中国公共卫生  2007, Vol. 23 Issue (9): 1102-1103   PDF    
引用本文
廖泽云, 李玉山, 刘红, 姜锦林. 生脉散对小鼠免疫和造血功能影响[J]. 中国公共卫生, 2007, 23(9): 1102-1103.
LIAO Ze-yun, LI Yu-shan, LIU Hong, et al. Effects of traditional Shengmaisan on immune and hematopoietic function of mice[J]. Chinese Journal of Public Health, 2007, 23(9): 1102-1103.
生脉散对小鼠免疫和造血功能影响
廖泽云1, 李玉山1, 刘红1, 姜锦林2     
1. 湖北民族学院医学院 恩施445000;
2. 湖北民族学院医学院附属医院
收稿日期: 2006-12-18
基金项目: 湖北省卫生厅重点资助项目(JXIB120)
作者简介: 廖泽云(1965-),男,湖北恩施人,硕士在读,主要从事中药药理基础研究。
摘要： 目的 观察古方生脉散口服液对小鼠免疫和造血功能的影响。 方法 用注射给予环磷酰胺的方法形成小鼠白细胞减少症模型,生脉散灌胃给药,以外周血白细胞、骨髓有核细胞数、淋转指数、网织红细胞以及细胞肿瘤因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)为观察指标。 结果 病理模型小鼠外周血白细胞、网只红细胞、骨髓有核细胞数明显减少,淋转指数下降,TNF、IL-6活性降低,生脉散可促进上述各指标的恢复及升高(P<0.05,P<0.01)。 结论 生脉散口服液有显著改善机体免疫功能和刺激骨髓造血功能的作用。
关键词： 生脉散     白细胞减少症     免疫功能     造血功能    
Effects of traditional Shengmaisan on immune and hematopoietic function of mice
LIAO Ze-yun, LI Yu-shan, LIU Hong, et al     
1. 湖北民族学院医学院附属医院;
2. Medical School of Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000, China
Abstract: Objective To study the effects of Shengmaisan on functions of immune system and bone marrow in mice. Methods Leukopenia animal model was made by cyclophosphamide injection.The Shengmaisan was administrated orally.The white blood cell(WBC)counts,reticulocyte count,the number of nucleated bone marrow cells(NNBMC),T cell transformation indices(TCTI),activity of tunmor necrosis factor(TNF)and interleukin-6(IL-6)in blood of leukopenia mice on the 5th,10th,15th day after chemisty therapeutics. Results WBC,reticulocyte count,NNBMC,TCTI reduced remarkablely,activity of TNF,IL-6 in blood were decreased obiously.These hematopoiesis indexes and the activity of TNF,IL-6 increased after oral administration of Shengmaisan 30,50,70 g/(kg·bw). Conclusion Shengmaisan can significantly ameliorate immunological function and stimulate hematopoietic function in mice.
Key words: traditional Shengmaisan     leukopenia     immune     hematopoietic function    

古方生脉散乃中医名方，功能主治:益气生津、养心补肺，临床上常用于治疗气阴两虚患者，有大补元气、固脱复脉的功效。主要由人参、麦冬、五味子组成，其有效成分为人参皂甙、麦冬皂甙、麦冬黄酮、五味子素等，有多种药理作用。有研究表明，生脉散可用于治疗放化疗引起的白细胞减少症、可以加强造血功能和提高免疫功能等[1-3]。为探讨该制剂对动物白细胞减少症和骨髓造血及损伤修复作用的影响，我们观察了生脉散口服液对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的影响，现报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 药品

生脉散由党参、麦冬、五味子组成，所有药物均购自湖北民族学院附属医院中药房，并由医学中药制剂室按传统方法煎制成含生药2 g/ml的水煎液备用。环磷酰胺(上海华联制药有限公司)，国药准字H31021703，产品批号030910；鲨肝醇(Batilol Tablets)(中外合资江苏鹏鹞药业有限公司)，国药准字H20023248，产品批号0310201。

1.1.2 试剂与仪器

RPMI1640培养液(美国Sigam公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT，美国Sigam公司)；磷酸盐缓冲液(PBS，武汉亚法生物技术有限公司)；淋巴细胞分离液［比重(1.0770.001) ，上海试剂三厂］；植物血凝素(PHA 950117，广州医药工业研究所)；细胞肿瘤因子(TNF)、IL-6试剂盒(解放军总医院科技开发中心放免所)；Elx800型酶标仪(美国Sigam公司)；GC-1200 r放射免疫计数器(中国安徽科大创新股份有限公司)。

