2019, Vol. 39 
肿瘤转移是恶性肿瘤的基本生物学特征，临床上大多数的肿瘤病人死于肿瘤转移而不是原发性肿瘤[1-4]。循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）粘附于血管内皮表面成为肿瘤转移的重要起点。如果能够在形成转移前就用药物干预循环肿瘤细胞（CTCs）对血管内膜的粘附（重要的肿瘤转移的源头步骤之一），就有可能有效地预防肿瘤转移。结肠癌是其中常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，易发生侵袭转移，且预后较差。
NO是一种内源性小分子生物活性物质，在其被确定为血管内皮细胞释放的松弛因子（endothelium-derived relaxing factor，EDRF）后[5-6]，NO的生理病理作用得到了广泛的研究，在1992年被Science命名为“明星分子”。斯诺普利（巯亚硝基卡托普利；S-nitrosocaptopril，Cap-NO）是一种安全有效的NO供体药物，既具有NO的药理特性又具有降压药的特点，即有血管紧张素转化酶抑制剂（Cap）和一氧化氮（NO）的双重药理性质。Cap-NO具有多重药理作用：抑制血管紧张素转化酶，减少血管紧张素Ⅱ的生成[7]；与血管紧张素Ⅱ和肾上腺素类收缩血管的物质起拮抗作用；抑制血小板的聚集[7-8]；松弛呼吸道平滑肌，减少咳喘；轻度地抑制胃肠平滑肌的分泌和运动；对多种的高血压模型有效，包括NOS抑制剂诱发的高血压模型，自发性的、盐敏感性和肾动脉狭窄型的高血压大鼠模型；扩张离体和在体的动物血管，增加血流量[9]；抑制新生血管的生成[10-12]。本文主要探索了Cap-NO干预肿瘤细胞粘附于血管内膜的作用及其作用机制，并探索了Cap-NO释放NO的效率与其干预循环肿瘤细胞药理活性的关系。
1 仪器与试药Kertone Lab Mini-8超纯水设备（英国科尔顿公司）；AR224CN电子分析天平（美国奥豪斯仪器有限公司）；UV 2700紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；Zeiss Axio荧光显微镜（德国蔡司公司）；BD FACS Aria Ⅲ流式细胞仪（美国BD公司）；CFX96 Touch实时荧光定量PCR仪（美国Bio-rad公司）；T100梯度PCR仪（美国Bio-rad公司）。
单克隆抗体（CD54-PE、CD44-APC、CD29-APC、CD166-PE、CD49f-PE、CD49e-PE）均购自美国BD Bioscience公司；ATP检测试剂盒购自美国Perkin Elmer公司；Recombinant human IL-1β购自美国Peprotech公司；0.25%胰酶和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自美国GIBCO公司；罗丹明123、染料DiOC6（3）和McCoy′s 5A培养基均购自美国Sigma-Aldrich公司；青霉素-硫酸链霉素购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司。
Cap-NO由实验室合成：准确称取21.7 mg卡托普利（相对分子质量：217.29）与6.9 mg亚硝酸钠（相对分子质量：69）溶于1 mL的PBS（福州海王福药制药有限公司）中，得到100 mmol·L-1Cap-NO母液，按需要浓度梯度用不同溶剂稀释。Cap-NO的制备和表征及由新生儿脐带分离得到人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的分离与鉴定见文献[13-14]；卡托普利（纯度≥98%，批号62571-86-2，Aladdin）；除特殊说明，所用试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。
2 方法 2.1 Cap-NO基本性能的测定 2.1.1 PBS溶液中Cap-NO、Cap的最大吸收度将Cap-NO、Cap分别溶于PBS中，配制浓度为10 mmol·L-1的标准溶液，测定之前，将紫外可见分光光度计进行调百校准，参比溶液用溶剂PBS调0，在0 h对比Cap-NO、Cap 2种标准溶液在200~850 nm波长范围内的最大吸收度。
2.1.2 在盐酸溶液中，不同浓度的Cap-NO最大吸收度将Cap-NO溶于0.1 mol·L-1盐酸中，配制成0、1、10、100 mmol·L-1浓度梯度，以0.1 mol·L-1盐酸做空白对照，在0 h对比Cap-NO不同浓度溶液在200~850 nm波长范围内的最大吸收度。
2.1.3 在PBS溶液中，不同浓度Cap-NO最大吸收度将Cap-NO溶于PBS溶液中，配制成0、1、10、100 m mol·L-1浓度梯度，以PBS做空白对照，在0 h对比不同浓度溶液在200~850 nm波长范围内的最大吸收度。
