肿瘤在临床治疗过程中, 放射治疗是常采用的手段之一。由于电离辐射对正常组织细胞的破坏和机体出现强烈的放疗反应使得放疗的临床应用受到限制。因此, 抗辐射损伤药物的研究在肿瘤综合性治疗中的作用日益突出。扶正活力合剂作为自由基清除剂能防止苯乙烯等多种石化工业的毒物所造成的职业危害, 但对由辐射引起的损伤有无防治作用尚少有报道。以往的工作证实, 宫颈癌放疗患者服用该合剂后血象下降缓慢[1], 淋巴细胞的损伤明显减轻[2], 但机制尚不清。我们从自由基代谢和对免疫器官保护作用的角度探讨了扶正活力合剂的抗辐射损伤机理。
1 材料和方法 1.1 材料动物 健康雄性昆明小鼠, 体重18~22g, 由卫生部兰州生物制品研究所动物室提供。
药品 扶正活力合剂由兰州医学院中草药研究所提供。
主要试剂 SOD(长沙生化制药厂）；邻苯三酚（成都化学试剂厂）；GSH(上海酵母厂）；DTNB(瑞士）；四乙氧基丙烷(美国sigma公司）。
1.2 方法 1.2.1 动物分组及辐射损伤模型的复制将60只动物随机分为3组, 每组20只, 即正常对照组、盐水辐照组和扶正活力合剂辐照组。同等条件词养, 后两组每天分别用生理盐水和扶正活力合剂灌胃, 每日一次, 每次每鼠0.2ml。用药7天, 第8天用60Coγ射线作一次性全身照射, 剂量为8.0Gy, 照射后1小时眼眶取血作血SOD、GSH-Px活性及MDA含量的测定。
1.2.2 抗氧化指标测定照射后1小时每组各取10只小鼠, 眼眶取血作如下测定。
1.2.2.1 SOD活力测定取动物全血1ml抗凝, 按丁克祥等[3]SOD快速测定法制成红细胞中SOD抽提液。在721型分光光度计上测定邻苯三酚自氧化速率及SOD活力, 计算SOD活力单位数。
1.2.2.2 GSH-Px活力测定取全血10μl, 按DTNB直接测定法[4]测定O、D值, 计算出各组GSH-Px活力单位数。
1.2.2.3 MDA含量测定取血清50μl, 按周翔的方法[5]处理后, 在930型荧光光度计上作荧光测定, 结果以脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)含量表示。
1.2.2.4 胸腺、脾脏指数测定辐照后24小时, 每组10只动物活杀, 取胸腺, 脾脏在扭力天平上称重, 结果分别以胸腺指数及脾脏指数表示。
1.2.2.5 30天存活率的观察16只小鼠随机分为两组, 不设正常对照组, 词养和用药方法同前, 第8天60Coγ射线一次性全身照射, 剂量为6.0Gy。照射后继续饲养30天, 观察存活率和存天数。
2 实验结果 2.1 对SOD活性的影响表 1为各组SOD活性的变化, 可见辐照后盐水组SOD活性显著降低, 与正常对照组相比P＜0.01, 扶正活力组下降不明显, 与正常对照组比无统计学意义(P＞0.05)。
|
表 1 扶正活力合剂对辐射损伤小鼠SOD活性的影响 |
辐照损伤使机体GSH-Px活性下降, 盐水组更甚。扶正活力合剂的服用可有效地改善这种状态, 辐照后下降程度明显轻于盐水组见表 2。
|
|
表 2 扶正活力合剂对辐照损伤小鼠GSH-Px活性的影响 |
MDA含量反映了体内脂质过氧化反应的水平。从表 3数据可见服用扶正活力合剂的动物在接受辐照后, MDA含量升高不明显, 与正常对照组相比无统计学差异, 而盐水组在辐照后血MDA水平显著高于其它两个组。
|
|
表 3 扶正活力合剂对辐照损伤小鼠血MDA的影响 |