1.1.3 动物

昆明小鼠，体重(222) g，雌雄兼用(湖北省实验动物中心提供)。

1.2 方法 1.2.1 实验方法

将108只小鼠随机分成6组，每组18只，即正常组、病理模型组、生脉散口服液低、中、高剂量组［给药剂量按临床成人每日量的3～7倍折算每日约为30.00，50.00，70.00 g/(kgbw)］、阳性对照药鲨肝醇组每日0.14 g/(kgbw)。将各组动物(除正常对照组外)进行腹腔注射环磷酰胺50 g/kg，1次/d，共7 d，制成化疗白细胞减少症模型［白细胞下降至(2.00～3.00) 109/L］，次日起持续灌胃给药，每日1次，共15 d。正常组、病理模型组灌胃等容量体积生理盐水。

1.2.2 指标检测及方法

造血功能指标测定:白细胞计数、网织红细胞计数、骨髓有核细胞数，按常规测定计数；血淋巴细胞转化实验:心室取血抗凝用RPMI1640对倍稀释，加等量淋巴细胞分离液，经2 000 r/min离心20 min，分离淋巴细胞并洗涤3次，加入适量RPMI1640培养液进行细胞计数，稀释细胞至8106个/L。取细胞悬液加入经灭菌处理的96孔微量细胞培养板内，每个样本6孔，每孔180 l，其中3孔加20 l植物血凝素，另3孔加20 l培养液作对照组，每孔总量为200 l；另设3孔作空白对照组。将培养板置37℃体积分数5%的CO2培养箱里培养72 h。采用MTT比色法测定小鼠淋转指数[4]，细胞因子检测:TNF、IL-6分别于造模后5，10，15 d取外周血按试剂盒操作说明作放免学检查。

1.3 统计分析

采用SPSS 10.0软件进行t检验。

2 结果 2.1 生脉散对病理小鼠外周血网织红细胞计数的影响

与正常组比较，小鼠造模后5 d，网织红细胞数下降明显，由正常(10.71.09) 109/L下降到(4.451.12) 109/L，(P＜0.01) , 后逐渐回升，于15 d基本恢复，回升到(8.361.07) 109/L。生脉散3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较，网织红细胞数于5，10 d均升高，分别约为(5.650.98) 109/L和(7.430.86) 109/L，(P＜0.015或P＜0.01) ，造模后15 d回升到(9.011.130) 109/L，且呈现出剂量依赖关系。结果提示，生脉散对病理小鼠网织红细胞有恢复作用。

2.2 生脉散对病理小鼠外周血白细胞计数的影响

与正常组比较，小鼠造模后5 d白细胞数仍然下降明显，由正常(7.871.56) 109/L下降到(2.630.92) 109/L，(P＜0.01) , 随后逐渐回升，生脉散3个剂量组及鲨肝醇治疗组白细胞数于造模后5，10 d均高于病理模型组，分别均为(3.571.10) 109/L和(7.040.91) 109/L，(P＜0.05或P＜0.01) ，结果表明，生脉散能促进病理小鼠白细胞的恢复。

2.3 生脉散对病理小鼠骨髓有核细胞数的影响(表 1)
表 1 生脉散对病理小鼠外周淋巴细胞转化的影响(x ±s , n = 18)

与正常组比较，小鼠造模后5 d骨髓有核细胞数降低明显，由正常(10.611.14) 106/L下降到(3.891.18) 106/L，(P＜0.01) ，随后逐渐升高，生脉散3个剂量组及鲨肝醇治疗组小鼠骨髓有核细胞数于5，10 d均高于病理模型组分别约为(5.571.10) 106/L和(7.460.81) 106/L，(P＜0.05或P＜0.01) ，结果显示，生脉散能促进病理小鼠骨髓造血机能的恢复。

2.4 生脉散对病理小鼠外周血淋巴细胞转化的影响

与正常组比较，小鼠造模后淋巴细胞转化指数明显下降(P＜0.01) ，生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较，于5，10 d淋巴细胞转化指数均升高(P＜0.05或P＜0.01) ，且呈现出剂量依赖关系。结果提示，生脉散具有刺激淋巴细胞转化、增强免疫力的作用。

