2007, Vol. 23
2. 新疆医科大学校医院;
3. 新疆医科大学动物实验中心
巴旦杏(Amygdaluscommunis L)属世界古老栽培品种，是由野生种进化发展而来，新疆巴旦杏主要分布在喀什地区[1]。巴旦杏是一种常用的维吾尔药物，具有强壮、健脑、润肠、宣肺、生辉、明目等功能[2]。本文通过体内外实验对其抗瘤作用进行研究，为巴旦杏的开发利用提供新的依据。现将结果报告如下。
1 材料与方法 1.1 巴旦杏仁提取物的制备巴旦杏仁(新疆喀什地区)，加入50%乙醇溶液适量，体积比约为1：2。热水浴(50℃)提取3次，每次2h；合并3次提取液，过滤，水浴(50℃)浓缩并回收乙醇至浸膏，置冰箱备用。
1.2 细胞株和动物人宫颈癌细胞株(Hela)、人乳腺癌细胞株(Bcap-37)人卵巢癌细胞株(HO8910)、人膀胱癌细胞株(T24)(中国科学院上海细胞生物研究所细胞库)。雌性昆明小鼠，体重18~25g(新疆医科大学实验动物中心)合格证件号：医动字第16-003号。
1.3 设备与试剂上皿式电子天平(TMP-500，中国湖南仪器表总厂)；倒置显微镜(840100，重庆仪器厂)；CO2培养箱(美国 Thermo Forma 公司)；328型酶标仪(上海三科仪器有限公司)；RPM1640(美国 Gibco 公司)；顺铂(山东齐鲁制药厂)。
1.4 方法 1.4.1 体外抗肿瘤实验巴旦杏仁提取物设4个浓度(10-1~10-4g/ml)、阴性对照(含同一细胞密度的培养液)、顺铂对照(10µg/ml)，共6组，按文献[3]进行，在328型酶标仪上测定各孔吸光度(A)值。
1.4.2 体内抗肿瘤实验昆明小鼠随机分为4组：模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组小鼠10只。高剂量组、中剂量组、低剂量组分别为2000，1000，500mg/(kg·bw)。移植的S180腹水瘤和实体瘤小鼠模型制备与干预方法见文献[3]。移植的S180腹水瘤干预时间至小鼠死亡为止，记录小鼠死亡时间，根据公式计算生命延长率(ILS)：ILS=(实验组平均存活天数/对照组平均存活天数-1)×100%。移植的S180实体瘤小鼠，干预时间为2周。每7d称量小鼠体重1次，干预结束后第1d剥离肿瘤称重并记录，计算肿瘤生长抑制率(IR)：IR(%)=(对照组平均瘤重-干预组平均数瘤重)/对照组平均瘤重×100%。
1.5 统计分析采用SPSS 12.0统计软件进行方差分析，组间比较用t检验。
2 结 果 2.1 巴旦杏仁提取物体外抗肿瘤作用 2.1.1 巴旦杏仁提取物对HO8910细胞生长的影响光镜下观察到，未干预肿瘤细胞接种72h时细胞约占孔底面积的85%~90%。巴旦杏仁提取物干预肿瘤细胞72h，高剂量组肿瘤细胞数量明显减少，多数细胞体积固缩变小而略呈圆形、椭圆形，细胞间距大。与阴性对照比较，低剂量组肿瘤细胞数量变化较小。
2.1.2 巴旦杏仁提取物对肿瘤细胞生长的影响(表 1)从表 1可见，提取物高、中、低、极低浓度对Hela、Bcap-37细胞均有较强的抑制作用(P<0.05)；提取物高中浓度对HO8910、T24细胞具有较强的生长抑制作用(P<0.05)，极低浓度对该2种肿瘤细胞的生长均未见抑制作用。A值随着干预时间的延长和提取物浓度而变化，干预48h时，4种肿瘤细胞的A值明显下降，而48~72h，A值变化不明显；中剂量A值明显下降，高剂量持续下降，而极低、低剂量A值变化不明显。