2.1.4 在盐酸和PBS溶液中，Cap-NO最大吸收度将Cap-NO分别溶于PBS和0.1 mol·L-1盐酸中，配制成10 mmol·L-1的Cap-NO标准溶液，在0 h对比标准溶液在200~850 nm波长范围内不同溶剂的条件下最大吸收度。
2.1.5 在盐酸溶液中，Cap-NO在不同时间点时的最大吸收度将Cap-NO溶于0.1 mol·L-1盐酸中，配制成10 mmol·L-1的标准溶液，以0.1 mol·L-1盐酸做空白对照，分别于0、4和12 h，对比在不同时间点Cap-NO于200~850 nm波长范围内测定标准溶液最大吸收度。
2.2 细胞粘附实验分析不同浓度的Cap-NO对细胞的粘附抑制能力接种细胞：选取对数生长期且状态良好的HUVECs接种于24孔板，加入500 μL含细胞因子IL-1β（1 ng mL-1）的培养基，另设单独细胞因子对照组与空白培养阴性对照组，于37 ℃，5% CO2培养箱中继续培育4 h，用以激活内皮细胞表面粘附分子的表达。
细胞染色：人结肠癌细胞株HT-29细胞（购自上海细胞库，该细胞为结肠癌细胞，具有较强的转移能力）被培养在含10 % FBS和1 %青霉素/链霉素的McCoy′s 5A培养基中，选取对数生长期的HT-29，用胰酶消化后的悬浮细胞收集于离心管中，1 500r·min-1离心5 min，取1 mL PBS缓冲液吹匀，避光条件下加入3 g·L-1罗丹明123溶液1 μL，室温避光染色20 min。
受试物处理：以PBS配制Cap-NO浓度为100 mmol·L-1一级母液，并用PBS进一步稀释成不同浓度梯度的二级母液5 mmol·L-1，于每孔加入二级母液5 μL和用胰酶消化后的HT-29细胞悬液495 μL，混合均匀加入24孔板中，使受试物终浓度分别为0、0.5、5、50 μmol·L-1，另设无受试药物培养空白对照组，于37 ℃，5% CO2培养箱中继续培养1 h。
荧光拍照：PBS清洗未粘贴的细胞后使用荧光倒置显微镜拍照，统计每孔粘附细胞数。
2.3 MTT法检测细胞生长状况在96孔板中加入100 μL含不同浓度受试物的培养基于各孔中，设无受试药物培养空白对照组、受试药物溶剂对照组，于37 ℃，5% CO2的培养箱中培养24 h后，加入MTT作用4 h终止培养。吸去孔内培养液。每孔加入DMSO 100 μL，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570 nm或者490 nm波长处测量各孔的吸收值，并计算受试物作用后对细胞的抑制率，该实验重复3次。
2.4 流式法检测Cap-NO对肿瘤细胞HT-29表面粘附分子蛋白表达6孔板中接种胰酶消化后的HT-29悬浮细胞，37 ℃，5% CO2的条件下培养24 h，吸去旧培养基，分别加入3 mL新鲜培养基作为空白对照组和1、10、100 μmol·L-1的Cap-NO溶液，继续在37 ℃，5% CO2的培养箱中培养24 h。细胞用PBS清洗2~3次后，每孔加入胰酶500 μL，放入培养箱孵育，约5 min后，加入500 μL含10 % FBS的培养基终止消化，将细胞收集到离心管中，1 500 r·min-1离心5 min，PBS清洗1次。90 μL PBS悬浮细胞加入10 μL CD29、CD49e、CD49f、CD166、CD54、CD44抗体，于4 ℃孵育30 min，PBS清洗2次重悬细胞，用流式细胞仪分别在488 nm和633 nm波长处检测细胞表面的荧光强度。
2.5 qRT-PCR检测Cap-NO对肿瘤细胞HT-29的mRNA表达将HT-29细胞铺于6孔板中，培养过夜后分别加入含0、1、10、100 μmol·L-1 Cap-NO的培养基继续作用12 h。随后提取细胞总RNA，通过qRT-PCR检测HT-29细胞MMP2、HK1、HK2的mRNA转录水平的变化，数据处理和分析：通过2-ΔΔCt法计算各种mRNA相对于内参的表达量。HK1前引物：5′-AATGCTGGGAAACAAAGGT-3′；HK1后引物：5′-AGAGGAATCCCTTCTTGGG-3′。HK2前引物：5′-CCTCGGTTTCCCAACTCTGC-3′；HK2后引物：5′-GCTCCAAGCCCTTTCTCCAT-3′。MMP2前引物：5′-GGCATTCAGGAGCTCTATGG-3′；MMP2后引物：5′-GAGCGATGCCATCAAATACA-3′。GAPDH前引物：5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′；GAPDH后引物：5′-GGAGGCAGGGATGTTCT-3′。
