2. 白求恩医科大学预防医学院, 吉林 长春 130021
近年来, 人们发现了众多的辐射防护剂, 其中大多为化学合成药物, 但由于其在有效剂量上毒性较大, 故实用价值有限。因此迫使人们寻求和探索天然植物中具有辐射防护作用的有效成分。黄蘑是真菌的一种, 其学名根据子实层上有无囊状体称为侧耳(Pleurotus ostreatus)和亚侧耳(Hohenbuehelia serotina), 俗称元蘑或黄蘑, 具有疏风活络、强筋壮骨的效用。有关它的药理作用方面的研究在国内外仅见少量报道。研究表明, 黄蘑多糖(Polysaccharides of Huangmo)具有明显的抗肿瘤作用[1], 但有关黄蘑多糖辐射防护作用的研究尚未见国内外文献报道。因此, 本研究旨在观察黄蘑多糖的辐射防护作用, 并进一步探讨其对受照小鼠肝组织中脂质过氧化物(LPO)和抗氧化酶类的影响。
1 材料与方法 1.1 实验动物分组及给药方法雄性昆明系小鼠(由本校实验动物部提供), 体重(20±2)g, 6~ 8周龄。按体重随机分成4组:正常对照组(NC)、单纯照射组(SI)、黄蘑多糖+照射组(H+I)及人参多糖+照射组(G+I)。照射前连续7 d给药, H+I组每天一次腹腔注射黄蘑多糖(由本校无机化学教研室曹瑞敏教授惠赠)5 μg/g·wt, G+I组每天腹腔注射人参多糖20 μg/g·wt, NC组与SI组给予等体积生理盐水。第8天除NC组外各组小鼠均接受X射线照射。照射后72h断头处死小鼠。
1.2 照射条件采用Philips深部X射线治疗机进行单次全身照射, 电压200 kV, 电流10 mA, 滤板0.5 mmCu +1.0 mmA1, 照射源距靶中心垂直距离50 cm, 剂量率0.288 Gy/min。
1.3 30 d存活率及保护指数测定 1.4 10%肝匀浆液的制备断头处死小鼠后取出肝脏, 并用滤纸拭干残余血液后称重0.3 g, 加入2.7 ml pH7.5磷酸盐缓冲液, 在冰水中用匀浆器进行研磨, 离心, 3000 r/min, 10 min, 4℃, 取上清液加到Ependoff管中, 置-20℃冻存待测。按LOWRY法测定蛋白质含量。
1.5 LPO含量测定采用硫代巴比妥酸法[2]测定。
1.6 抗氧化酶类指标① 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定:采用Pyrogallol-NBT比色法[3]测定。②谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性测定:采用DTNB直接法[4]测定。③过氧化氢酶(CAT)活性测定:采用硼酸盐作底物滴定法[5]测定。
2 实验结果 2.1 黄蘑多糖对受照小鼠30 d存活率的影响小鼠接受8.0 Gy X射线照射后, 观察预防给予黄蘑多糖对小鼠30 d存活情况的影响, 并与人参多糖相比较。由表 1可见, H+I组能明显提高受8.0 Gy X射线照射小鼠30 d存活率(P < 0.05), 延长存活天数, 保护指数可达1.32, 与G+I组比较, 则无统计学差异。
经8.0 Gy X射线照射后72 h, 黄蘑多糖对小鼠肝组织中LPO含量的影响见表 2。由表 2可知, SI组LPO含量明显高于NC组(P < 0.01), 其含量增加了31.7%;而H+I组LPO含量不但与NC组无统计学差异, 而且与SI组相比明显降低(P < 0.01), 其含量减少了20.2%。
由表 3可见, 经8.0 Gy X射线照射后72 h, 小鼠肝脏组织中SOD、GSH -PX和CAT活性均明显低于NC组(P < 0.05和P < 0.01), 其中H+I组又均显著高于SI组(P < 0.05)。
观察照射后30 d动物存活率是快速检测药物防护效果的一项最直接最可靠的指标。因此, 本研究采用30 d存活率来观察黄蘑多糖对受致死剂量照射小鼠的影响, 并与有效的已知辐射防护药物人参多糖相比较。本实验结果表明, 黄蘑多糖可明显提高受致死剂量X射线照射小鼠30 d存活率, 延长其存活天数, 保护指数可达1.32, 同时发现黄蘑多糖的这种辐射防护效果可与人参多糖相比。结果提示, 从小鼠的整体水平上黄蘑多糖具有一定的辐射防护作用。
电离辐射能引起生物体内产生O2、·OH等自由基, 而LPO是自由基引发的脂质过氧化作用的最终产物, 其含量可直接反映机体受自由基氧化损伤的程度[6]。机体中参与并清除自由基与脂质过氧化反应的主要抗氧化酶类有SOD、GSH-PX和CAT等。其中, SOD可分解O2, 它与CAT结合, 清除自由基效果更佳; GSH-PX可使已生成的LPO转化为低活性物质; CAT可促进过氧化氢分解。因此, 观察LPO及这三种抗氧化酶的变化对探讨黄蘑多糖辐射防护作用机理具有十分重要意义。本实验结果表明, 经8.0 Gy X射线照射后72 h, 小鼠肝组织中LPO含量明显升高, 而SOD、GSH-PX和CAT活性显著下降; 预防给予黄蘑多糖后可明显降低LPO含量, 且使SOD、GSH-PX和CAT活性显著高于SI组。结果提示, 黄蘑多糖的辐射防护机理可能与促进自由基清除, 抑制或阻断自由基引发的脂质过氧化反应, 增强SOD、GSH-PX和CAT三种抗氧化酶活性, 以提高机体抗氧化能力有关。
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