环磷酸胺(Cy)是临床常用的化疗药物, 对多种肿瘤具有不同程度的抑制和杀灭作用。但和其他化疗药物一样, 具有副作用包括抑制骨髓, 使患者免疫功能变损。低剂量电离辐射主要通过提高机体免疫功能而起抗肿瘤作用^[1]。本实验利用环磷酞胺处理荷瘤小鼠后再接受75mGy X线全身照射, 研究其协同抗肿瘤作用。为低剂量电离辐射的临床应用作前景探讨。

1 材料与方法 1.1 动物与肿瘤细胞株来源

C57BL/6小鼠, 雌雄兼用, 6~8周龄, 18 ~20克本校实验动物中心提供。

Lewis肺癌(LLC), B₁₆黑色素瘤(B₁₆m), 购自中国科学院、上海药物研究所, 本室传代培养YAC-1, P₈₁₅细胞株购自上海细胞生物研究所。

1.2 低剂量X线与Cy协同杭肿瘤试脸

取C₅₇BL/6小鼠, 经眼球后静脉注射LLC线B₁₆m细胞1x10⁵个/ml/每只小鼠, 再随机分四组:A组为空白对照组; B组为单纯75mGy X线照射组(照射条件见^[1], 荷瘤24小时后照射一次), C组为单纯Cy(上海第十二制药厂。批号:930505)组:腹腔注射Cy 20mg/kg wt/次, 每周二次计二周; D组经Cy处理后(同C组)用75mGy X线全身照射一次。D组照射后48小时每组处死部分荷瘤鼠, 取脾细胞检测其细胞免疫功能, 荷瘤24天处死剩余鼠取肺用Bouins液固定, 计数肺转移结节。

1.3 荷瘤小鼠NK细胞活性检

无菌取出荷瘤小鼠脾脏制成脾细胞悬液, 用LDH释放法测NK细胞活性^[2], 其中效:靶为50: 1, 体外培养时间为4小时。

1.4 荷瘤小鼠LAK细胞活性的检测

分别取1×10⁷个细胞/ml浓度的脾细胞悬液3ml, 加入含rIL-2(长春生物制品所产品)的RPMI 1640至15ml, 使rIL-2终浓度为1000u/ml, 37℃, 5%CO₂条件下培养72小时, 制备LAK细胞, 无菌条件下取出LAK细胞用LDH释放法检测LAK细胞对P₈₁₅细胞的杀伤能力, 其效:靶为50:1, 体外培养4小时。

1.5 T沐巴细胞时Con A激转化率及对AIL-2反应性检测

用³H-TdR法, 详见参考文献^{[3, 4]}。

2 结果 2.1 低剂童电离辐射及Cy对肿瘤转移的影响

表 1可见, 单纯照射及Cy对LLC, B₁₆M实验性肺转移均有明显抑制作用, 但两者联合使用抗转移效果更好, 表现在肺转移结节数目明显减少。(P < 0.05)

2.2 低剂量电离辐射及Cy对荷瘤小鼠NK细胞及LAK细胞活性影响

如表 2所示，Cy可使荷瘤小鼠免疫功能明显降低，而低剂量X线可适当提高荷瘤鼠免疫功能，使应用Cy后降低的NK细胞及LAK细胞活性得以提高。

2.3 低荆量X线及Cy对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化率，及对IL—2反应性的影响

由表 3提示，75mGyX线全身照射经Cy处理后的荷瘤小鼠，可使其降低的T淋巴细胞转化率和对IL-2的反应性明显提高。

3 讨论

肿瘤转移是临床肿瘤学面临的一大难题，也是导致患者死亡的重要原因之一。外科治疗可能因不能彻底清除原发部位以外的瘤细胞而失败；化学药物及大剂量放射线治疗虽然能杀灭肿瘤细胞，但也对患者自身造成损伤，尤其是损伤免疫系统有可能导致原发瘤发生转移。目前，多数学者均在寻找更有效的治疗措施。本研究小组已经证实低剂量x线可以通过提高荷瘤小鼠细胞免疫功能而起抗肿瘤生长和转移的作用^[1]。但对低剂量X线与临床常用化疗药物联合用于抗肿瘤转移，国内外均未见报道。本实验发现:75mGyX线单次全身照射及Cy分别对B₁₆M，LLC实验性肺转移有不同程度的抑制作用，两者联合应用效果更明显。

Cy是烷化剂类广谱抗肿瘤药物。进人体内经肝脏代谢后主要影响细胞DNA而起抗肿瘤作用，也有免疫抑制效果^[5]。给荷瘤小鼠腹腔注射Cy后，对肿瘤血道转移有抑制作用，同时对荷瘤小鼠的NK细胞活性，LAK细胞活性及T细胞转化功能均有不同程度的抑制。实验中观察到单纯Cy处理组Cy组的肿瘤转移结节较单纯75mGyX线组(B组)多，但统计结果显示，B、C两组的转移结节无显著性差异，此可能与动物样本少及荷瘤时间短有关。

研究发现, 低剂量75mGyX线与Cy联合应用使LLC、B_l6M实验性肺转移结节明显减少, 较B、C组抗肿瘤效果更明显, 揭示这两种因素抗肿瘤的机制不同, 联合应用有协同作用, 实验结果还显示, 75mGyX线全身单照经cy处理二周的荷瘤鼠, 不仅缓解了Cy对其的免疫抑制作用, 还使荷瘤鼠免疫功能得以增强使肿瘤转移不容易发生。

肿瘤化疗药物很多, 对肿瘤及机体影响也不尽相同; 低剂量X线与其他治疗措施或其他药物有无协同作用还待进一步研究。另外, 临床也有采用生物治疗来提高患者免疫功能的措施, 但价格昂贵, 我室将进一步对低剂量X线抗肿瘤作深入探讨, 为早日将价廉的小剂量X线应用于肿瘤治疗提供理论依据。

4 小结 4.1  

75mGyX线全身单次照射与Cy对小鼠肿瘤的实验性肺转移有协同抑制作用。

4.2  

这种抑制作用可能是通过75mGyX线提高荷瘤小鼠免疫功能来实现的。