二氧化氯是一种强氧化剂, 对常见致病微生物、真菌及病毒等具有高效、快速的杀灭能力。在国外发达国家, 稳定性二氧化氯消毒剂已经普及, 而在我国则刚刚兴起, 目前已广泛用于各种饮料、食品加工、医院、宾馆、浴池、游泳池的消毒, 水果蔬菜、水产品、肉类的保鲜等。本试验采用悬液定量杀菌试验、表面消毒现场试验和瓜果蔬菜消毒模拟现场试验, 评价二氧化氯消毒液的杀菌效果。结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 消毒液

本试验用二氧化氯消毒液为二元包装(A剂为稳定态二氧化氯溶液, 淡黄色液体; B剂为活化剂稀硫酸, 无色透明液体), 将A剂与B剂按1:1比例配制。二氧化氯原液含量为6 732.47 mg/L。

1.2 菌悬液

试验菌株(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供)为金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠埃希菌(8099)、铜绿假单胞菌(ATCC 15442), 分别将菌悬液与有机干扰物质(3.0%牛血清白蛋白)按1:1混合备用。

1.3 中和剂悬液定量鉴定试验

试验设6组, 以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌为指标菌。结果判定:以第1组无试验菌, 或仅有极少数试验菌生长; 第2组较第1组为多, 但较第3, 4, 5组为少的试验菌生长; 第3, 4, 5组有相似量试验菌生长, 其组间菌落数误差率应不超过15%, 为中和剂鉴定试验合格^〔1〕。

1.4 杀菌试验方法

(1)悬液定量杀菌试验:试验组于4.5 ml消毒液中加入1.0 ml含有机干扰物质的试验用菌悬液, 作用至预定时间(7.5, 15, 22.5 min), 分别吸取0.5 ml混合液(试验菌与消毒液混合液)加于4.5 ml中和剂中; 中和作用10 min, 进行活菌培养计数。试验同时设阳性对照组(以稀释液代替消毒剂, 试验步骤和活菌培养计数与试验组相同)、阴性对照组(以试验用同批次稀释液、中和剂接种培养)。评价标准:试验重复3次对试验菌的杀灭对数值均≥5.00可判为消毒合格^〔1〕。(2)表面消毒现场试验:试验组以木质桌面为消毒对象。擦拭消毒, 作用时间为15 min (为产品使用说明书规定的有效作用时间), 用棉拭涂抹法采样, 将采样后棉拭置于含中和剂的采样液中, 中和作用10 min。进行活菌培养计数。试验同时设阳性对照组(于消毒前采样, 采样方法和活菌培养计数与试验组相同)、阴性对照组(以试验用同批次棉拭、采样液、稀释液接种培养)。评价标准:消毒样本的平均杀灭对数值≥1.00可判为消毒合格^〔1〕。(3)瓜果蔬菜消毒模拟现场试验:试验组染菌方法及面积:以黄瓜为消毒对象, 用记号笔在试验用的黄瓜中间较平部位标出染菌区(2.0 cm ×12.5 cm), 染菌0.1 ml, 涂匀, 置37℃恒温箱15 min干燥。浸泡消毒(将染菌样本, 依次定时放入含消毒液的容器中, 使其完全浸没, 作用15 min (为产品使用说明书规定的有效作用时间), 用棉拭涂抹法于染菌区内采样, 将采样后棉拭置于含中和剂的采样液中, 中和作用10 min。进行活菌培养计数。试验同时设阳性对照组(取染菌样本3个, 以中和剂代替消毒剂, 其余操作同试验组)、阴性对照组(以试验用同批次棉拭、采样液、稀释液接种培养)。评价标准:消毒样本中大肠埃希菌杀灭对数值均≥3.00可判为消毒合格^〔8〕。

2 结果 2.1 中和剂悬液定量鉴定试验结果

中和剂鉴定试验结果表明, 用含1.0 g/L硫代硫酸钠、0.5 g/L卵磷脂、体积分数为3.0%吐温80的0.03 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS), 可有效中和100 mg/L二氧化氯消毒液的残留作用, 符合中和剂悬液定量鉴定试验标准。

2.2 悬液定量杀菌试验结果(表 1)

试验温度为(20±1)℃, 试验重复3次。二氧化氯消毒液有效成分(二氧化氯)含量为100 mg/L (为产品使用说明书规定的最低使用浓度), 作用时间为15 min, 对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌各次的杀灭对数值均> 5.00。

2.3 表面消毒现场试验结果

对木质桌面(30个样本)的自然菌平均杀灭对数值及范围为1.18(1.05~2.11);阳性对照组平均菌落数及范围为83.0 cfu/cm²(51.0~152.0 cfu/cm²); 阴性对照组均无菌生长。

2.4 瓜果蔬菜消毒模拟现场结果

对人工污染黄瓜(30个样本)表面的大肠埃希菌平均杀灭对数值及范围为5.10 (4.20~6.17);阳性对照组平均对数值及范围为6.17(6.15~6.20);阴性对照组均无菌生长。

3 讨论

本试验结果表明, 二氧化氯含量为100 mg/L, 作用时间为15 min, 均可杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌, 并达到消毒指标; 二氧化氯含量为100 mg/L, 作用时间为15 min, 可杀灭木质桌面自然菌, 并达到消毒指标; 二氧化氯含量为100 mg/L, 作用时间为30 min, 可杀灭人工污染黄瓜表面的大肠埃希菌, 并达到消毒指标。本试验用二氧化氯消毒液为二元包装, 现用现配, 即可保证消毒效果, 又可延长保存时间。使用方便, 具有推广价值。