淋巴细胞是特异性免疫反应的主要细胞, 根据细胞膜标志及功能, 可分为T细胞、B细胞。T细胞是由前淋巴细胞进入胸腺内受胸腺激素作用分化而成, 具有直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体, 介导移植排斥反应等多种功能。T细胞在血液中占淋巴细胞的70~80%, 其含量的多少及功能是否健全代表着机体细胞免疫水本。本文所用α-醋酸荼酯酶染色方法(ANAE)测定受辐照小鼠外周血淋巴细胞的变化, 报道如下。

1 材料与方法 1.1 动物

昆明种雄性小鼠80只, 体重18~22克, 由山东省实验动物中心提供。

1.2 实验动物模型建立

辐照组小鼠40只, 用山东省农科院原子能所的⁶⁰Coγ源照射小鼠, 活度1.66×10¹³ Bq, 源皮距50cm, 剂量率23.02cGy/min, 总照射剂量8 Gy。

1.3 方法与染色步骤

辐照组小鼠与非辐照组小鼠在同一环境中喂养, 不作任何处理, 辐照后第10天取血涂片、染色。ANAE染色方法按《放射医学检验检测手册》^[3]。

2 结果与分析

本文用ANAE染色方法, 观察68只小鼠外周血α-醋酸荼酯酶活性, 其结果见附表, 辐照组小鼠外周血α-醋酸荼酯酶活性明显低于非辐照组小鼠, 经统计学处理, 两组有非常显著性差异(P < 0.01)。

从上述两组结果明显看出受辐照小鼠淋巴细胞内α-醋酸荼酯酶活性下降, 因为小鼠受到辐照后, 其机体及大量的细胞受到一定的损伤, 有些细胞甚至死亡, 同时又因各个系统各个阶段的细胞对辐射的敏感性耐受性不同, 故受损伤破坏的程度也不相同。本实验是在小鼠受辐照后第10天取血做ANAE染色的, 所以受照射小鼠淋巴细胞内的α-醋酸荼酯酶活性还没有降到最低水平, 也就是小鼠受辐照后第10天其α-醋酸荼酯酶仍具有(或已恢复)一定的活性。

自Mueller 1975年首先发现α-醋酸荼酯酶以来, 测定ANAE活性的这织织化学染色方法, 已作为鉴定小鼠与人T细胞的一种方法, 它之所以能够特异性的标记T细胞, 是因为T细胞质内有α-醋酸荼酯酶, 它能将孵育液内-α醋酸荼酯水解, 产生α荼酚和醋酸离子, 然后α荼酚与孵育液内的偶氮付品红偶联, 在细胞浆中酯酶存在的部位生成不溶性的棕红色沉淀物。以观察淋巴细胞胞浆内棕红色颗粒所占百分数来评价人或小鼠的细胞免疫水平。

这种方法从血片观察受辐照后淋巴细胞内α-醋酸荼酯酶活性, 操作简便快速, 重复性好, 特异性强, 不需要特殊的条件和设备, 是观察受辐照后T细胞变化较为理想的方法。