外周血淋巴细胞微核检查是评价放射工作人员辐射损伤的敏感指标之一, 是用于快速检测体内染色体畸变的方法, 以简便、快速、敏感为优点，广泛应用于辐射损伤、遗传病学、药物筛选以及血液学等工作的研究^[1]。外周血淋巴细胞微核检测工作的特点是研究对象为活的细胞，手工操作较多、环节多、时间长、易受多种因素影响而导致结果错误^[2]。为提高微核的检出率以及阅片效率，作者根据工作经验结合并借鉴其他医学检验的室内质量控制方法，对影响外周血微核检测工作室内质量控制的因素进行研究。

1 材料与方法 1.1 对象与材料

以宝鸡市在岗期间放射工作人员为研究对象共669例，其中男性560例，女性109例。使用1640培养基进行外周血淋巴细胞微核培养，培养基由北京易世盛达科技发展有限公司提供。

1.2 微核制片方法

采用微量全血法, 研究将不同血量的全血加人混合1640培养基的瓶内, 混匀后在不同温度条件下培养72 h。然后经过不同低渗时间和离心速度处理，进行固定、滴片（悬液滴加在不同处理的玻片上吹开，在酒精灯上固定）和染色（1:9比例的吉姆萨染液和缓冲液染色液加到载破片上进行染色15 min)情况下，寻找最佳的微核制片室内质量控制条件。

1.3 标本分级

根据王喜爱等^[3]的研究结论, 作者再根据细胞数量和分布情况以及核浆等情况将制作效果分为6级:A级:淋巴细胞数量多、分布均匀、密度适中、染色清晰、核浆分明、胞浆完整、透明度好、能有效提高微核的检出准确率和阅片效率。B级:淋巴细胞数量少、分布不均、密度稀疏; 其他与А级一致。C级：淋巴细胞数量、分布、密度与A级一致; 染色清晰、胞浆较厚、透明度模糊; 较能有效提高微核的检出准确率和阅片效率。D级:淋巴细胞数量特多，分布成团状、密度过密; 染色、胞浆、透明度与C级一致; 不能有效提高微核的检出准确率和阅片效率。E级:淋巴细胞数量、分布、密度上与В级相同；染色清晰、核浆分离，裸核较多、透明度模糊; 不能有效提高微核的检出准确率和阅片效率。F级:淋巴细胞数量、分布、密度与D级相同; 其他与E级相同。

2 结果 2.1 不同接种血量和不同培养温度的影响

无菌采集静脉血5 ml, 无菌处理1640培养瓶口，用无菌0.7 × 32规格注射器分别向1640培养基中加入全血10、15、20、25、30和35滴，混匀（混匀动作要轻，以免溶血）。置于36℃、36.5℃、37℃、37.5℃、38℃和39℃培养箱中培养72 h(每个接种量48张片子，不同温度各8张，共制作288张片子），经过后续的收获、固定、染色、干燥。油镜下观察淋巴细胞数量、密度情况（见表 1)，A级片的最佳接种血量是20 ~25滴之间，培养温度严格控制在（37.0 ±0.5)℃之间。

2.2 收获细胞中不同低渗时间及离心速度处理的影响

每个不同低渗时间48张片子，不同离心速度各8张，共制作288张片子。处理方法如下：离心:将培养瓶内悬液转入10ml刻度离心管内，离心速度分别为1000、1500、2000、2500、3000和3500 r/min, 离心6 min。低渗:吸去上清液, 加入已预温至37 t的0.075 mol/L氯化钾溶液6ml, 用吸管打匀，低渗0、3、6、9、12和15 min。加新鲜配制的3:1 (甲醇:冰醋酸）固定液1 ml，混匀后以相应不同离心速度离心6 min, 留约0. 5 ml。固定:缓慢加人固定液约6 ml混匀，固定30 min。然后以相应的不同离心速度离心6 min, 吸去上清液，留约0.3 ml左右制成细胞悬液。进行滴片（冷藏过的玻片）和染色，油镜下观察细胞的核浆分明情况以及细胞分布情况(见表 2)。A级片的最佳低渗时间是6 ~9 min, 最佳离心速度是1500~2000 r/min。

2.3 新旧固定液的影响

固定液临时配置处理10个标本，固定液配置好之后分别放置0.5 h、l h, 处理20个标本，进行滴片、染色，油镜下观察细胞的胞浆情况。结果是固定液临时配置所制作的片子比放置了0.5h和lh固定液所制作的片子在淋巴细胞数量上、核浆分离程度上效果更好，所以说固定液应在使用前临时配制，以防止有效成分的挥发。

2.4 玻片的前处理滴片

将制备好的20份标本分别滴在冷藏过的玻片和热水处理过的玻片，干燥、染色，油镜观察细胞的数量。结果是冷藏过的玻片比热水处理过的玻片，在淋巴数量上较多，可以看出冷藏过的玻片的附着力比热水处理过的玻片的强。

3 讨论

质量控制的目的是为了监测和评价本实验室工作质量，考察实验室、工作人员、仪器的工作状态，为职业人员如实提供临床检验资料^[4]。外周血中淋巴细胞微核标本制作的质量控制至关重要，不仅要关注检验前的质量控制，而且还要特别重视检验过程中的质量控制，因为出现失误就会导致微核片质量问题，影响检查结果。制片过程中即检验中的室内质量控制只是室内质量控制的一部分, 检验前的质量控制即样品的接收、人员的培训、仪器设备的规范管理、培养基及其他试剂的质量控制也是很重要的，本实验主要研究了检验中的室内质量控制，检验中的室内质量控制除了受接种血量、培养温度、低渗时间以及离心速度以外，还受培养基的质量、固定液的质量以及染色的制作过程等因素影响。

接种血量和培养温度影响标本制片的淋巴细胞数量，血量多不一定淋巴细胞数量多，因为血量多必然导致需氧量增加, 如果不及时增加氧气，必然导致细胞增殖受阻，影响淋巴细胞的数量; 培养温度过高或过低都会影响到淋巴细胞增殖和代谢, 从而影响淋巴细胞的数量，所以说合适的温度、合适的接种血量才能保证标本制片中外周血淋巴细胞的数量。

低渗会使红细胞膜破裂，淋巴细胞膨胀; 低渗时间过长，淋巴细胞也会破裂, 使得核浆分离，成为裸核; 低渗不足则会导致胞浆厚，都可能使微核漏检; 低渗液的量、处理时间均与细胞的量有关（本次的细胞的接种血量都是23滴），这与王喜爱等^[3]报道一致。离心速度过高，细胞团不易打散或细胞破碎; 反之，细胞容易丢失。所以本实验过程中要保证适当的离心速度才能不至于把低渗好的淋巴细胞离心碎，或导致核桨分离，成为裸核或丢失过度的淋巴细胞。

为了保证培养基的质量，每次做微核培养之前应该拿出同一批号的培养基进行无菌培养预实验，如发现培养基无故变浑浊、变黄，说明该批培养基存在污染, 不能用微核标本培养制备。

综上所述，外周血淋巴细胞微核标本制片不仅要做好检验前的质量控制，而且还要做好检验中的质量控制，本文研究微核制片检验中的室内质量控制的影响因素有接种血量、培养温度、低渗时间以及离心速度等, 相关实验室予以关注，以确保其制备质量，提高微核检出准确率和读片效率，及时准确反映辐射损伤情况，对辐射防护作出正确的评价，对放射工作人员健康进行监护，对突发应急事件估算剂量、意外照射提供可靠依据。