2.6 Cap-NO对HT29细胞ATP合成的影响细胞内ATP通过Pekin-Elemer一步法检测试剂盒进行测定，检测细胞ATP水平。将HT-29细胞使用流式细胞分选仪分选于96孔板中，每孔分选10 000个细胞，培养过夜后分别加入含0、1、10、100 μmol·L-1Cap-NO的培养基继续培养，12 h后在96孔板中每孔加入ATP检测液100 μL，用摇床在400 r·min-1转速下混匀3 min，避免产生气泡，将细胞裂解液转至白色96板中，黑暗条件下，静置10 min。使用多功能酶标仪的Luminescence模块检测自发荧光的强度，根据相对荧光值对比不同细胞ATP水平。
2.7 统计学处理全部数据采用SPSS 19统计软件进行统计分析，数据用均值±标准差（x±s）表示，组间比较用单因素方差分析（One-way ANONA）检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
3 结果 3.1 Cap-NO基本性能的测定图 1为Cap-NO的基本结构。对比Cap-NO和Cap紫外吸收图（图 2）可知，Cap-NO在300 nm附近有最大吸收特征峰，代表Cap-NO的巯亚硝基。图 3表明，随着Cap-NO浓度的增加，其吸收峰值越高，且Cap-NO的最大吸收波长不因为溶剂的变化而发生变化。图 4表明，Cap-NO随着时间的延长，释放的NO越多，当其溶剂在25 ℃室温下存放12 h后，Cap-NO仍具有一定的NO活性，说明Cap-NO可以作为一种有效的NO供体受试物。
|
图 1 Cap-NO结构 Figure 1 The structure of Cap-NO |
|
图 2 Cap-NO与Cap的UV-Vis图谱 Figure 2 UV-Vis spectra of Cap-NO and Cap |
|
A. 10 mmol·L-1 Cap-NO分别溶于PBS和0.1 mol·L-1盐酸(10 mmol·L-1 Cap-NO in PBS and 0.1 mol·L-1 HCl solution, respectively) B.溶于PBS的Cap-NO浓度梯度0.1、1、10、100 mmol·L-1(concentration gradient 0.1, 1, 10, 100 mmol·L-1 Cap-NO in PBS) C.溶于0.1 mol·L-1盐酸的Cap-NO浓度梯度0.1、1、10、100 mmol·L-1 (concentration gradient 0.1, 1, 10, 100 mmol·L-1 Cap-NO in 0.1 mol·L-1 HCl solution) 图 3 Cap-NO在不同溶剂及不同浓度下的UV-Vis图谱 Figure 3 The UV-Vis spectra of Cap-NO under different solvents and concentrations |
|
图 4 在25 ℃室温下放置0、4和12 h后，浓度为10 mmol·L-1的Cap-NO的UV-Vis图谱 Figure 4 UV-Vis spectra of Cap-NO at a concentration of 10 mmol·L-1 after 0, 4 and 12 h at 25 ℃ room temperature |
对HT-29和HUVECs 2种细胞分别进行了研究，但没有对肿瘤细胞粘附于脐静脉内皮细胞进行MTT活性研究。
通过MTT实验结果，可以看出当Cap-NO浓度在0.1~100 μmol·L-1时，对HT-29细胞和内皮细胞并没有特别明显的生长抑制作用（图 5），当其浓度达1 000 μmol·L-1时，2种细胞的存活率可达到70%~80%。通过流式细胞术检测Cap-NO对HT-29细胞周期分布的影响，得到的结果与之前的研究结果[15]一致，即Cap-NO的浓度达到100 μmol·L-1，HT-29细胞的周期分布仍然没有明显的变化。使用DiOC6（3）染料对肿瘤细胞HT-29的线粒体膜电位进行检测发现，只有当Cap-NO的浓度达到1 000 μmol·L-1时，HT-29细胞的线粒体膜电位才有显著性的增强。综上实验结果表明，Cap-NO与传统的抗肿瘤受试物相比具有明显的区别，具有极低的毒副作用，在起显著性药理作用时几乎没有细胞毒性。说明Cap-NO并不是通过细胞毒性和抑制细胞增殖来抑制肿瘤细胞粘附于血管内膜。
|
与对照组比较（compared with the control group），*P < 0.05，**P < 0.01 图 5 MTT检测Cap-NO对HT-29细胞和HUVECs增殖影响 Figure 5 MTT assay the effect of Cap-NO on the proliferation of HT-29 and HUVECs |
