放射治疗(Radiation Therapy，RT)已广泛应用于多种实体肿瘤的治疗，并取得一定疗效。机体免疫状态与肿瘤的发生和转归有关^[1]，CD4⁺CD25⁺Foxp3调节性T细胞(即Treg细胞)是具有免疫调节功能的T细胞亚群，可发挥抗肿瘤抑制作用^[2]。研究表明癌症患者外周血和肿瘤组织中Treg细胞比例增加，且比例越高，预后越差^[3]。本文观察了NSCLC患者RT治疗前后CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比值的变化，并探讨其水平与临床特点的关系。

1 材料与方法 1.1 病例

选择2017年7月-2017年12月期间在我科接受RT治疗的50例NSCLC患者，其中男33例，女17例；年龄46~80岁，中位年龄63岁。治疗前全部经纤维支气管镜或CT引导下经皮肺穿刺活检获取病理学诊断，其中鳞癌18例，腺癌28例，腺鳞癌2例，大细胞癌2例；中央型肺癌6例，周围型肺癌44例。肿瘤直径≤3cm 10例，＞3cm 40例。Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲa期11例，Ⅲb期15例，Ⅳ期7例，Ⅰ~Ⅲb期患者因自身原因或其他原因拒绝手术(均签署告知书)而接受RT治疗。高分化7例，中分化癌11例，低分化癌32例。选择同时期我院健康体检中心常规体检者40例为对照，其中男26例，女14例；年龄50~78岁，中位年龄65岁。肺癌组和健康对照组患者在性别和年龄差异无统计学意义，具有可比性。所有对象均无自身免疫性疾病、免疫缺陷疾病或器官移植；且近3月未使用过免疫增强和(或)抑制剂。

1.2 治疗方法

50例患者均行IMRT放疗，采用体膜固定，德国SIEMNS制造的Sensation16 CT扫描，层厚5 mm。计划系统为Pinnacal，治疗机为直线加速器Varian Clinac IX-4844，放疗剂量：95%PTV=60 Gy，5次/周，共30次。

1.3 检测方法

空腹抽取肺癌组(RT前和RT后1月)以及健康对照组外周血2 ml送检，采用流式细胞计数仪(Beckman Coulter Cytomics FC500)检测CD4⁺/CD8⁺及CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比值。

1.4 统计学方法

SPSS 17.0用于统计学分析，测量数据用均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用t检验，放射治疗前后采用配对t检验进行两组患者比较，P＜0.05被认为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 外周血T细胞亚群的变化

由表 1可见：肺癌组患者较健康对照组CD4⁺/CD8⁺比值升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；NSCLC患者放射治疗前后CD4⁺/CD8⁺比值升高，与治疗前比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。肺癌组患者CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比值明显高于健康对照组(P＜0.01)；NSCLC患者RT治疗后CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比值较治疗前明显下降(P＜0.01)，但仍明显高于健康对照组(P＜0.01)。

2.2 RT治疗后患者外周血Treg表达与临床特征的相关性

分析发现：CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比值与肿瘤直径、肿瘤分期及分化程度有关，差异有统计学意义(P＜0.05)；而与性别、年龄、病理类型无关。见表 2。

3 讨论

肺癌是导致人类死亡的常见恶性肿瘤，约80%为非小细胞肺癌(NSCLC)^[4]，其发病人群多为中老年人，往往合并内科基础疾病，且大部分确诊时已为中晚期^[5]。肺癌的死亡率逐年呈上升趋势，防控形势严峻^[6-8]。放射治疗为无法手术或拒绝手术的患者提供了另一种治疗途径。有文献报道放射治疗具有改善细胞免疫功能的作用。

