自1996年以来，已有报道我国出现的人类免疫缺陷病毒I型(Human Immunodeficiency Virus1，HIV-1) 流行株有A、B、B、C、D、F、CRF01-AE亚型和CRF-BC重组毒株^[1-6]。陕西省在1998年开展了首次HIV-1分子流行病学调查，发现省内仅存在HIV-1 M组A和B2种基因亚型毒株，分别由邻近地区经采供血和境外性接触途径传入^[7]近年来，陕西省艾滋病的流行情况同全国一样，呈快速增长趋势，在既往有偿供血人群中发现HIV暴发感染，性接触和吸毒人群感染病例增多也是近年来的流行特点^[8]。为进一步了解陕西省不同人群HIV-1流行株基因亚型分布特征，监测HIV-1新亚型株的出现，预测今后的流行趋势，收集2002～2003年经本省确证的HIV-1感染者的血样，提取外周淋巴细胞(PBMC)中核酸DNA，采用套式PCR技术扩增HIV-1毒株env基因，对其C2～V3区进行序列测定和亚型分析。现将结果报告如下。

共收集HIV-1抗体阳性者样本34份，男性21份，女性13份。年龄最大52岁，最小18岁。其中本省居民25例，外省流动人口9例。

提取细胞基因组DNA用德国QIAGEN公司的QIAamp DNA Blood Mini Kit，套式PCR扩增HIV外膜蛋白env基因C2～V3区的片断，扩增引物及条件参见文献^{[9, 10]}

第2轮PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，与分子量标准对照判定无误后(约810) ，切下特异性扩增带，用Aiaex试剂(德国Qiqgen公司)，按说明提纯扩增的HIV-1 DNA片段。回收得到的DNA溶于20l 10mmol/L Tris-HC1缓冲液(pH8.7) ，经l％琼脂凝胶电泳与分子量标准比较，估算核酸浓度。

env区使用D3引物，测得的序列用ABI公司的SeqEdit软件进行编辑、校正。序列的排列、比较和同源性分析使用GCG软件，用Clustal程序对样品与国际标准序列进行排列和比较；用distances程序计算一组序列间的基因离散率；用growtree程序作系统树(phylogenetic tree)分析。进行系列分析所用的主要参考毒株有B亚型：97SX-BCON，B.CN.RL42ENV；C亚型：C.92BR025；B亚型：US.86.JRFL；CRF01-AE亚型：AE.TH90.CM240；CRF-BC亚型：CN97.C54A，BC.98CN009。

在全省各市或县共随机收集了40份HIV感染者样本，其中34份HIV阳性样本得到PCR扩增产物并且进行了env区C2～V3序列测定，占同期总报告人数的29.83％(34/114) 。34名感染者分布自本省的商洛、西安、宝鸡、渭南等地区。HIV感染者按感染因素统计，既往有偿供血者16例，占本研究总人数的47.06％(16/34) ；受血感染7例，占20.59％，(7/34) ；性传6例，占17.65％，其中感染者的配偶4例11.77％，(4/34) ；暗娼2例5.88％，(2/34) ；因静脉吸毒感染3例8.82％，(3/34) ；感染途径不详的2例，占5.88％，(2/34) ；其中1例曾在非洲工作2年。研究样本占同期报告的供输血途径感染者的34.85％(23/66) ；性途径感染者的24.00％(6/25) ；静脉吸毒感染者的23.08％(3/13) ；感染途径不详的20％(2/10) 。在4份配偶的样本中，其中2例为供血感染者配偶，2例为受血感染者的配偶。

经nested-PCR扩增后，获得34份可用于序列测定的HIV-1目的片段，将由envD3引物测序的结果进行编辑整理后，根据测得的C2～V3及其相邻区350～450核苷酸序列，应用pileup和pretty程序，与HIV-1 M组各个亚型国际参考株和国内代表株的基因序列进行排列和比较。34份标本的基因序列特征和系统树分析表明，有28个毒株均与B亚型国际参考株相聚在一起，有4个毒株与CRF-BC重组亚型参考株靠近，有2个毒株分别与C亚型和CRF01-AE亚型国际参考株靠近，而远离其他亚型国际参考株。4种亚型各自与相应的HIV-1 B、CRF-BC、C和CRF01-AE亚型或重组毒株的国际参考株具有相似的序列特征。