实验结果（图 6）说明Cap-NO具有抑制HT-29细胞粘附于内皮细胞的作用，并随着Cap-NO浓度的增高，其抑制作用明显增强。而Cap不具有抑制肿瘤细胞粘附于HUVECs的能力。且当Cap-NO的作用时间为12 h相对于1 h时，其抑制肿瘤细胞粘附于血管内皮细胞的作用具有显著的增强[15]。说明Cap-NO抑制肿瘤细胞粘附于血管内皮细胞的作用可能是由于Cap-NO释放NO分子引起的，且随着作用时间的延长抑制粘附作用明显得到提高。
|
A. Cap-NO和Cap干预HT-29细胞粘附于HUVECs的荧光图(fluorescent images of Cap-NO and Cap interfering with HT-29 to HEVECs) B. Cap-NO和Cap浓度梯度为0、0.5、5、50 μmol·L-1的粘附实验对比(adhesion experiments with Cap-NO and Cap concentration gradients of 0, 0.5, 5, 50 μmol·L-1)与对照组比较（compared with the control group），*P < 0.05，**P < 0.01 图 6 Cap-NO干预结肠癌细胞HT-29粘附于HUVECs的影响 Figure 6 Cap-NO interferes with the adhesion of colon cancer cells HT-29 to HUVECs |
通过流式检测Cap-NO作用后HUVECs和HT-29细胞表面粘附蛋白的表达，Cap-NO通过抑制内皮细胞表面粘附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin蛋白的表达降低内皮细胞的粘附能力[11]，由图 7-A~F所示，Cap-NO能够抑制HT-29细胞表面CD44的表达，但对HT-29细胞表面Integrin β1（CD29）、Integrin α5（CD49e）、Integrin α6（CD49f）、ICAM-1（CD54）和CD166蛋白表达几乎没有影响。说明Cap-NO主要通过抑制内皮细胞粘附分子的表达来调控粘附分子-整合素介导肿瘤细胞和内皮细胞之间的粘附，而对肿瘤细胞表面整合素的表达几乎没有抑制作用。
|
与对照组比较（compared with the control group），*P < 0.05，**P < 0.01 图 7 流式细胞仪分析Cap-NO对HT-29细胞表面CD29（A）、CD49e（B）、CD166（C）、CD49f（D）、CD54（E）、CD44（F）表达的调节作用 Figure 7 Flow cytometry analysis of the expression of CD29(A), CD49e(B), CD166(C), CD49f(D), CD54(E)and CD44(F)on the surface of HT-29 cells by Cap-NO |
通过qRT-PCT检测Cap-NO对HT-29细胞HK1、HK2、MMP2蛋白mRNA转录水平的影响。由图 8-A~C可知Cap-NO能够浓度依赖地抑制HK1、HK2、MMP2蛋白mRNA的转录水平，说明Cap-NO能够降低细胞的侵袭能力和糖酵解代谢能力。因此进一步研究Cap-NO对HT-29细胞ATP合成能力的影响，结果图 8-D证明，Cap-NO能够显著降低HT-29细胞ATP水平。当Cap-NO浓度达到100 μmol·L-1时，HT-29细胞的ATP水平仅为正常细胞的85%左右。由此结果得出，Cap-NO通过抑制HK1/HK2的表达从而有效地抑制肿瘤细胞的糖酵解代谢，降低肿瘤对微环境的适应能力，降低肿瘤细胞的存活能力。
|
与对照组比较（compared with the control group），*P < 0.05，**P < 0.01 图 8 qRT-PCR分析显示Cap-NO抑制HK1（A）、HK2（B）、MMP2（C）的mRNA的水平及Cap-NO下调HT-29细胞内ATP水平（D） Figure 8 qRT-PCR analysis shows that Cap-NO inhibits the mRNA levels of HK1(A), HK2(B), MMP2(C)and Cap-NO down-regulates ATP level in HT-29 cells(D) |
目前，国内外实体肿瘤治疗的现状和现存缺陷：原发肿瘤可通过外科手术切除或放射治疗，但肿瘤转移后很难用上述手段治疗，传统的“抗癌药”就失去了效果。肿瘤病人在手术切除后的早期没有可预防将来循环肿瘤细胞（CTCs）的粘附和外渗，抑制肿瘤转移的药物。
