中国辐射卫生  2007, Vol. 16 Issue (2): 140-141  DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2007.02.005

引用本文 

沈秀, 周则卫, 王映兰, 王文, 洪阁. 近交系KM-HL鼠白细胞减少症模型的建立[J]. 中国辐射卫生, 2007, 16(2): 140-141. DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2007.02.005.
SHEN Xiu, ZHOU Ze-wei, WANG Yin-lan, et al. The Establishment of Leucopenia Model on KM-HL Mice[J]. Chinese Journal of Radiological Health, 2007, 16(2): 140-141. DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2007.02.005.

基金项目

天津市科技发展计划项目05YFGPGX07200

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收稿日期：2007-01-28
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近交系KM-HL鼠白细胞减少症模型的建立
沈秀 , 周则卫 , 王映兰 , 王文 , 洪阁     
中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所 天津 300192
收稿日期：2007-01-28
基金项目：天津市科技发展计划项目05YFGPGX07200
作者简介：沈秀(1960~), 女, 副研究员。研究方向:辐射生物学、抗肿瘤药物和实验动物学.
摘要：目的 为昆明-无毛鼠(KM-HL)作为白细胞减少症模型实验用鼠提供理论依据。方法 分别对KM-HL鼠①用环磷酰胺(Cy); ②用137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy, 剂量率为:0.80645Cy/min致小鼠白细胞减少症, 取样对其血液、造血系统、免疫及心脏、肝脏等生理指标的变化情况进行测试研究。结果 研究表明正常KM-HL在白细胞减少症的实验中, WBC、DNA、脾脏、胸腺、心脏等一些生理指标与对照组比较都受损较重(P < 0.001), 但Cy组的肝脏与对照比受损较轻, 无统计学意义。结论 KM-HL鼠无论用Cy还是用137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy, 其血液、造血系统、免疫及心脏、肝脏等生理指标与对照组比都有所下降(P < 0.001), 可做为白细胞减少症的实验用鼠。
关键词：KM-HL鼠    造血系统    免疫指标    WBC    Cy    
The Establishment of Leucopenia Model on KM-HL Mice
SHEN Xiu , ZHOU Ze-wei , WANG Yin-lan , et al     
Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Tianjin 300192 China
Abstract: Objective To provide theoretical foundations for KM-HL mice used as experimental mice on leucopenia model. Methods Cyclophosphamide and 137Cs source γ rays irradiated at 7.5Gy once the whole body (dose rate:0.80645Gy/min) were given on KM-HL mice to induce mice leucopenia model, samples were obtained to examine the variation of physiological indexes such as blood, hematopoietic system, immunity, heart and liver etc. Results The research shows, in normal KM-HL mice in the leucopenia experiment, some of the physiological indexes of WBC, DNA, spleen, thymus, heart shows that they are deeply injured (P < 0.001), only the Cyclophospamide group's liver is lightly injured, without any statistic difference. Conclusion Either giving cyclophosphamide or 137Cs source γ rays irradiating once all over the body, the physiological indexes such as blood, hematopoietic system, immunity, heart and liver etc of KM-HL mice are descended, compared with the control group (P < 0.001), therefore it can be used as experimental mice on leucopenia.
Key words: KM-HL Mice    Hematopoietic System    Immunity    White Blood Cell    Cyclophosphamide    

实验动物科学现在已经成为现代科学技术不可分割的一个组成部分, 是生命科学的基础和条件。随着现代科学的进步, 人类更需要有特色的新品系鼠群进行科学研究, 无毛鼠就属于此类。昆明-无毛鼠(KM-HL)是本所动物室自己繁殖培养的近交系小鼠, 是在昆明鼠饲养过程中发现并培育了24代的无毛小鼠[1], 该鼠有胸腺且可在普通环境中生长, 其各项生理指标比KM、ICR等封闭群鼠系稳定, 因此以其作为实验用鼠, 研究结果更具科学性。

1 材料与方法 1.1 材料

KM-HL鼠是本所动物室提供, 环磷酰胺(Cy)(江苏恒瑞医药股份有限公司, 批号:05121421);137Cs源-γ射线为本所钴源。T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司), OLYMPUS电子显微镜和1/1000电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司); 冰醋酸, 氯化钙, 高氯酸等试剂。

1.2 方法 1.2.1 环磷酰胺(Cy)致白细胞减少症[2]

取KM -HL小鼠14只, 雌雄各半, 体重20 -24g, 随机分为2组, 对照组和给药组, 7只/组, 对照组腹腔注射生理盐水, 每日一次连续4d, 按小鼠体重每10g给0.1ml注射; 白细胞降低剂:环磷酰胺(Cy), Cy浓度为100mg/kg, 每日一次连续4d给药, 按小鼠体重每10g给0.1ml腹腔注射, 第5d取各项生理指标测定。

1.2.2 辐照致白细胞减少症

取KM -HL小鼠20只, 雌雄各半, 体重25 ~ 26g, 随机分为2组, 对照组和照射组, 10只/组, 对照组不照射, 照射组将小鼠放在周围有孔的照射盒中, 采用137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy, 剂量率为:0.80645Cy/ min, 照射后饲养6d, 第7天取各项生理指标测定。

