银耳俗称白木耳(Tremella Fuciformis Berk)在植物分类上属多隔担子菌亚纲银耳科,是一种高等真菌植物。祖国医学认为银耳性味甘淡平,具有滋阴润肺、养胃生津、益气和血等功效[1],为珍贵滋养品,还可适用于高血压及血管硬化等症[2]。深层发酵银耳孢子提取粗多糖对于增加机体免疫功能、促进造血、升高白细胞、抗肿瘤以及提高照射动物的存活率效果显著[3-5]。
以往我们对深层发酵培养的银耳孢子提取多糖用于放射损伤防护方面做了大量的研究工作。但由于银耳孢子较大,所含多糖成分复杂,并非均一体多糖,所含糖类成分为杂多糖[6, 7],用于局部注射吸收困难,也不容易制备成注射液。为此,我们粉碎了银耳孢子,进一步提取分离了多糖组分。本文进行其中的银耳碱提取孢糖组分A-BTF[8]对137Cs γ射线照射诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变率和骨髓多染红细胞微核率影响的研究。
1 材料和方法实验动物: LACA小鼠,6 ~ 8周龄,(20 ± 2) g,由卫生部药品及生物制品检定所提供,用做染色体畸变试验; ICR/JCL小鼠,6 ~ 8周龄,(20 ± 2) g,由天津计划生育研究所提供,用做微核率试验。药物来源:银耳孢糖A-BTF组分由本所药物室通过碱提取法分离制备的均一体多糖[8],经测定分子量为67,000。仪器及试剂:秋水仙素,Gimsa染料,均为SIGMA公司产品; Olympus电子显微镜; 137Cs γ射线辐照仪,加拿大原子能有限公司。
1.1 实验分组骨髓染色体畸变实验:对照组腹腔注射生理盐水0.4 ml/只,实验组腹腔注射A-BTF 34 mg/0.4 ml/只,24 h后均给予3.0 Gy γ射线,剂量率为1.23 Gy/min。骨髓多染红细胞微核实验:对照组腹腔注射生理盐水0.4 ml/只,实验组腹腔注射A - BTF 34 mg/0.4 ml/只,24 h后均给予7.5 Gy γ射线,剂量率为1.23 Gy/min。照射时将小鼠放入特制圆形塑料盒内(35 cm × 10 cm)自由活动。
1.2 小鼠骨髓染色体标本的制备照后20 h,腹腔注射秋水仙素(1 μg/g),4 h后颈椎脱臼处死,取双侧股骨,用生理盐水冲出骨髓至白色,离心,0.075 mol KCl低渗、甲醇:水(3 : 1)固定、冷水制片、Gimsa Wright染色、阅片。每只动物观察100个骨髓细胞中期有丝分裂相,油镜下观察末端缺失、微小体、环形染色体、易位染色体断裂数细胞(按蔡金二氏标准)。
1.3 小鼠骨髓多染红细胞微核标本的制备照射24 h后将小鼠处死,取一侧股骨,用1 mL注射器空气冲出骨髓,与事先滴好的小牛血清的玻片上混匀推片,迅速干燥,Gimsa Wright染色,油镜下观察计数2 000个骨髓多染红细胞的微核数。
1.4 统计方法用SPSS软件进行统计,组间比较采用t检验。
2 结果 2.1 小鼠骨髓细胞染色体畸变分析由表 1可见,实验组骨髓细胞染色体畸变率比对照组低28%。实验组的染色体断裂数均值较对照组低53%,差异有统计学意义(P < 0.01)。
由表 2可见银耳组分A-BTF防护组的微核率为11.3%,而对照组为30.3%,差异有统计学意义(P < 0.01)。
已知造血系统是电离辐射敏感的主要靶器官之一,辐射导致的造血机能的损伤,主要体现在对骨髓细胞的破坏[11]。辐射损伤会导致骨髓细胞染色体畸变的发生及骨髓红细胞微核率的升高,因此预先给予受照小鼠适当的药物进行防护,通过此两指标的改变,可以揭示受试药物对辐射损伤的防护作用。
本文研究银耳孢糖组分A-BTF对γ射线照射小鼠骨髓细胞染色体畸变及骨髓红细胞微核率的影响。已有大量资料证实,辐射及化学药物能诱导人体和动物骨髓细胞染色体畸变和骨髓红细胞微核率的增多[10]。染色体是细胞遗传物质的载体,在细胞的生命活动中起着极其重要作用。造血系统在放射病的发病中又占有十分重要的地位。因此,研究银耳组分对照射小鼠骨髓细胞染色体畸变和骨髓多染红细胞微核的防护作用,对评估该药物的防护效果和探讨防护机理具有重要意义。
上述实验结果表明,银耳孢糖组分A-BTF对γ辐射损伤小鼠骨髓细胞染色体畸变、骨髓嗜多染红细胞微核有显著的防护作用,对于银耳孢糖组分的抗辐射损伤作用的机制有待进一步深入研究。
[1] |
江苏新医学院. 中药大辞典(上)[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1992: 698.
|
[2] |
孙溥泉, 邱忠堂, 孙济发. 常见药用食物[M]. 西安: 陕西人民出版社, 1979: 18-20.
|
[3] |
徐华丽, 于晓风, 曲绍春, 等. 银耳孢糖对白细胞减少小鼠的升白细胞作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2008, 24(5): 759-762. |
[4] |
王艳, 孙梅花, 李小琴. 银耳孢糖肠溶胶囊治疗干扰素所致白细胞减少症的临床观察[J]. 河北医药, 2011, 33(3): 411. |
[5] |
马恩龙, 李艳春, 伍佳, 等. 银耳孢糖的抗肿瘤作用[J]. 沈阳药科大学学报, 2007, 24(7): 426-428. DOI:10.3969/j.issn.1006-2858.2007.07.010 |
[6] |
杨世海, 尹春梅, 缪双红. 银耳多糖及其药理作用的研究进展[J]. 中草药, 1993, 24(3): 153-157. DOI:10.3321/j.issn:0253-2670.1993.03.008 |
[7] |
徐文清, 高文远, 王雪姣. 银耳孢子多糖TFA结构的研究[J]. 中草药, 2008, 39(8): 1140-1142. |
[8] |
徐文清, 王雪姣, 黄洁, 等. 银耳碱提孢子多糖A—BTF的分离与结构研究[J]. 天然产物研究与开发, 2007, 19: 1055-1058. DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2007.06.034 |
[9] |
徐文清, 沈秀, 周则卫, 等. 银耳多糖对放射和化学损伤小鼠造血功能的保护作用[J]. 中草药, 2006, 37(7): 1057-1058. DOI:10.3321/j.issn:0253-2670.2006.07.040 |
[10] |
刘永琦, 达瑞, 窦娟娟, 等. 氯化镉对小鼠骨髓间充质干细胞微核率和染色体畸变率的影响[J]. 中国组织工程研究, 2012, 16(41): 7612-7616. |
[11] |
王月英, 吴红英, 李德冠, 等. 不同剂量137 Cs γ –射线照射对小鼠造血系统的影响[J]. 国际放射医学核医学杂志, 2013, 37(1): 1-4. DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-4114.2013.01.001 |