NO是一种脂溶性和水溶性的自由基分子，自由扩散，可迅速地与周围的分子发生反应，产生局部作用，生理半衰期不到30 s。NO最早是在心血管系统识别的[16]，其具有舒张平滑肌和调节血压的作用[17-20]；NO还可抑制血管细胞粘附分子（VCAM-1）[21-22]和细胞间粘附分子（ICAM-1）表达[23]，当其与过氧化物反应后，可以导致血栓素的合成减少[24]，并可通过激活鸟苷酸环化酶来抑制血小板的活化[10]；外源性的NO还可以抑制肿瘤血管的生成[13]。实验结果表明，Cap-NO（亚硝基卡托普利）为一种有效的NO供体受试物，其NO有效作用时长达到12 h以上：一方面Cap-NO可以降低内皮细胞CAMs的表达降低内皮细胞被粘附的几率，另一方面下调肿瘤细胞的己糖激酶HK1/HK2的表达与ATP的形成，抑制肿瘤细胞糖酵解氧化代谢的作用，同时在微环境中Cap-NO可以抑制血小板的活化与抗凝血的作用[15]，且在有效的剂量范围内，Cap-NO具有极低的细胞毒性。Cap-NO在大鼠上测定的口服生物利用度为22%~25%，其在大鼠体内的吸收、代谢和排泄过程已很清楚[14]；它还可以增加紫杉醇的跨膜转运能力，可以提高其在肿瘤细胞内的含量[25]，并可通过增加肿瘤的血流量和耗氧量使肿瘤的放射治疗效果加强[26]；还可以降低眼内压并增加眼液流出[27-28]。
现有临床上使用的抗肿瘤药具有极高的细胞毒性，肿瘤患者在使用这些抗肿瘤药物时需要忍受药物所带来的毒副作用，承受极大的痛苦。因此，当前的研究Cap-NO具有抑制肿瘤细胞粘附于内皮细胞的功能且本身低毒性，这为我们提供了创新的抗肿瘤转移药物研发思路。
| [1] |
KAISER J.Medicine. Cancer's circulation problem[J]. Science, 2010, 327(5969): 1072. DOI:10.1126/science.327.5969.1072 |
| [2] |
YANG J, WEINBERY RA. Epithelial-mesenchymal transition:at the crossroads of development and tumor metastasis[J]. Dev cell, 2008, 14(6): 818. DOI:10.1016/j.devcel.2008.05.009 |
| [3] |
YABROFF KR, WARREN JL, BROWN ML. Costs of cancer care in the USA:a descriptive review[J]. Nat Clin Pract Oncol, 2007, 4(11): 643. DOI:10.1038/ncponc0978 |
| [4] |
LOBERG RD, BRADLEY DA, TOMLINS SA, et al. The lethal phenotype of cancer:the molecular basis of death due to malignancy[J]. CA Cancer J Clin, 2007, 57(4): 225. DOI:10.3322/canjclin.57.4.225 |
| [5] |
FURCHGOTT RF, ZAWADZKI JV. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine[J]. Nature, 1980, 288(5789): 373. DOI:10.1038/288373a0 |
| [6] |
FURCHGOTT RF. Role of endothelium in responses of vascular smooth muscle[J]. Circ Res, 1983, 53(5): 557. DOI:10.1161/01.RES.53.5.557 |
| [7] |
LOSCALZO J, SMICK D, ANDON N, et al. S-nitrosocaptopril.Ⅰ.Molecular characterization and effects on the vasculature and on platelets[J]. J Pharmacol Exp Ther, 1989, 249(3): 726. |
| [8] |
AMANO M, TAKAHASHI M, KOSAKA T, et al. Differential inhibition of platelet aggregation and calcium mobilization by nitroglycerin and stabilized nitric oxide[J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1994, 24(6): 860. DOI:10.1097/00005344-199424060-00002 |
| [9] |
