放射治疗是肿瘤治疗的主要方法之一, 特别对鼻咽癌病人的治疗多以放射治疗为主。随着肿瘤患者生存率不断提高, 对电离辐射所致生物学效应日益关注, 在肿瘤放射治疗中, 正常组织的损伤效应是决定肿瘤治疗剂量的重要因素。为了解正常组织的放射效应, 我们对12例鼻咽癌患者放疗前后进行了外周血淋巴细胞染色体畸变和微核率分析。

1 观察对象与方法 1.1 观察对象

12例鼻咽癌病人, 分别按常规射野方法和分割照射, 2 Gy/次, 1次/d, 每周连续照射5 d, 疗程7周。对照组选用未接触射线、化学毒物及未患感染性疾病的学生、工人和医务工作者62人。

1.2 观察方法

对观察对象分别在放疗前、放疗中期(照射3 ~4周, 肿瘤部位剂量30~40 Gy)、放疗终末(照射第7周末, 肿瘤部位剂量70 Gy), 各采血一次, 分析染色体畸变和微核率。

1.2.1 染色体分析方法

采用微量全血培养法, (37±0.5)℃培养48 h加秋水仙素, 继续培养8 h后常规制片, Giemsa染色, 油镜下观察分析200个分散良好的分裂中期细胞, 记录染色体畸变类型及数目。

1.2.2 微核率测定方法

采用微量血72 h培养法, 在镜下观察200个胞浆完整转化的淋巴细胞, 记录微核数。

2 结果 2.1 首次治疗前患者与对照组的染色体畸变分析与微核检测(表 1)

从表 1可看出, 12例鼻咽癌患者染色体型畸变率、染色体总畸变率、微核率均明显高于对照组平均值, 经统计学分析, 差异有非常显著性(P<0.01)。

2.2 放射治疗前后患者染色体畸变的比较(表 2)

从表 2可看出, 12例鼻咽癌患者在放疗后染色体型畸变、染色单体型畸变均有不同程度增高, 但染色体型畸变增高幅度较大, 放疗后染色体型畸变率是放疗前的8.77倍, 染色单体型畸变率是放疗前的2.32倍, 经统计学分析, 差异均有非常显著性(P<0.01)。

2.3 放射治疗前后患者微核率的比较(表 3)

表 3显示, 放疗后较放疗前微核率和微核细胞率均有显著增高, 放疗后微核率是放疗前的4.77倍, 微核细胞率是放疗前的4.97倍, 差异有非常显著性。

3 讨论

目前, 大量文献已证实肿瘤患者外周血淋巴细胞的染色体畸变率、微核率均明显高于正常人^{[1, 2]}, 我们这次观察的结果也符合这一结论。对于肿瘤患者的高染色体畸变率和高微核率现象, 多数研究人员认为其增高一是致癌因子对体细胞染色体的直接作用, 二是肿瘤病程演化的特征之一, 另外观察对象在确诊过程中接受放射诊断的剂量也会给染色体畸变率和微核率带来一定影响。

多数研究结果表明, 电离辐射无论对人类离体培养的淋巴细胞, 还是对活体直接照射, 均能使染色体畸变率增高, 且染色体畸变率的增高与累积剂量有一定关系, 据文献[3]报道, 对放疗后26例乳腺癌患者染色体畸变进行分析, 结果显示染色体畸变率与累积剂量呈线性关系, 而且随放疗后时间的延长, 非稳定性染色体畸变显著减少, 稳定性染色体畸变较恒定。本次观察也显示鼻咽癌患者放疗后染色体型畸变和染色单体型畸变均增高, 但染色体型畸变增高幅度较大, 且以双着丝粒体和断片等二次击中畸变为主, 这是射线对淋巴细胞染色体直接损伤的结果。

微核法作为一种快速简便的染色体损伤检测法正被越来越多的采用。我们观察这12例鼻咽癌患者微核率与微核细胞率放疗后均较放疗前明显增高, 且随累积剂量增加而增高。Evans提出的微核形成的无着丝粒断片学说认为, 放射后大多数染色体畸变伴有无着丝粒断片的产生, 在有丝分裂后期, 这些断片由于没有着丝粒, 不受纺锤体牵引, 不能进入子细胞核, 而以微核的形式出现在细胞浆中, 它反映了射线致染色体畸变的频率。因此, 微核的状况是放射损伤诊断以及机体修复能力的一个重要观察指标。大量实验证明微核的形成与放射剂量密切相关, 在一定放射剂量范围内, 微核率随放射剂量累积而上升^[4]。微核作为放疗敏感性和预测肿瘤放疗后转归的指针正在积极探索中。