。（5）透射电镜标本制备:培养于培养瓶中的细胞，分别进行胰蛋白酶消化、离心收集细胞，用PBS洗涤后，用2.5％戊二醛4℃固定，2％锇酸后固定，梯度乙醇脱水、聚对苯二甲酸二烯丙酯［Poly(diallyl phthalate)，PDAP］浸透、包埋、聚合、超薄切片、染色后置透射电镜下观察细胞超微结构^[1]。

结果

透射电镜观察发现，对照组未发生凋亡的胃癌细胞有绒毛，细胞核、线粒体等细胞器正常(图 1)；而在小鼠抗人HSP70单抗处理后的胃癌细胞呈凋亡的形态改变，绒毛消失，胞质浓缩，细胞核深染，染色质浓缩成块并边聚，但细胞器仍保留(图 2)；核塌陷并断裂(图 3)； 出现核残体(图 4)。

讨论

用透射电镜观察HSP70单克隆抗体处理后的人胃腺癌MGC-803细胞样本，可见，凋亡细胞的形态发生改变，绒毛消失，内质网扩张，胞质浓缩，细胞核深染，呈核固缩，染色质凝集、边聚、核碎裂，并形成凋亡小体。图 2 胃腺癌MGC-803细胞(20 l/ml，HSP70处理24 h)(300)

本研究结果也表明，胃癌细胞在体外培养状态下，经不同浓度HSP70单抗处理后，HSP70表达被阻断，胃癌细胞的生长受到抑制并且发生凋亡。本研究通过HSP70MAb结合细胞内已存在的HSP70^[2]，使其不能发挥抗凋亡的作用；封闭细胞内合成HSP70，使其阻抑了癌细胞HSP70的作用，可能通过上述途径激活凋亡信号传导通路^{[3, 4]}而表现诱导胃腺癌MGC-803细胞凋亡的作用。