肠道杆菌是寄居在人类和动物肠道中生物学性状近似的革兰阴性杆菌, 是引起腹泻病的病原菌。大多数肠道杆菌是肠道的正常菌群, 但当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道外部等特定条件下也可成为条件致病菌而引起疾病或食物中毒。在肠道菌的鉴定方面, 致病性的肠道菌所用的初筛培养基对变形杆菌族的细菌无特殊的鉴别意义。为简化细菌鉴定实验手段, 提高工作效率, 我们利用细菌的各种生长特性, 研制出一种简单、快速、易于掌握、特异性和稳定性强的鉴别培养基。现将结果报告如下。

材料与方法

(1)菌株:标准菌株63株(国家菌种保存中心、哈尔滨铁路中心医院); 临床参考菌株164株(辽宁省疾病预防控制中心、哈尔滨铁路中心医院、沈阳市传染病医院、沈阳市和平区疾病预防控制中心等单位从标本中分离)。所有菌株均按常规保存和培养。(2)培养基配制(g):肉膏4;蛋白胨15;葡萄糖1;乳糖10;色氨酸2;氯化钠5;硫代硫酸钠0.03;硫酸亚铁0.2;酚红0.02;琼脂粉15和蒸馏水1 000 ml。pH 7.4~7.6。配制后的培养基经高压灭菌后, 置高层和斜面各一半。(3)方法:将新鲜菌落接种到此培养基, 穿刺高层, 涂抹斜面, 37 ℃培养24 h后观察结果, 见表 1。同时对每种生化试验的结果进行质控, 以尽量减少系统误差和避免随机误差。

结果与讨论

(1)菌属判定大肠埃希菌属的细菌:分解葡萄糖和乳糖产酸产气, 不产H₂S, 不产IPA; 沙门菌属的细菌:不分解乳糖, 分解葡萄糖产酸, 产H₂S不定, 产气不定, 不产IPA; 志贺菌属的细菌:不分解乳糖, 分解葡萄糖产酸, 不产H₂S, 不产气, 不产IPA; 变形菌族的细菌:不分解乳糖, 分解葡萄糖产酸, 产H₂S不定, 产气不定, 产生IPA。此培养基在观察葡萄糖、乳糖的分解情况, 是否产H₂S和是否产气同时, 变形菌族的细菌全部产生IPA, 可一目了然地被鉴别出来。(2)采用标准菌株和临床参考菌株共227株, 用此培养基进行实验, 用已知的结果评价该培养基的实用性和准确性。其中大肠埃希菌98株, 符合率达100%;志贺菌72株, 符合率达100%;沙门菌8株, 符合率达87.5%;变形菌族细菌12株, 符合率达100%, 其他菌株37株, 符合率达100%(其中包括产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、费氏柠檬酸杆菌、蜂房哈夫尼亚菌、深红沙雷菌、粘质沙雷菌、迟钝爱德华菌、小肠结肠炎耶尔森菌)。(3)培养基特性:该培养基在对埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属进行鉴定的同时也可对变形菌族的细菌进行鉴定, 使一种培养基在充分利用细菌生长特性基础上最大的发挥其作用。具有简便、价廉、节省时间、准确等优点, 2种方法判定结果的符合率达98%以上。

本方法具有先进性、科学性, 不仅提高肠道菌的鉴定质量, 还能应对突发事件中的流行病学调查, 适合在基层医疗卫生单位使用。不足之处是收集的临床菌株数量和种类不够多, 在今后的工作中应不断的进行补充, 使此培养基在应用中更加完善。