分析显示，HIV-1 B亚型最多有28例，占全部调查样本的82.35％，其中27例来自与供输血有关的感染者，具有相似的流行病学背景。CRF-BC重组型有4例(11.77％)，其中3例为静脉吸毒者(本地2例、流动人口1例)和1例暗娼(流动人口)。C亚型1例(2.94％)，该例感染者否认有性乱史和吸毒史，但自述曾去非洲劳务，境外期间有医疗注射史。CRF01-AE亚型1例，(2.94%)感染途径不详。

将毒株核苷酸序列与国际A～G7个亚型的参考序列及国内部分参考株核苷酸进行比较，计算彼此间的基因离散率。结果发现，第1组与A、C、D、E、F、G亚型参考序列间的离散率均在26.65％以上，与B亚型参考株的基因离散率最近，组内的基因离散率为0.052±0.021(n=23) ；1个毒株，与来自南非的C亚型代表株u07237相似最大，一致性达86％.CRF01-AE亚型1个毒株，与AE亚型代表株99THA29等的相似性最强，一致性为92％；有4个毒株与CRF-BC重组亚型参考毒株间基因离散率仅为0.96％～1.28％。3个毒株间的离散率仅0.009±0.002(n=3) ，另一个shx0234显示离这3个毒株较远的距离。

图 1

注: 使用Neibor-Joining方法作树,节点标记为计算100 次得到bootstrap 值,>70%认为有统计学意义。其中陕西样品标记为/Shx020 , 其余为各个亚型国际参考序列, 命名原则,/亚型名称,国家,分离时间、毒株名称0,如/071bc.cn.97cn0010 表示/ CRF07-BC.中国.97197年分离. 97cn0010 。 图 1 陕西省HIV-1部分样本基因序列系统进化树分析图

本次分子流行病学调查显示，从感染途径分布，即经供输血途径、性途径、吸毒和途径不详的抽样比例，与同期本省报告的感染途径比例大体相同，基本代表了本地HIV毒株流行的人群特征。在此次调查抽样中，发现HIV病毒呈家庭内传播，在10个家庭中调查了4对夫妻同时为感染者(40％)。

对34例感染者HIV-1env基因C2-V3及其邻近区序列进行分析比较后，共发现4种基因亚型的流行，即HIV-1泰国B、C亚型和CRF01-AE、CRF-BC重组型。陕西省在1998年开展艾滋病分子流行病学调查中发现存在HIV-IM组A和B2种亚型的毒株流行后，2002年以后又出现了C亚型、CRF01-AE、CRF-BC重组型，基因型别趋于多样化。在4种基因型中，HIV-1 B亚型有28例，占82.35％，是我省的主要流行亚型。流行病学调查资料表明，28例B亚型的感染者，其中27例与供输血有关，1例性途径传染者。综上所述，目前我省仍以HIV-1 B亚型为主要流行株，经血传播仍为主要途径。

本次调查发现，HIV-1CRF-BC重组型，均与BC.CN97.C54A具有较小的基因距离，在进化树上相互集聚，根据基因离散率0.5%～l％推算，估计开始流行时间大约在2年内。这4例感染者中，3例为静脉吸毒，1例为性途径感染并曾在吸毒严重的地区居住过。HIV-1病毒CRF-BC重组型在陕西局部范围已经形成流行，提示应加强对吸毒人群艾滋病防治知识的宣传和行为干预工作。

陕西省HIV-1流行株亚型分析显示，型别趋于多样化，型内基因距离加大，以及在吸毒人群中出现重组毒株，预示HIV-1在本地有加速传播的趋势。从感染者原籍分布情况看，34例感染者中有25例为本省居民，9例为外省流动人口，主要是前来就医和外来务工的流动人口。因此，加强艾滋病防治宣传教育、开展高危行为干预，关注吸毒人群的行为变化情况以及流动人口艾滋病管理工作，将是今后一个时期当地艾滋病防治工作的重点。