2.5 生脉散对病理小鼠IL-6的影响(表 2)
表 2 生脉散对病理小鼠IL-6的影响( pg/ ml ,…x ±s , n = 18)

与正常组比较，小鼠造模后血中IL-6活性降低(P＜0.01) ，生脉散3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较，于5，10 d IL-6活性明显增高(P＜0.05或P＜0.01) 。结果提示，生脉散具有激活细胞因子和调节免疫功能的作用。

2.6 生脉散对病理小鼠TNF的影响(表 3)

与正常组比较，小鼠造模后TNF活性降低(P＜0.01) ，后逐渐回升，于15 d基本恢复。生脉散3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较，于5，10 d TNF 活性增高(P＜0.05或P＜0.01) ，且呈现出剂量依赖关系。

表 3 生脉散对病理小鼠TNF的影响( ng/ ml ,…x ±s , n = 18)

3 讨论

本实验采用环磷酰胺致小鼠白细胞减少症，造模后小鼠造血系统受到抑制，外周血白细胞、网织红细胞、骨髓有核细胞数以及淋巴细胞转化指数的变化，说明实验造模成功。实验结果显示，生脉散能促进病理小鼠外周血白细胞、网络红细胞、骨髓有核细胞数的恢复，特别是在造模后第5，10 d效果更为显著，明显表现出其调节造血系统、升高白细胞、刺激机体的造血能力，其作用和鲨肝醇相当。同时，实验表明生脉散不仅能单独刺激小鼠淋巴细胞的转化，而且还诱导小鼠细胞因子的释放，实验中病理小鼠血液中IL-6、TNF活性表现出明显降低，在运用生脉散治疗后第5，10 d具有显著升高IL-6、TNF水平。白细胞介素-6是一种主要由免疫活性细胞分泌的多功能因子，不仅具有免疫调节及抗肿瘤作用[5, 6]，且能促进细胞的增殖分化、加速血小板的再生，具有显著的造血调控作用[7]；有研究报道TNF对白细胞计数和血小板计数的减少有促进恢复的作用[8]，这提示生脉散具有调节机体的免疫作用。综上所述，生脉散对化疗所致动物白细胞减少症的免疫力低下及造血系统损伤有较好的治疗效果，其机制可能与提高免疫力有关。

参考文献
[1] 缪培融. 生脉散加味治疗白细胞减少39 例临床观察[J]. 天津中医, 1996, 13(04) : 20–23.
[2] 李敏, 赵法及, 郭俊生, 等. 生脉散对热损伤大鼠免疫功能的保护作用[J]. 中国公共卫生, 1999, 15(10) : 874–875.
[3] 汪红义, 余伯阳, 刘峻, 等. 生脉散及组成药物总皂苷对不同刺激剂诱导的大鼠多形核白细胞呼吸爆发的影响[J]. 中国药科大学学报, 2001, 32(5) : 384–387.
[4] 黄志坚, 黄依明, 邱承亮, 等. MTT 比色法检测孕牛淋巴细胞转化的效果[J]. 福建农业大学学报, 1996, 25(4) : 475–477.
[5] Sin K Q, Hamajima K, Sasaki S, et al. IL215 expression plasmid en2 hances cell-mediated immunity induced by an HIV1 DNA vaccine[J]. Vaccine, 1999, 17(1999) : 858–866.
[6] Dowlati A, Levitan N, Remick SC. Evaluation of interleukin26 in bronchoalveolar lavage fluid and serum of patients with lung cancer[J]. J Lab Clin Med, 1999, 134(4) : 405–409. DOI:10.1016/S0022-2143(99)90156-7
[7] Hao SG, Yang JC, Zou ZH, et al. Regulative effects of rh IL23 and rh IL26 on proliferation of stromal cells from marrow[J]. Acta Uni2 versitatis Medicinalis Anhui, 1998, 33(6) : 425.
[8] 周华云, 周剑影, 王国权, 等. 白细胞介素26 及肿瘤坏死因子对受照小鼠造血恢复的影响[J]. 辐射防护, 2001, 21(4) : 232–237.