恶性肿瘤是严重危害公众健康的常见病和多发病, 是人类最难对付的顽症之一。随着现代肿瘤免疫理论的发展, 人们致力于研究开发具有抗肿瘤作用, 同时又能调节机体免疫力, 增强机体自身抗肿瘤功能具有双重功效的药物, 是当今科学工作者研究的热门领域, 也是增敏剂的发展方向之一。E838是一种新型辐射防护剂, 我们在以往进行的药效学实验已证实: E838具有放射防护效价高^[1]、毒副作用小的特点, 它能提高机体的防御能力, 能显著提高受照射小鼠30d存活率和保护指数^[2], 对小鼠宫颈癌等有明显抑制作用。为进一步扩大瘤谱, 应用IRM - 2小鼠作为肿瘤模型, 对LA795肿瘤细胞的抑瘤效果及合用¹³⁷Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用进行探讨。

1 材料和方法 1.1 动物及瘤株

LA795肺腺癌细胞株由天津市药品检验所提供。IRM - 2小鼠是我所自己培育的近交系小鼠, 雌雄各半, 体重为22 ~ 23g。饲料为清洁级全价鼠料, 由北京科奥协力饲料有限公司提供。

1.2 试剂

用注射茶油将E838配制成5m g/kg、7. 5mg/kg、10mg/kg三个不同剂量组。环磷酰胺(CTX)为上海华联制药剂量组有限公司产品, 批号040805, 用生理盐水配制成25mg/kg剂量组。

1.3 照射

本所¹³⁷Cs γ源(加拿大产, CAMMA-CELL40), 照射剂量为1Gy, 剂量率为0.84Gy /min。

1.4 荷瘤鼠模型的制备

LA795肿瘤组织用生理盐水稀释约3.5×10⁷/ml瘤细胞。取细胞悬液0. 2ml/只接种于小鼠腋部皮下, 24h后将荷瘤小鼠随机分为10组, 每组10只, 实验设对照组、单放组、E₈₃₈低、中、高药物治疗组、药物+照射组、阳性对照(CTX)组。药物组、药物+照射组ip给药, 每天1次, 0. 2ml/只, 连续给药7d, 对照组注射茶油, CTX隔日1次×4, 药物+照射组于给药的第4d进行全身1Gy照射, 每日一次, 连续5d。隔日观察各组动物的肿瘤体积, 用游标卡尺测量肿瘤长径a和短径b, 根据公式V =ab²/2(a-长径, b-短径)计算体积^[3]。并绘制肿瘤生长变化曲线,

1.5 检测指标

末次给药第3天处死动物, 称体质量, 解剖瘤块、胸腺、脾脏称质量, 计算抑瘤率、胸腺及脾脏指数, 并测定股骨有核细胞数。抑瘤率% =(对照组平均瘤质量一治疗组平均瘤质量) /对照组平均瘤质量×100%;脏器指数=免疫器官质量/体质量×1 000。

1.6 数据处理

数据统计结果用x±SD表示, 两组比较用t检验。

2 结果 2.1 肿瘤生长曲线

结果见图 1, E838三个剂量组小鼠肿瘤体积明显均低于对照组。

2.2 E838合并照射后各组肿瘤生长曲线

见图 2, 从图中可以看出经过E838合并放疗后, 各组肿瘤生长均慢于对照组、放疗组。相对生长速率也减慢。

2.3 E838对LA 795肿瘤细胞的生长抑制作用

结果见表 1, 不同剂量的E838对肺腺癌细胞显示不同程度的抑制作用, 低、中、高剂量组对肿瘤的抑瘤率分别为42. 73%、70. 91%和64. 09%, 与对照组比较差异有显著性(P < 0. 05)。环磷酰胺组抑瘤率为67. 73 %。

