中国公共卫生  2007, Vol. 23 Issue (9): 1092-1094   PDF    
引用本文
卞翠荣, 李德仁, 周晓红, 路方红. 牙周炎与白细胞介素Ⅰ相关基因及吸烟关系[J]. 中国公共卫生, 2007, 23(9): 1092-1094.
BIAN Cui-rong, LI De-ren, ZHOU Xiao-hong, et al. Interleukin-1 associated gene and smoking with susceptibility to periodontitis[J]. Chinese Journal of Public Health, 2007, 23(9): 1092-1094.
牙周炎与白细胞介素Ⅰ相关基因及吸烟关系
卞翠荣1, 李德仁2, 周晓红3, 路方红3     
1. 山东大学齐鲁医院口腔科 济南250012;
2. 山东省安丘市人民医院口腔科;
3. 山东省医学科学院基础医学研究所
收稿日期: 2007-03-14
基金项目: 世界卫生组织与加拿大国际合作资助项目
作者简介: 卞翠荣(1963-),女,山东人,副教授,硕士,主要从事口腔医学的临床与基础研究。
摘要： 目的 探讨白细胞介素1相关基因(IL-1A)-889/NcoⅠ基因多态性和吸烟因素与汉族人慢性牙周炎(CP)易感性的关系。 方法 收集口腔科门诊山东籍汉族慢性牙周炎患者142例和95名对照者,通过问卷调查获得吸烟的资料。采集颊粘膜拭子提取DNA,采用序列特异引物聚合酶链反应和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,进行IL-1A-889/NcoⅠ位点基因型测定,分析各基因型分布;将基因型与吸烟因素进行交互作用分析。 结果 142例患者中重度慢性牙周炎46例,中度45例,轻度51例。IL-1A-889/NcoⅠ的等位基因2在重度慢性牙周炎中的检出率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。而中度慢性牙周炎、轻度慢性牙周炎与对照组之间的分布差异无统计学意义。吸烟能明显提高牙周病的发生,含有等位基因2的基因型与吸烟有交互作用(OR=10.413,P=0.000;OR=5.315,P=0.004)。 结论 IL-1A-889/NcoⅠ等位基因2可能与汉族重度慢性牙周炎遗传易感性相关,吸烟因素与牙周病发生有关,含有等位基因2的吸烟个体更易患牙周炎。
关键词： 慢性牙周炎     汉族     白细胞介素1     基因多态性     吸烟    
Interleukin-1 associated gene and smoking with susceptibility to periodontitis
BIAN Cui-rong, LI De-ren, ZHOU Xiao-hong, et al     
Department of Stomatology, Qilu Hospital of Shandong University, Ji’nan 250012, China
Abstract: Objective To investigate the association of interleukin-1A-889 gene polymorphisms and smoking with the susceptibility to chronic periodontitis in Han nationality. Methods 142 chronic periodontitis(CP)patients and 95 healthy controls were selected and the information of whether or not smoking was obtained through questionnaire survey;DNA was extracted from these buccal swabs and genotypes of the IL-1A-889/NcoⅠwere determined by sequence specific primers polymerase chain reaction(SSP-PCR)and PCR restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP).Then the interaction between the genotypes of L-1A-889/NcoⅠand smoking was analysed. Results There were 46 severe chronic periodontitis(CP)patients,45 moderate CP patients and 51 mild CP patients in 142 chronic periodontitis(CP)patients.Frequencies of allele 2 for IL-1A-889/NcoⅠwere higher in severe CP patients than in healthy controls,and the difference was statistically significant(P<0.01).But there were no such significant differences either between moderate CP patients and healthy controls or between mild CP patients and healthy controls.Smoking can significantly increase the incidence of periodontal disease,and there were interaction between the genotypes containing allele 2 and smoking(OR=10.413,P=0.000;OR=5.315,P=0.004). Conclusion IL-1A-889 may be a risk indicator for the susceptibility to severe chronic periodontitis in Han nationality,and smoking was associated with CP and may represent a risk factor for this disease.Individuals carrying the positive genotype have significant risk for CP.
Key words: chronic periodontitis     Han nationality     interleukin-1     genetic polymorphism     smoking    

