自Countryman和Heddle[1]发表了检查人琳巴细胞微核的方法以来,已广泛用于放射损伤评价和诊断、人群放射敏感性检测、放射工作者的健康普查以及评价辐射防护剂和增敏剂的作用、检测放疗后肿瘤反应及预后等。本实验室继1980年报道[2]中子、Y射线照射离体人血诱发淋巴细胞微核出现率与剂量之间的关系之后,现将X线照射人血诱发微核出现率与剂量的关系报道如下:
一 材料与方法 (一) 血祥与照射条件取1名健康成人肝素抗凝的静脉血30 m1,在无菌条件下,分别装入6个园塑料盒中(φ4.5cm,深2cm),每盒装3m1全血,分成10个剂量组,即0、0.05、0.15、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和6.0Gy。血样保持在37℃士1 C恒温中,用PYM- 3 M深部X线机(苏)照射,IQ4参考标准剂量仪(西德)测试。峰值电压70kV,电流15mA,总过滤3.2mmA1,有效能量约30keV,照射量率为[10.61士0.00013 JR/min],标距32cm。各剂量乘以换算系数0.884[3]即为吸收剂量。对照组除不接受照射外,条件与照射组相同。
(二) 淋巴细胞微核测定为从实际出发,模拟活体受照的情况或事故后受检的时间处理血样,即受X线照射后的血样,立即置于37C恒温箱内,2小时后,在血样中加入1 / 3血量的0.5%甲基纤维素溶液,充分混匀后置于37℃恒温箱中半小时,吸取上清液,以2000转/分,离心7分钟,弃上清液,取沉淀物涂片,瑞氏液染色。微核判定按全国统标准[4]。每一剂量组计数1 000个细胞,对照组计数20000个细胞。求出微核细胞率和微核率(%o)。
二 结果与讨论(一)X线照射离体人血诱发淋巴细胞微核出现率与剂量效应关系(见表 1,附图1)。
由表 1、附图可知,X线照射剂量在0.05~6.0Gy,照后2小时制片,微核出现率随剂量增加而增加,呈直线关系。用最小二乘法处理微核细胞率、微核率与照射剂量之八间拟合直线回归方程为ŷ1=0.84 +0.64D;人ŷ2=0.96+ 0.64D.ŷ1为微核细胞率,ŷ2为微核率,D为照射剂量(Gy)。经检验,照射剂量与微核细胞率、微核率均呈高度相关,相关系数分别为0.95和0.92,经相关系数显著性检验,回归非常显著(p<0.01)。
(二)两种检测方法与微核出现率之间的关系(见表 2)。
由表 2可知,同一照射剂量,但由于微核检测方法不同,其微核出现率亦不同。本文对比了MC法和76小时培养法。结果表明其微核出现率,后者明显高于前者,分别由正常人的7.4倍,随着剂量的增加可高至40多倍。这可能由于MC法是计数总淋巴细胞的微核出现率,而培养法是用PHA刺激淋巴细胞经转化的淋巴细胞微核计数,所得结果是T淋巴细胞的微核细胞率,可避免不分裂细胞的干扰[5]。五十年代,Evans指出,照射增殖细胞所产生的大多数染色体畸变,都伴有无着丝粒断片,这些新断片由于没有着丝粒,在有丝分裂的后期,不能被纳入子细胞核内,遂在子细胞浆中演变成微核。本文收集经76小时培养的淋巴细胞,据报道[6•7],照射离体外周血,培养后淋巴细胞微核出现率显著高于MC法,建议今后应用微核作为检测指标时,应首选培养法为宜,因为其敏感性明显高于MC法。
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Countryman P I, Heddle J A. The production of micronuclei from chro- mosome aberration in irradiated Cult- ure of human ly mphocytes[J]. Mutet Res, 1976, 41: 321-332. DOI:10.1016/0027-5107(76)90105-6 |
[2] |
山东医科所. 中子(14Mev)、Y射线(6℃o)照射离体人血诱发洙巴细胞微核出现率与剂量之间的关系[J]. 生物化学与生物物理进展, 1980(3): 74-77. |
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