身体的免疫状态在对肿瘤的免疫应答中起着极其重要的作用，近年来，癌症患者的免疫功能与预后的相关性已经成为科研研究的重点之一^[2]。T淋巴细胞在抗肿瘤的免疫系统中起主要作用，T细胞检测是观察癌症患者免疫功能最重要方法之一^[9]。CD4⁺T细胞为辅助性T细胞并在抗肿瘤中发挥积极作用。CD8⁺T细胞功能是抑制免疫反应激活并具有负调节作用。早期的研究显示一类CD4⁺T细胞亚群能抑制T淋巴细胞活化，即Treg细胞^[10]。多种恶性肿瘤患者外周血CD4+T细胞水平显著低于健康人，CD8⁺T细胞水平高于健康人，Treg细胞显著增多^[11-12]，提示肿瘤患者的免疫状态为低。殷红梅等^[13]研究发现NSCLC患者外周血Treg细胞比例显著高于健康人群。然而，文献中也有不同的报道，袁嘉敏等^[14]发现胃癌患者外周血CD8⁺T细胞显著减少，CD4⁺/CD8⁺比值增高；罗君等^[15]揭示了211例肺癌患者外周血淋巴细胞亚群的状态，发现CD8⁺细胞减少并且CD4⁺/CD8⁺比率增加。本研究通过流式细胞仪技术，测量了50位NSCLC患者和40位健康志愿者的外周血T淋巴细胞亚种。结果显示，NSCLC患者外周血CD4⁺/CD8⁺比值也较健康人明显升高^[1]。造成这种不一致的原因，这可能与CD4⁺和CD8⁺细胞亚型中不同功能亚型的存在有关，研究发现T细胞(CD4⁺)不仅包括阳性调节性淋巴细胞，还包括CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺淋巴细胞，例如抑制型调节性淋巴细胞，而T淋巴细胞(CD8⁺)除了免疫抑制性淋巴细胞，还包括细胞毒性T效应细胞^[1]。因此用CD4⁺/CD8⁺比值评估机体的免疫状态不太合理。本文中CD4⁺/CD8⁺比值在RT治疗后短期内未见明显变化，因此亦无法作为即时反映免疫功能变化的参考指标。

Treg细胞即CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，可下调免疫应答，使免疫逃逸发生。其数目增加容易导致免疫耐受，进而降低免疫系统对NSCLC的免疫监控，发生免疫逃逸，最终促进NSCLC的发生^[16]。Marshall等^[4]研究显示，Treg细胞在促进肺癌早发转移同时还能进一步加快转移性病灶的发展。NSCLC患者外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞水平较健康人群显著升高，且接受手术治疗的患者CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞的比例明显下降。体外NSCLC肺癌细胞中Treg细胞的表达亦显著增强^[17]。

CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞被Sakaguchi等首次定义后，其作为真正具有免疫作用的调节性T细胞越来越受到关注。本研究结果显示，NSCLC患者外周血Treg细胞的比例为(3.36±0.37)%，显著高于健康人群(P＜0.01)，与付白清等^[18]报道的食管癌外周血的数据(3.72±1.39)%相近，提示肿瘤患者免疫处于抑制状态。于荣等^[19]的研究显示有效治疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg可显著降低，本文亦发现放射治疗后外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞出现明显下降(P＜0.01)，提示RT可通过免疫途径对机体产生积极影响。有研究表明：CD4⁺CD25v+Foxp3⁺Treg是目前唯一严格意义上的Treg细胞标记^[20]。本试验结果显示：CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比例与肿瘤直径、肿瘤分期及分化程度相关，肿瘤越大、肿瘤分期越晚及分化程度越低者外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg/ CD4⁺比例越高，提示Treg细胞数目与肿瘤负荷有关，肿瘤因素可以使Treg细胞增加。

非小细胞肺癌微环境中存在CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞介导的免疫抑制网络，对其深入研究将有助于进一步了解NSCLC免疫调节机制，为NSCLC病情及预后判断提供一定依据。在非小细胞肺癌的发生、发展过程中，患者外周血中Treg细胞比例增加是确定的，因此深入研究Treg细胞的免疫调节机制，有助于了解非小细胞肺癌的免疫耐受及免疫逃逸，为临床疗效评价提供新的方向。在这项研究中，NSCLC患者外周血中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞的检测水平，不仅有助于评估患者的免疫应答状态，还有可能有助于预测NSCLC的预后^[3]。因本组病例较少，仍需今后进一步研究。