研究表明，白细胞介素1(IL-1A)作为调节炎症反应的关键因子，在介导牙槽骨吸收和胶原降解方面有重要作用[1]，因此，是牙周病潜在的病原因子[2]，其相关基因IL-1A-889和慢性牙周炎易感性的研究很多[3-7], 但由于种族不同等因素，结果存在差异，并且基因与环境因素的交互作用研究较少。本研究以汉族人为研究对象，观察IL-1A-889基因多态性和吸烟因素与汉族人慢性牙周炎(chronic periodontitis, CP)的关系。

1 对象与方法 1.1 对象

(1) 病例组:从山东大学齐鲁医院口腔科门诊患者中选择慢性牙周炎患者142例。纳入标准:山东籍，3代均为汉族, 且3代内未与其他民族通婚;无明显的牙列畸形以及局部刺激因素;无糖尿病、心血管疾病等系统性疾病，慢性牙周炎符合本文引用的诊断标准。(2) 对照组:从同一门诊中选取山东籍，3代均为汉族, 且3代内未与其他民族通婚、牙周健康或仅有轻度牙龈炎的就诊者95人，平均CAL0.5mm、无邻面部位CAL3mm、缺失牙不超过2颗、无系统性疾病者作为对照。

1.2 方法 1.2.1 慢性牙周炎诊断标准

参照Armitage等[8]推荐的标准, 测量每个患者全口牙周探诊深度(pocket depth, PD)和临床附着丧失量(clinical attachment loss, CAL)。(1) 重度牙周炎:平均CAL2.5mm, 口内3个区有一个或多个部位邻面CAL5mm, 缺失牙不超过14颗, 拔除第3磨牙、正畸拔牙、外伤导致牙脱落以及先天缺牙除外;(2) 中度牙周炎:平均CAL 1.6～2.4mm, 口内至少3个区或至少6颗牙齿但不超过8个部位邻面CAL3mm, 缺失牙不超过5颗;(3) 轻度牙周炎:平均CAL 0.6～1.5mm, 无邻面部位CAL3mm, 缺失牙不超过3颗。

1.2.2 问卷调查

采用自制调查表进行流行病学问卷调查，主要了解吸烟情况。吸烟标准:按照WHO(1984) 关于吸烟调查方法标准建议，每天吸烟1支以上, 吸烟年限长于1年者为吸烟。

1.2.3 样本采集和DNA提取

用无菌棉签采取双侧颊粘膜拭子, 室温下自然干燥过夜, 在无菌容器中保存。然后取颊粘膜拭子, 剥取拭子表层, 加入5%分子生物纯树脂（Chelex-100）150l, 使其浸没标本, 再加入蛋白酶K(20mg/ml)4l, 漩涡混匀, 55℃水溶3h, 煮沸10min, 冰浴3min, 14000r/min离心2min, 取上清液, -20℃保存。

1.2.4 IL-1A-889/NcoI基因型测定

（1）引物:采用PCR扩增IL-1A-889, 然后用NcoI限制性内切酶酶切法鉴定其基因型。引物A:5-AAGCTTGTTCTACCACCTGAACTAGGC-3, B:5-TTACATATGAGCCTTCCATG-3。（2）PCR反应体系:20l, 包括引物A、B各0.2l(50mol/L), dNTP 3 l(1 mmol/L), 10PCR缓冲液2l, MgCI2溶液1.3l(25mmol/L), TaqDNA聚合酶1.2U(华美公司), 模板DNA 3l；用无菌去离子水补足总体积至20l。（3）循环参数:预变性反应94℃ 5min, 94℃ 35s, 56℃ 30s, 72℃ 50s, 共35个循环, 72℃ 5min, 4℃保存。扩增产物为99bpNcoI限制性内切酶酶切:取PCR扩增产物5l, NcoI内切酶2U, 10酶切缓冲液1l, 无菌去离子水补足总体积至10l, 37℃水浴过夜, 酶切产物经7%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测, 银染后读取结果。其中等位基因1由于存在NcoI位点而出现83和16bp 2个片段, 等位基因2由于酶切位点消失而不能被切开, 仍为99bp片段。

