芹菜素是一种天然黄酮类物质，广泛存在于蔬菜、水果中。研究表明，芹菜素具有多种生物学功能，如抗氧化性、抗炎、抗肿瘤、中枢镇静等^[1-3]。本文旨在建立蔬菜中芹菜素高效液相色谱测定法，并测定哈尔滨市售41种蔬菜中芹菜素含量。现将结果报告如下。

1 对象与方法 1.1 仪器与试剂

Waters 高效液相色谱分析仪（WatersTM2690分离系统，Waters996二极管阵列检测器，Waters色谱工作站，Millennium32软件），旋转蒸发器RE-52A(上海精科实业有限公司)，ESJ180-4型分析天平（沈阳龙腾电子秤量仪器有限公司）；无水乙醇、甲醇、冰醋酸、浓盐酸等（均为AR级）；色谱纯甲醇；芹菜素标准品（美国Sigma公司）；市售41种蔬菜。

1.2 色谱条件

色谱柱为Phenomenex C18柱（250 mm4.60 mm,4u），流动相为甲醇:水＝60:40（体积比），三氟乙酸调节至pH 2.5，流速1 ml/min，进样量12 l（自动进样），检测波长338 nm,柱温为20℃。

1.3 方法

（1）对照品溶液的制备:精密称取芹菜素标准品1 mg，置50 ml容量瓶中，加入甲醇约20 ml，微热溶解，冷却至室温，加入少量冰醋酸^[4]，加甲醇稀释至刻度，摇匀，获得浓度为20 mg/L的对照品储备溶液。（2）供试品溶液的制备:将市售蔬菜去枯叶洗净，于烤箱中40℃烤干，备用。精确称取蔬菜干品4.00 g，加入80％乙醇/水100 ml（其中每100 ml溶液中含10 ml浓盐酸），同时加入0.20 g特丁基对苯二酚（TBHQ），90℃下回流3 h，冷却至室温，用布氏漏斗（Bcher）过滤，精确回收滤液备用。供试品溶液上柱前离心机3 000 r/min离心20 min。

2 结果 2.1 线性关系校准曲线

取对照品储备溶液，用甲醇稀释，制成浓度（mg/L）分别为10，8，6，4，2，1的对照品溶液，依次进样测定，以浓度C（mg/L）为自变量，峰面积响应A(Vs)为应变量，线性拟合，得线性方程A=76035.567C+7169.570 (r=0.999) ，表明芹菜素标准品在12～120 g范围内与色谱峰面积响应有良好的线性关系，最低检出限为0.10 mg/L。

2.2 正交设计优化样品提取条件(表 1)

本实验以溶剂、溶剂浓度、提取时间为考察因素，每个因素设3个水平，采用L9（34）正交设计，以芹菜素的提取量为观察指标，优化蔬菜中芹菜素的提取条件，得出最佳提取条件为80%乙醇/水提取3 h（内含1.2 mol/L盐酸^[5]，2 g/L的TBHQ）。

2.3 重复性实验平行取5份样品（芹菜叶）2.00 g,按优化条件处理，进行测定。计算得5份样品中芹菜素的含量（mg/kg）分别为:4 860.14，5 551.19，5 657.40，5 229.27，5 577.29，平均值为5 375.06 mg/kg，相对标准偏差(RSD)为6.16%＜10%（n=5）。说明本实验所确定的蔬菜中芹菜素的提取条件重复性很好。
2.4 精密度实验

选择10，6，2 mg/L的芹菜素标准品溶液，连续6次进样，RSD分别1.187%，3.983%，0.149%，均＜10％，表明仪器的精密度很好。

2.5 稳定性实验

选择10，6，2 mg/L的芹菜素标准品溶液连续5 d同一时间测定，RSD分别为1.77%，5.59%，4.31%，均＜10%，表明芹菜素标准品溶液在5 d内稳定。

2.6 加标回收率实验

精确称取8个平行样品（芹菜茎2.00g）,4个样品中加入标准品0.10 mg,按照优化条件同时平行处理，平均回收率为99.80%。

2.7 不同蔬菜干品中芹菜素的含量(表 2)
3 讨论

目前对总黄酮类物质的检测多用铝显色法。本文建立的方法稳定，最低检出限为0.10 mg/L，明显优于文献中报道的最低检出限为0.4 mg/L^[6]。样品有效成分的提取易受到提取溶剂、提取时间、提取温度的影响，本实验对此采用正交设计摸索条件，得到了本实验中的最佳提取条件。在本文确定的色谱条件下，芹菜素获得很好分离，且准确度和精密度均较高。芹菜素的抗氧化性明显优于维生素C和维生素E，在外界易受到温度的影响，因此，在本实验样品前处理中，分别采用了30℃，40℃，50℃，70℃下干燥箱烘干。结果显示，样品在40℃以下芹菜素的含量无明显变化，50℃以上芹菜素有降解，与文献报道相符^[5]。在本实验中测得多种蔬菜中的芹菜素的含量，在当地芹菜叶茎、小白菜等10种蔬菜中含量均>100 mg/kg，而在蒜苔、蒜黄等11种蔬菜中未测出，其他蔬菜中芹菜素的含量均低于100 mg/kg。而文献中报道^[5]，中国大白菜中芹菜素含量为187.0 mg/kg，大辣椒为272.0 mg/kg,大蒜为217 mg/kg,与本实验测得结果中国大白菜为162.86 mg/kg，大辣椒为63.70 mg/kg，大蒜为160.27 mg/kg有一定的差异。说明不同地域、环境可能对蔬菜中芹菜素含量有影响。