2007, Vol. 23
2. 吉林省吉林市中心医院妇产科;
3. 吉林大学第一医院皮肤科
近年来，越来越多的研究表明，病毒感染是宫颈糜烂的主要原因之一[1]。其中，人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的感染与宫颈糜烂的发生发展直接相关。HPV感染引起的尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是以生殖器、会阴和肛门为主要部位的最常见性传播疾病之一。HPV具有高度组织和宿主特异性。生殖器HPV感染有临床感染、亚临床感染和潜伏感染。临床常见的CA即为临床感染的表现，症状隐匿的亚临床感染病变不典型，需借助阴道镜检查及醋酸白试验来发现和诊断，而此型更具传染性，医学研究表明，宫颈HPV亚临床感染与宫颈癌的发生关系密切[2]。为了解吉林地区子宫颈糜烂患者HPV感染及基因类型分布，本研究采用免疫组化法和PCR技术对454例子宫颈糜烂患者感染HPV基因类型进行检测。现将结果报告如下。
1 对象与方法 1.1 临床资料取自2004年1月～2006年8月期间吉林市区三级甲等医院妇科门诊确诊宫颈糜烂患者454份标本。临床症状：白带增多，呈淡黄色脓性或带有血性，伴有腰骶酸痛及盆腔下坠痛和痛经。妇科检查：阴道分泌物多，宫颈呈不同程度的糜烂。112例女性患者在阴道镜下可见外阴、阴道及肛门周围出现大小不等、数量不一的乳头瘤状、菜花状或鸡冠状增生物；其中85例疣体位于外阴及阴道壁等处，27例在宫颈口出现疣体；醋酸白试验后可见增生物变白，乳头直立，基底融合，久不消退，符合CA诊断标准[2]。342例没有阴道镜可见的疣体。年龄18～72岁，平均32.1岁，病程2 d～2月，平均27 d。受检取材者均在15 d内未用抗HPV药物。
1.2 试剂TaqDNA聚合酶（5u/µl）、dNTPs（大连TaKaRa公司）。链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)超敏试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。人乳头瘤病毒（HPV通用型）单克隆抗体（美国CHEMICON公司）。
1.3 取材方法外阴常规消毒，放入阴道窥器，将棉拭子(或刮板)沿宫颈鳞-柱上皮交接处顺时针旋转2～3圈，涂布在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，干燥，放入100%丙酮，4℃固定10 min；涂布后的棉拭子置于1 ml生理盐水混匀，置于-80℃冰箱保存。疣体活组织用血管钳摘取适量，放置保存液保存，用于组织病理学检查。
1.4 免疫组化法检测HPV采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（avidin biotin peroxidase complex，ABC）检测宫颈糜烂感染HPV。按试剂盒方法操作进行，判断标准为HPV定位于胞核，胞核染为棕黄色为阳性。
1.5 PCR检测HPV-DNA类型 1.5.1 引物设计根据GenBank公布的HPV-DNA序列，设计12对HPV分型特异性引物，由大连TaKaRa公司合成。
1.5.2 DNA模板的制备将标本从-80℃冰箱内取出转移至1.5 ml Eppendorf管中，挤干棉拭子中的水分，10 000 r/min离心5 min，弃尽上清，在沉淀中加入50 µl DNA提取液充分混匀，100℃水浴10 min，10 000 r/min离心5 min，取上清2 µl进行PCR反应。
1.5.3 PCR反应在50 µl反应体系中，加入Buffer、dNTPs、引物、Taq-DNA聚合酶、模板等，经40个循环后取10 µlPCR产物与2 µl缓冲液混匀，在20 g/L琼脂糖凝胶中电泳30 min，紫外线灯下观察结果，出现与阳性对照平行的DNA带为阳性。
1.6 统计分析采用SPSS软件进行分析。
2 结 果 2.1 CA疣体组织病理学诊断112例CA发生于会阴、阴道前庭、宫颈及肛门周围，呈菜花状、丘疹样、扁平头斑块状的生殖器疣，呈外向性生长，增生的乳头小而密集，表层细胞有角化不全或过度角化；基底层和棘细胞层增生，表皮浅层或浅中层可见有特征性的灶性分布的核周空穴细胞。
2.2 免疫组化法检测2组宫颈糜烂感染HPV阳性率CA组HPV阳性率为67.8%，非CA组HPV阳性率为47.7%(Χ2=13.8，P<0.005)，差异有统计学意义。
2.3 PCR技术检测2组宫颈糜烂感染HPV类型及分布CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ°55.5%（17/32），Ⅱ°64.7%（24/38），Ⅲ°83.3%（42/35）。非CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ°32.8%（17/116），Ⅱ°49.6%（60/121）。 Ⅲ°62.3%（65/105）。HPV-DNA分型：HPV-6为16.3%（74/454）、HPV-11为12.1%（55/454）、HPV-16为9.5%（43/454）、HPV-18为7.5%（34/454）、HPV-33为5.3%（24/454）、HPV-45为4.0%（18/454）、HPV-58为3.7%（17/454）。
3 讨 论本研究结果显示，CA组的阳性率为67.8%，无CA组的阳性率为47.7%，2组感染率明显高于研究报道中HPV在正常宫颈组织中的阳性率10%～30%[3]，说明HPV感染与宫颈糜烂关系密切。HPV在正常妇女中有一定比例的感染率，其原因可能是HPV对正常细胞的感染为隐性感染，不一定导致细胞病变或病变太小，以至无法辨别。
目前已分出100余种HPV-DNA，其中30多种与宫颈感染和病变有关。宫颈HPV感染常发生在宫颈上皮移行区，此区域易发生鳞-柱异位病变致宫颈糜烂，HPV常通过微小糜烂面感染宫颈储备细胞或化生上皮[3]。根据其致病力的大小可分为高危型和低危型。HPV 6.11型主要引起皮肤黏膜的疣样病变，与CA的发病有关；而HPV 16.18型，主要引起上皮细胞的恶变，与宫颈癌的发病有关[4]。HPV-DNA基因型在不同国家、地区的检出率不同，与地区、人群差异有关[5]。本地区454例宫颈糜烂患者宫颈感染以HPV低危型6和11型为主，分别为16.3%和12.1%。高危型16，18，33，45，58型分别为9.5%，7.5%，3 5.3%，4.0%，3.7%。
流行病学研究表明，宫颈糜烂是宫颈癌的高危因素之一[6]，但糜烂与癌变的关系却不明确。HPV的短暂感染并不引发恶性病变的发生，数年乃至数十年的持续感染方能诱生癌变。说明HPV对细胞的致癌作用需要一个漫长的积累过程，HPV对细胞的转化是其他因素作用积累过程的前提[6]。我国由于年轻妇女性传播疾病发病率的增高，宫颈病变的发生率也在上升。及时治疗宫颈糜烂可有效地遏制其癌变。因此，临床上针对不同程度的糜烂选择治疗方法时，必须考虑加强宫颈糜烂患者HPV的检测，早期给予抗病毒治疗。
女性HPV感染发生的高危因素与性行为特别是多个性伴侣有关，与吸烟及口服避孕药有关，可使妇女发生HPV相关肿瘤的机率增加[7]。要加强生殖健康教育，对女性HPV感染高危人群加强检测，定期复查，早期诊治，积极治疗，可预防生殖道肿瘤的发生[8]。
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