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表 1 巴旦杏仁提取物对体外肿瘤细胞生长的影响(72h,A值) |
2.2 巴旦杏仁提取物体内抗肿瘤作用(表 2)
巴旦杏仁提取物各剂量组小鼠平均存活天长于模型组，但差异无统计学意义(P>0.05)；模型对照组小鼠平均瘤重(30.9±0.98)g，巴旦杏仁提取物各剂量组小鼠平均瘤重明显低于S 180实体瘤模型组小鼠平均瘤重(P<0.01)，且呈剂量效应关系。表明巴旦杏仁提取物具有抑制S 180实体瘤块生长的作用，但无延长S 180腹水瘤小鼠存活作用。
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表 2 巴旦杏仁提取物对S 180 腹水瘤存活和实体瘤小鼠瘤块生长的影响( x±s, n= 10) |
3 讨 论
巴旦杏仁提取物对Hela、Bcap-37细胞均有较强的抑制作用，提取物高中浓度对HO8910、T24细胞具有较强的生长抑制作用，极低浓度对该2种肿瘤细胞的生长均未见抑制作用，提示Hela、Bcap-37细胞对巴旦杏仁提供取物更敏感，说明提取物对不同肿瘤细胞其抗肿瘤效应不同。巴旦杏仁提取物干预48h时A值明显下降，而48~72h，A值变化不明显，说明巴旦杏仁提取物在48h即具有较强的抑制肿细胞生长效应。结果表明，高中剂量抑制肿瘤细胞生长作用较强，巴旦杏仁提取物低剂量抗肿瘤效应不明显，可能与低剂量中有效成分浓度过低有关。体内实验结果表明，巴旦杏仁提取物具有抑制S180实体瘤小鼠瘤块生长的作用，且呈剂量效应关系，但巴旦杏仁提取物对S 180腹水瘤无作用。
实验研究表明，甜巴旦杏仁具有一定的抗氧化作用[6]，提高小鼠的体液和细胞免疫作用[7]；巴旦杏还具有抗突变，保护染色体损伤，促进DNA修复作用[8, 9]。上述作用是否与巴旦杏仁提取物抗肿瘤作用有关及巴旦杏仁抗肿瘤机制和有效成分需进一步研究。
| [1] | 朱 京琳. 新疆巴旦杏[M].乌鲁木齐: 新疆人民出版社, 1984: 15-18. |
| [2] | 薛晓珍. 新疆巴旦杏的主要营养成份及用途[J]. 仪器仪表与分 析监测, 2003(2) : 45–46. |
| [3] | 肖辉, 张月明, 张琰, 等. 阿魏蘑茹提提取物抗肿瘤作用的实验作 用[J]. 疾病控制, 2006, 10(4) : 331–334. |
| [4] | 刘金荣, 但建明, 赵文彬, 等. 维药巴旦杏的微量元素分析[J]. 微 量元素与健康研究, 2002, 19(1) : 29–31. |
| [5] | 刘金荣, 但建明, 江发寿, 等. 巴旦杏仁的营养成分与理化常数测 定[J]. 营养学报, 2002, 24(2) : 202–203. |
| [6] | 马龙, 邓淑文, 肖碧玉, 等. 新疆甜巴旦杏仁抗氧化作用的实验研 究[J]. 新疆医学院学报, 1997, 20(2) : 92–94. |
| [7] | 邓淑文, 肖壁玉, 马龙, 等. 巴旦杏仁液对小鼠免疫功能的影响[J]. 营养学报, 1198, 20(2) : 234–235. |
| [8] | 钟承民, 付德润, 马龙, 等. 新疆22 种食用野生植物抗诱变研究[J]. 新疆医学院学报, 1997, 20(2) : 88–91. |
| [9] | 多力坤#买买提玉素甫, 阿不都拉#阿巴斯, 门进, 等. 巴旦杏仁对 小白鼠PCE 抗诱变活性的探讨[J]. 干旱区研究, 2004, 21(1) : 90–92. |