LIN MJ, YANG XP, WANG J, et al. Inhibitory effects of S-nitrosocaptopril on vasomotor tone[J]. Acta Pharmacol Sin, 1998, 19(5): 485. |
| [10] |
RADOMSKI MW, PALMER RM, MONCADE S. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1990, 87(13): 5193. DOI:10.1073/pnas.87.13.5193 |
| [11] |
LIAN S, LU Y, CHENG Y, et al. S-nitrosocaptopril interrupts adhesion of cancer cells to vascular endothelium by suppressing cell adhesion molecules via inhibition of the NF-small ka, Cyrillic B and JAK/STAT signal pathways in endothelial cells[J]. Eur J Pharmacol, 2016, 791: 62. DOI:10.1016/j.ejphar.2016.08.018 |
| [12] |
LU Y, LIANG H, YU T, et al. Isolation and characterization of living circulating tumor cells in patients by immunomagnetic negative enrichment coupled with flow cytometry[J]. Cancer, 2015, 121(17): 3036. DOI:10.1002/cncr.29444 |
| [13] |
JIA L, WU CC, GUO W, et al. Antiangiogenic effects of S-nitrosocaptopril crystals as a nitric oxide donor[J]. Eur J Pharmacol, 2000, 391(1-2): 137. DOI:10.1016/S0014-2999(99)00794-3 |
| [14] |
JIA L, YOUNG X, GUO W. Physicochemistry, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of S-nitrosocaptopril crystals, a new nitric oxide donor[J]. J Pharm Sci, 1999, 88(10): 981. DOI:10.1021/js990108g |
| [15] |
LU Y, YU T, LIANG H, et al. Nitric oxide inhibits hetero-adhesion of cancer cells to endothelial cells:restraining circulating tumor cells from initiating metastatic cascade[J]. Sci Rep, 2014, 4: 4344. |
| [16] |
FURCHGOTT RF, ROBERT F. Furchgott:a pharmacologist's pharmacologist[J]. Mol Interv, 2004, 4(2): 74. DOI:10.1124/mi.4.2.2 |
| [17] |
JIA L, FURCHGOTT RF. Inhibition by sulfhydryl compounds of vascular relaxation induced by nitric oxide and endothelium-derived relaxing factor[J]. J Pharmacol Exp Ther, 1993, 267(1): 371. |
| [18] |
LI J, LIU XJ, FURCHGOTT RF. Blockade of nitric oxide-induced relaxation of rabbit aorta by cysteine and homocysteine[J]. Acta Pharmacol Sin, 1997, 18(1): 11. |
| [19] |
JIA L, STAMLER JS. Dual actions of S-nitrosylated derivative of vasoactive intestinal peptide as a vasoactive intestinal peptide-like mediator and a nitric oxide carrier[J]. Eur J Pharmacol, 1999, 366(1): 79. |
