止血海绵是药用明胶经发泡与甲醛交联制成的一种医疗产品。甲醛不仅对止血海绵植入部位的组织有刺激作用, 而且还被认为是一种可疑致癌物。因此, 准确测定止血海绵中微量残留甲醛的含量是控制该类产品生产和质量的关键^〔1〕。目前, 甲醛的测定方法有容量法、酚试剂法、乙酰丙酮光度法、变色酸光度法、气相色谱法和动力学光度法等, 其各有优缺点^{〔2, 3〕}。本文对酚试剂法测定止血海绵中的微量残留甲醛的含量进行了探讨, 获得满意结果, 报告如下。

1 材料与方法 1.1 主要仪器与试剂

(1)酚试剂显色液:称量0.05 g酚试剂〔3-甲基-苯并噻唑胺C₆H₄SN (CH₃) C:NNH₂.HCl, 简称MBTH〕, 加水溶解, 稀释至500 ml。放冰箱保存, 可稳定3 d。(2)1%硫酸铁铵溶液:称量1.0 g硫酸铁铵, 用0.1 mol/L盐酸溶液溶解, 并稀释至100 ml。(3)甲醛标准储备溶液:量取2.8 ml含量为36%~38%甲醛溶液放入1 000 ml容量瓶中, 用蒸馏水稀释到刻度。此溶液1 ml约含1 mg甲醛。用碘量法标定其准确浓度。此溶液可稳定3个月。(4)甲醛标准工作液:临用时, 将甲醛标准储备液用水稀释成1.00 ml含0.001 mg甲醛的标准工作液。(5)仪器:752型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。(6)材料:止血海绵(江苏南通某工厂)。

1.2 测定方法 1.2.1 标准曲线绘制

用标准溶液绘制标准曲线:取10 ml具塞比色管, 分别加入系列甲醛标准溶液和4 ml酚试剂显色液及0.5 ml 1%硫酸铁铵溶液, 以水稀释至刻度摇匀, 于35 ℃水浴中放置15 min, 在630 nm波长下, 以水作参比, 测定各管的吸光度, 以甲醛含量为横坐标, 吸光度为纵坐标, 绘制标准曲线。

1.2.2 样品溶液制备及测定

准确称取一定量的止血海绵, 按照国家标准GB/T 16 886.12-2 000加入规定量的生理盐水, 于(37±1) ℃下浸提一定时间^〔4〕。准确吸取1 ml样品溶液于10 ml比色管中, 按制作标准曲线的操作标准曲线的操作步骤测定吸光度。

2 结果与分析 2.1 实验条件的选择 2.1.1 测定温度的选择

分别取0.9812 μg/ml的甲醛工作作液1 ml, 加入4 ml酚试剂显色液及0.5 ml的1%硫酸铁铵溶液, 混匀, 分别放置。5, 10, 20, 25, 35, 40 ℃进行15 min显色反应, 在630 nm波长下, 测定其吸光度。实验结果表明, 温度对甲醛与酚试剂的显色反应影响很大。温度低时, 吸光度较小, 而当温度达到25 ℃时, 吸光度趋于稳定。这主要是因为甲醛与酚试剂的显色反应在低温时反应不完全所致。因此, 将甲醛与酚试剂的显色反应温度控制在35 ℃水浴中进行。

2.1.2 酚试剂用量的选择

分别取0.9812 Lg/ml的甲醛工作液1 ml, 加入不同体积的酚试剂显色液及0.5 ml 1%硫酸铁铵溶液, 用水稀释到相同体积后摇匀, 测定其吸光度。结果可见, 当酚试剂用量在3.0~6.0 ml时, 吸光度达到最大, 并且比较稳定。因此, 将酚试剂的用量定为4.0 ml。

2.1.3 硫酸铁铵溶液用量的选择

按实验方法固定甲醛工作液的体积(1 ml)和酚试剂的用量(4.0 ml), 改变硫酸铁铵溶液的体积, 测定不同条件下的吸光度。结果表明, 当硫酸铁铵溶液体积为0.4~0.9 ml时, 吸光度达到最大, 并基本保持稳定, 因此, 硫酸铁铵溶液的用量定为0.5 ml。

2.1.4 止血海绵浸提时间的确定

国家标准中关于医疗制品的浸提时间推荐了1, 12, 24, 48, 72 h。为了确定止血海绵的最佳浸提时间, 分别于浸提不同时间后, 测定浸提液中的甲醛浓度。结果表明, 浸提液中甲醛的浓度的随时间先上升又降低。这主要是止血海绵中的甲醛浸提出来需要一定的时间, 但同时浸提出来的甲醛又被氧化。因此, 将浸提时间定为24 h。

2.2 标准曲线的线性范围及检出限

按实验方法测定一系列不同体积甲醛溶液体系的吸光度。当甲醛含量在0.02~1.5 μg/5 ml时, 有良好的线性关系。因此, 甲醛的检出限为0.004 μg/ml。

2.3 回收率测定

称取一定量的止血海绵按上述样品测定方法测定样品中甲醛的含量。在同样的样品溶液中准确加入一定量的甲醛标准溶液, 按相同的分析步骤测定其中加入甲醛的含量, 并计算回收率, 分别进行5次平行测定。回收率分别为96.6%, 104.0%, 101.0%, 102.8%, 95.2%。

2.4 止血海绵样品中甲醛含量的测定

分别取不同批次的止血海绵按上述测定方法测定样品溶液中甲醛的含量, 计算止血海绵中的甲醛含量, 每个样品平行测定5次, 并计算相对标准偏差(RSD), 3个样品的相对标准偏差为3.7%, 2.9%, 2.3%。

3 小结

酚试剂分光光度法测定甲醛浓度线性范围为0.004~0.3μg/ml。相对标准偏差为2.3%~3.7%, 回收率为95.2%~104.0%。具有简便、快速、灵敏度高、重现性好等特点。