两个接受射线照射的实验组动物胸腺、脾脏指数均低于正常对照组, 但结果亦显示辐照前服用扶正活力合剂可使免疫器官重量下降情况明显改善。指数明显高于盐水对照组(见表 4)。
|
|
表 4 扶正活力合剂对辐照损伤小鼠免疫器官指数的影响 |
比较两组实验组一次性全身辐照后30天存活率, 可见扶正活力合剂组显著高于盐水组, 结果如表 5所示。
|
|
表 5 受辐照小鼠30天存活率和平均存活天数的比较 |
电离辐射可引起自由基代谢紊乱已经为人们所熟知[6], 因放射线在使机体发生辐射损伤时产生内源性活性氧, 通过间接作用诱导生成脂质过氧化物, 极易损害脂质含量高的膜结构, 干扰细胞的正常功能。细胞损伤后释放的脂质过氧化物经分解还可产生醛类等有毒化合物, 经血液循环损伤其他脏器, 而脂质过氧化物的过氧键断裂后形成的自由基又导致上述反应反复进行, 加重辐射损伤。我们实验证实, 由于辐射损伤加速了体内脂质过氧化反应, 动物体内MDA含量大增, 后者有抑制抗氧化酶活性的作用[7], 表现为SOD和GSH-Px活性降低, 组织细胞损伤严重, 故盐水对照组30天存活率明显低于扶正活力合剂组。扶正活力合剂主要由女贞子、枸杞子、黄芪等组成, 实验显示其具有良好的抗氧化效应, 同等剂量射线照射而加服扶正活力合剂的小鼠, 外观皮毛滑顺, 活泼好动, 食欲较好测其血SOD和GSH-Px活性在辐照后有一定程度降低, 但仍接近正常对照组, 此抗氧化能力的增强, 清除了辐射过程中的脂质过氧化物, 抑制其分解产物对器官组织的损伤, 使机体对辐射防护能力增强, 表现为动物30天存活率的增加和平均存活天数的延长。
我们以往的工作初示, 机体免疫机能的好坏与自由基代谢有关[8], 本实验再次提示, 给小鼠服用自由基清除剂——扶正活力合剂, 使受60Coγ射线照射小鼠的血清中脂质过氧化物丙二醛含量明显降低, 说明其通过清除自由基, 保护细胞膜, 减轻射线对细胞的损害, 进而使组织得以保护, 因此动物受射线辐照后, 其辐射敏感组织胸腺、脾脏损伤较轻, 机能较好, 指数明显高于盐水辐照组。这与临床宫颈癌放疗患者服用扶正活力合剂后所表现的免疫保护作用[1, 2]相一致, 说明扶正活力合剂对辐射损伤机体的免疫调节效应与其抗自由基损伤作用有关。
实验为临床肿瘤放疗患者合理应用扶正活力合剂提供了科学依据。
| [1] |
伏雅琴, 等. 扶正活力片对晚期宫颈癌放疗患者外周血象保护作用的观察[J]. 兰州医学院学报, 1993, 3: 146. |
| [2] |
葛明珠, 等. 宫颈癌放疗患者淋巴细胞的观察[J]. 兰州医学院学报, 1994, 2: 149. |
| [3] |
丁克祥, 等. 超氧化物歧化酶的测定方法[J]. 老年学杂志, 1987, 2: 42. |
| [4] |
夏奕明, 等. 血和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力的测定方法[J]. 卫生研究, 1987, 11: 29. |
| [5] |
周祥, 等. 血清过氧化脂质的测定和意义[J]. 白求恩医科大学学报, 1987, 16(4): 353. |
| [6] |
穆运转, 等. 自由基清除剂的辐射防护作用[J]. 中华放射医学与防护杂志, 1990, 1(4): 280. |
| [7] |
许世凯, 等主编.衰老与抗衰老.中国科学技术出版社, 6~8.
|
| [8] |
刘听, 等. 硒抑制LIBP小鼠S180生长机制的实验研究[J]. 中华微生物学与免疫学杂志, 1992, 2(4): 237. |