2.4 E838合用γ射线对LA795肿瘤细胞的生长抑制作用

结果见表 2, E838低、中、高剂量组对肿瘤的抑瘤率分别为63. 63%、75. 00%和68. 64%, 与对照组差异有显著性(P < 0. 05), 7. 5m g /kg和10mg /kg剂量组与单照组比较经统计学处理差异有显著性(P < 0. 05)。E838合用γ射线比单放组和单纯药物组的抑瘤效果更好。

2.5 E₈₃₈对LA 795荷瘤小鼠免疫器官指数及BM NC的影响结果见表 3

E838三个不同浓度组小鼠的脾重指数高于对照组, 但无显著性差异。骨髓有核细胞的数量均高于对照组, 其中7. 5、10 m g /kg剂量组于对照组比较差异有显著性意义(P < 0. 001)。胸腺指数高于对照组且差异有显著性意义(P < 0. 001)。胸腺指数高于CTX阳性对照组, 差异有显著性意义(P < 0. 01)。

2.6 E₈₃₈ +γ射线对LA 795荷瘤小鼠免疫器官指数及BMNC的影响

结果见表 4, E₈₃₈三个不同浓度组小鼠的胸腺指数、脾重指数及骨髓有核细胞的数量与单照组比较有所提高, 但差异无显著性。只有高剂量+γ射线剂量组的脾重指数与单照组比较差异有显著性意义(P < 0. 001)。

3 讨论

放疗是肿瘤治疗中一项重要的手段, 但其对机体正常组织、特别是造血系统的损伤限制了实际应用价值。尽量减轻射线对造血细胞的损伤和加快造血损伤后的恢复是放射性造血损伤防治药物研究的两个重要方面。国内外学者经过多年的研究已筛选出一些辐射防护剂, 雌激素是研究较多的一类辐射防护剂。早在1943年就有学者发现雌激素不仅可延长放射损伤小鼠的生存天数, 还具有“升白”作用, 但由于对人体毒副作用大、特别是对生殖系统的雌活性大大制约了其在临床上的应用^[4]。E838药物在具有辐射防护作用的同时(毒副作用又小), 又具有抑瘤及增效作用。从实验结果可以看出, 经E838治疗后, 三个不同浓度组小鼠的肿瘤生长速度均慢于对照组, 其瘤体截面积大小, 每组个体间差异较小, 瘤重明显小于对照组, 抑瘤率最高可达到70. 91%, 三个药物剂量组的抑瘤率经统计学处理与对照组比较差异有显著性(P < 0. 05), 表明E838能抑制IRM - 2小鼠移植的LA795肺腺癌细胞株的增殖。机体的免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切关系。机体的免疫功能状态是影响肿瘤治疗转归的重要因素, 由于胸腺是中枢淋巴器官, 为T细胞分化成熟的场所.是机体抗肿瘤免疫的核心力量, 本试验中E838可提高免疫器官脾和胸腺的质量及骨髓有核细胞的数量, 胸腺指数高于对照组, 与对照组比较差异有显著性(P < 0. 001)。胸腺指数和骨髓有核细胞的数量也高于环磷酰胺, 说明E838有保护和恢复机体免疫功能的作用。E838除了具有良好的抑瘤效果外, 合并放疗对LA 795肿瘤细胞的抑瘤效果更好, E838各组的肿瘤生长均慢于对照组、单放组和E838单药组。抑瘤率最高可达到75. 00%, 与对照组比较差异有显著性(P < 0. 05), 7. 5mg /kg、10m g /kg两个剂量组与单照组比较差异有显著性(P < 0. 05), 说明E838合并适当剂量的照射可增强其对肿瘤的抑制作用。E838和辐射主要作用于细胞周期的G 2M期, 使细胞有丝分裂受到抑制^[5]。随着对E838研究的不断深入, 新药理作用的发现, 尤其是体内抗肿瘤作用、免疫调节作用机制的进一步明确, 并能在肿瘤放疗中增加其疗效, 有可能成为具有开发潜力的抗肿瘤药物。