| [20] |
JIA L, WONG H. In vitro and in vivo assessment of cellular permeability and pharmacodynamics of S-nitrosylated captopril, a nitric oxide donor[J]. Br J Pharmacol, 2001, 134(8): 1697. DOI:10.1038/sj.bjp.0704431 |
| [21] |
KHAN BV, HARRISON DG, OLBRYCH MT, et al. Nitric oxide regulates vascular cell adhesion molecule 1 gene expression and redox-sensitive transcriptional events in human vascular endothelial cells[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1996, 93(17): 9114. DOI:10.1073/pnas.93.17.9114 |
| [22] |
TSAO PS, BUITRAGO R, CHAN JR, et al. Fluid flow inhibits endothelial adhesiveness.Nitric oxide and transcriptional regulation of VCAM-1[J]. Circulation, 1996, 94(7): 1682. DOI:10.1161/01.CIR.94.7.1682 |
| [23] |
de CATERINA R, LIBBY P, PENG HB, et al. Nitric oxide decreases cytokine-induced endothelial activation.Nitric oxide selectively reduces endothelial expression of adhesion molecules and proinflammatory cytokines[J]. J Clin Invest, 1995, 96(1): 60. DOI:10.1172/JCI118074 |
| [24] |
LOSCALZO J. Nitric oxide insufficiency, platelet activation, and arterial thrombosis[J]. Circ Res, 2001, 88(8): 756. DOI:10.1161/hh0801.089861 |
| [25] |
JIA L, SCHWEIZER J, WANG Y, et al. Effect of nitric oxide on cytotoxicity of Taxol:enhanced Taxol transcellular permeability[J]. Biochem Pharmacol, 2003, 66(11): 2193. DOI:10.1016/j.bcp.2003.07.013 |
| [26] |
JORDAN BF, PEETERBROECK J, KARROUM O, et al. Captopril and S-nitrosocaptopril as potent radiosensitizers:comparative study and underlying mechanisms[J]. Cancer Lett, 2010, 293(2): 213. DOI:10.1016/j.canlet.2010.01.016 |
| [27] |
KOTIKOSKI H, KANKURI E, VAPAATALO H. Incubation of porcine iris-ciliary bodies to study the mechanisms by which nitric oxide donors lower intraocular pressure[J]. Med Sci Monit:Int Med J Exp Clin Res, 2003, 9(1): BR1. |
| [28] |
KOTIKOSKI H, VAPAATALO H, OKSALA O. Nitric oxide and cyclic GMP enhance aqueous humor outflow facility in rabbits[J]. Curr Eye Res, 2003, 26(2): 119. DOI:10.1076/ceyr.26.2.119.14511 |