1.3 统计分析

采用SPSS 10.0软件处理数据，计数资料采用2检验，用Mantel-Haenszel法计算OR及95%CI，判断基因-环境之间的交互作用是否存在。归因危险度百分比(AR%)=［（OR-1）/OR］100%。

2 结果 2.1 基本情况

病例组142例中，重度慢性牙周炎46例, 男性32例, 女性14例, 年龄25～60岁, 平均45岁;中度慢性牙周炎45例, 男性27例，女性18例, 年龄27～61岁, 平均40岁;轻度慢性牙周炎51例, 男性32例，女性19例, 年龄26～63岁, 平均37岁。对照组95人中，男性53人，女性42人, 年龄29～65岁, 平均45岁。

2.2 IL-1A-889/NcoI基因型分布(表 1)

IL-1A-889/NcoI基因型在重度、中度、轻度慢性牙周炎和对照组之间的分布差异有统计学意义(2=13.423，P=0.037) 。IL-1A-889/NcoI等位基因2重度慢性牙周炎中的检出率明显高于对照组, 差异有统计学意义(2=8.494, P=0.004) , 中度慢性牙周炎与对照组、轻度慢性牙周炎与对照组之间IL-1A-889基因型的分布差异无统计学意义。

表 1 各组IL-1A-889/NcoI基因型分布与等位基因频率

2.3 吸烟与慢性牙周炎的关系

经比较发现, 以对照组吸烟危险度（OR）为1.000，轻度、中度和重度慢性牙周炎的OR分别为2.341，3.278和4.160，95%CI分别为1.169～4.690, 1.555～6.909, 1.938～8.932, 差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.001），表明吸烟是导致慢性牙周炎的一个危险因素；对照组吸烟率38%，轻度、中度和重度慢性牙周炎的吸烟率分别是59%，67%和72%，差异均具有统计学意义。

2.4 吸烟和IL-1A-889/NcoI基因型与慢性牙周炎的易感性(表 2)

以基因型1/1+不吸烟为参照，1/1+吸烟的OR值为1.883，AR（%）为46.89，1/2+吸烟的OR值为10.413，AR（%）为90.40，2/2+吸烟的OR值为5.315，AR（%）为81.19，表明1/2和2/2基因型与吸烟有交互作用。

表 2 IL-1A-889/NcoⅠ基因型与吸烟的交互作用

2.5 多因素条件Logistic回归分析结果(表 3)
表 3 Logistic多因素回归分析结果

以年龄、性别、吸烟和IL-1A-889/NcoⅠ的3种基因型为自变量，以慢性牙周炎为因变量，进行Logistic回归分析。结果可见，具有2/2基因型且吸烟者，OR值达到2.48，并且差异有统计学意义（P＜0.05）；具有1/2基因型且吸烟者，OR值为1.87，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

本研究结果显示, 在重度慢性牙周炎患者中，IL-1A-889/NcoⅠ等位基因2的检出率明显高于对照组，同时吸烟也是导致牙周病的危险因素之一。1/2和2/2两种基因型与吸烟具有交互作用, 含有1/2和2/2两种基因型或等位基因2的个体，患慢性牙周炎的危险性增加, 与Meisel[6]等研究结果一致。多因素Logistic回归分析结果显示, 2/2基因型加上吸烟者，患慢性牙周炎的危险性增加，其OR值达到2.48；1/2基因型加上吸烟的OR值为1.87。提示具有等位基因2的汉族人可能对吸烟更为敏感，应注意避免吸烟，以预防慢性牙周炎的发生。在确定慢性牙周炎高危人群，制定防治措施时应采取不同策略，应把基因型和环境因素的交互作用结合起来考虑。

本研究结果提示，由于慢性牙周炎受多个基因和多种环境因素的影响, 今后的研究需要扩大样本量, 并选择多个侯选基因和多种环境因素进行研究。

参考文献
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