1.2.3 白细胞(white blood cell, WBC)

① 给环磷酰胺后, 第5天眼眶取血; ②采用137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy后, 第7天眼眶取血。分别取20ul/鼠, 用白细胞稀释液稀释后, 电子显微镜下计数WBC数。

1.2.4 生理指标

① 给环磷酰胺(Cy)后, 第5天称体重; 然后将小鼠脱臼处死取心脏、肝脏、脾脏、胸腺称重。②137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy后, 第7天称体重, 然后将小鼠脱臼处死取肝脏、脾脏、胸腺称重, 用Bouin氏液固定脾并计数脾结节数。以上的脾和胸腺可按下式计算脾指数和胸腺指数。

脾指数=脾重(mg)/鼠重(g)

胸腺指数=胸腺重(mg)/鼠重(g)

1.2.5 骨髓DNA含量

① 给环磷酰胺(Cy)后, 第5天将小鼠颈部脱臼处死, 取一侧股骨, 用0.005mol/LCaCl2将骨髓全部冲入离心管中, 离心沉淀蛋白质, 加0.2mol/LHClO4溶解, 加热、过滤, 滤液在紫外可见分光光度计268nm处测定吸光度(OD值), 骨髓DNA含量用吸光度(A)/只(股骨)表示。②用137Cs源-射γ线全身一次性照射7.5Gy饲养6d后, 第7天取一侧股骨测骨髓DNA含量, 取样和测量方法同上。

1.2.6 计数脾结节

用137Cs源-γ射线全身一次性照射后, 取出脾称重然后用Bouin氏液固定6h后计数脾结节数。

2 结果

KM-HL鼠腹腔注射环磷酰胺后, 其白细胞、骨髓DNA含量、脾脏、胸腺、体重、心脏等都受损较重(P < 0.001), 脾脏、胸腺用脾指数(mg/g)和胸腺指数(mg/g)来表示, 肝脏虽然受损较轻但与对照组比也有所下降, 见表 1, 2。

表 1 KM-HL鼠注射Cy后血液及造血系统受损情况表

表 2 KM-HL鼠注射Gy后免疫指标下降及其他指标受损表

KM-HL鼠采用137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy后, 其白细胞、骨髓DNA含量、脾脏、胸腺、体重、肝脏等都受损较重(P < 0.001), 脾脏、胸腺用脾指数(mg/g)和胸腺指数(mg/g)来表示。照射后脾结节数与对照比有所增加, 但差异无显著性, 见表 3, 4, 5。

表 3 KM-HL鼠照射后的血液和体重受损表

表 4 KM-HL鼠照射后造血系统受损情况表

表 5 KM-HL鼠照射后免疫指标下降及肝重受损表

统计方法:数据用x±s表示, 组间比较采用t检验。

3 结论

① 在白细胞减少症模型实验中, KM-HL鼠注射Cy后, 血液和造血系统的WBC、骨髓DNA含量、脾脏和对照比都受损较重(P < 0.001);免疫指标胸腺及体重、心脏等和对照比也都受损较重(P < 0.001), 只有肝脏与对照比受损较轻, 无统计学意义; ②KM-HL鼠受137Cs源-γ射线全身一次性照射7.5Gy后, 血液、造血系统的WBC、骨髓DNA含量、脾脏和对照比都受损较重(P < 0.001);造血系统的脾结节有所增加但无统计学意义; 免疫指标胸腺及体重、肝脏等和对照比也都受损较重(P < 0.001)。由此实验结果得出该鼠可做为白细胞减少症的实验用鼠, 用环磷酰胺或辐射照射两种方法都可行。

4 讨论

在很多领域的科学研究中, 实验动物充当着非常重要的安全试验、效果试验、标准试验的角色。在生命科学领域内一切研究课题的确立, 成果水平的高低, 都决定于实验动物的质量, 因此有特色的实验动物尤为重要。KM-HL鼠出生时具有胸腺, 是可在普通的二级动物设施环境下生长[3]的新品系, 此鼠不同于裸体小鼠(OutbredNudeMice), 裸鼠无胸腺, 抵抗力差, 饲养条件比较严格, 繁殖成活率低, 成本高。而KM-HL鼠可以在普通环境下生长。KM -HL鼠还可以以多种方式接种S180、U14等肿瘤都能生长良好[2], 本项白细胞减少症的实验也获成功, 因此该鼠可作为白细胞减少症的实验用鼠; 还可做为一些肿瘤实验的实验用鼠, 该鼠的其他指标有待于继续深入研究。

参考文献
[1]
沈秀, 王映兰, 王月英, 等. IRM-2小鼠自发淋巴瘤、S180、、U14的宿主排斥性的比较研究[J]. 实验动物科学与管理, 2005, 22(3): 1-3. DOI:10.3969/j.issn.1006-6179.2005.03.001
[2]
中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编[Z].1993, 103 -105.
[3]
王映兰. 无毛小鼠繁育及其特性的初步观察[J]. 实验动物科学与管理, 2003, 20: 133-134. DOI:10.3969/j.issn.1006-6179.2003.z1.044